基本信息
- 項目名稱：
- 冰片對LPS誘導THP-1細胞產(chǎn)生TNF-α的影響
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 本項目通過以天然右旋冰片干預LPS刺激下的THP-1細胞炎癥模型，并以L929細胞株檢測法測定其TNF-α的分泌量，發(fā)現(xiàn)冰片干預下可使LPS致炎的巨噬細胞的TNF-α分泌量顯著降低，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用機制可能與抑制巨噬細胞的TNF-α分泌有關。
- 詳細介紹：
- 本項目旨在探討中藥天然右旋冰片對脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激后的THP-1巨噬細胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）的影響。 通過培養(yǎng)人類單核白血病細胞株——THP-1細胞，在佛波酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA）作用下分化為巨噬細胞。以LPS刺激細胞造炎癥細胞模型，加入天然右旋冰片進行干預，以地塞米松作為陽性對照，L929細胞株檢測法測定其上清液中TNF-α的含量。 結果：LPS刺激PMA分化后的THP-1細胞，其TNF-α含量明顯升高（與正常對照組相比P<0.01）,冰片干預下可使LPS致炎的巨噬細胞的TNF-α分泌量顯著降低（與炎癥模型組相比P<0.01），可使其分泌量恢復至正常水平（與正常對照組相比P>0.05），其作用效果優(yōu)于實驗濃度下的經(jīng)典抗炎藥物——地塞米松（與正常對照組相比P<0.05）。 結論：中藥天然右旋冰片可通過顯著降低LPS刺激下巨噬細胞的TNF-α分泌量，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用機制可能與抑制巨噬細胞的TNF-α分泌有關。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：探討中藥天然右旋冰片對脂多糖刺激后的THP-1巨噬細胞產(chǎn)生TNF-α的影響。 基本思路：利用人類單核白血病細胞株THP-1細胞，在 PMA作用22.5h后分化為巨噬細胞，以LPS刺激細胞造炎癥細胞模型，30min后加入天然右旋冰片進行干預，以地塞米松作為陽性對照，作用1h后收集培養(yǎng)上清液，L929細胞株檢測法測定其TNF-α的含量。
科學性、先進性及獨特之處
- 科學性： 1、L929細胞株對TNF-α的敏感性得到科研工作者認可；2、實驗中使用陽性對照，有效地評價了冰片對THP-1釋放TNF-α影響；4、實驗過程中，反復考察培養(yǎng)環(huán)境及其他影響因素對實驗的影響，使結果更準確可靠。 先進性與獨特之處： 1、首創(chuàng)使用體外細胞實驗檢測冰片對LPS誘導THP-1細胞產(chǎn)生TNF-α的影響
應用價值和現(xiàn)實意義
- 1、鑒于冰片在臨床中的大量使用，本實驗結果可以知道臨床用藥； 2、通過研究數(shù)據(jù)表明，冰片具有較好的抑制巨噬細胞分泌TNF-α，可為以后TNF-α的中藥抑制劑開發(fā)提供先導化合物； 3、證實了前人抗炎實驗結果猜想的科學性。
學術論文摘要
- 目的：探討中藥天然右旋冰片對脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激后的THP-1巨噬細胞產(chǎn)生TNF-α的影響。 方法：培養(yǎng)人類單核白血病細胞株——THP-1細胞，在PMA作用下分化為巨噬細胞。PMA作用22.5h后，以LPS刺激細胞造炎癥細胞模型，30min后加入天然右旋冰片進行干預，以地塞米松作為陽性對照，作用1h后收集培養(yǎng)上清液，L929細胞株檢測法測定其TNF-α的含量。結果：LPS刺激PMA分化后的THP-1細胞，其TNF-α含量明顯升高,冰片干預下可使LPS致炎的巨噬細胞的TNF-α分泌量顯著降低，可使其分泌量恢復至正常水平，其作用效果優(yōu)于實驗濃度下的經(jīng)典抗炎藥物——地塞米松。結論：中藥天然右旋冰片可通過顯著降低LPS刺激下巨噬細胞的TNF-α分泌量，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用機制可能與抑制巨噬細胞的TNF-α分泌有關。
獲獎情況
- 無
鑒定結果
- 無
參考文獻
- ［1］王術玲．小檗堿聯(lián)合厚樸酚對THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞的干預 ［2］魏楚蓉．冰片的藥理作用及其機制研究進展［4］ 王棋文，宋德榮，李劍勇，等．抗炎藥物及作用機理最新研究進展 ［3］ Bashar S，Bernadette S A，Walid B，et al．Hypericum triquetrifolium-Derived Factors Downregulate the Production Levels of LPS-Induced Nitric Oxide and Tumor Necrosis Factor-α in THP-1 Cells ［4］李瑋，王秀麗，王青，等．熟地黃水提液對小鼠單核細胞分泌TNF-α的影響 ［5］譚立軍，陳新宇，張嵐，等．DMSO和As2O3對人食管癌細胞增殖的抑制作用 ［6］ Li Y，JinBo Y， Jia C，et al． Enhancement of human ACAT1 gene expression to promote the macrophagederived foam cell formation by dexamethasone ［7］ Jung-Ae K，Chang-Suk K，Sang Y，et al．Phosphorylated glucosamine inhibits the in?ammatory response in LPS-stimulated PMA-differentiated THP-1 cells 潘華新，王培訓，周聯(lián)，等．清熱、活血類中藥有效成分對THP-1巨噬泡沫細胞形成及分泌IL-1β、TNF-α的影響
同類課題研究水平概述
- 1.1冰片抗炎活性的研究現(xiàn)狀 夏忠玉等研究發(fā)現(xiàn)口服冰片能明顯抑制巴豆油引起的小鼠耳腫脹及醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性增加，明顯延長熱刺激引起小鼠痛反應時間，減少化學刺激引起的小鼠扭體次數(shù)。孫曉萍等研究發(fā)現(xiàn)采用冰片治療，抗足跖腫脹作用在30-60min內(nèi)達到效應高峰2-4h中效應并不明顯，推測與冰片抑制炎癥前期的炎癥介質有關，而對熱板法致痛的鎮(zhèn)痛效應較之扭體法作用更為明顯，推測冰片的鎮(zhèn)痛機制在于外周鎮(zhèn)痛，可能與抑制炎性介質有關，但并未深入研究。何曉靜等研究發(fā)現(xiàn)冰片可抑制大鼠腦缺血再灌注損傷時IL-1β及TNF-α等炎癥因子的表達，推測冰片對腦缺血再灌注損傷后急性炎癥反應的抑制作用可能是其發(fā)揮腦保護作用的重要機制之一。Juhas等亦發(fā)現(xiàn)冰片可使TNBS誘導的ICR小鼠表達IL-1 β、IL-6 及TNF-α等細胞因子的mRNA的量明顯減少。 1.2THP-1細胞炎癥模型及TNF-α測定方法的研究現(xiàn)狀 目前常用于細胞抗炎活性藥理實驗的細胞有人THP-1細胞株、小鼠RAW 264.7細胞株、小鼠腹腔巨噬細胞等?？紤]到采用人類細胞進行疾病研究比動物細胞更好，故許多文獻報道運用THP-1細胞來進行藥物抗炎活性研究。THP-1細胞， 經(jīng)PMA誘導后，可分化為巨噬細胞，以LPS刺激巨噬細胞可建立細胞炎癥模型，促進其細胞分泌TNF-α及IL-1。 L929細胞株檢測法是檢測TNF-α的常用方法之一。該法以靶細胞殺傷作用為原理，具有高敏感性，特異性較免疫學檢測法低，可能受其他物質的干擾，但通過實驗設計可盡可能消除干擾，結果可靠，被廣泛應用于國內(nèi)外免疫及炎癥藥理等實驗中。葛迎春等以LPS刺激小鼠腹腔巨噬細胞，并分別以小鼠胸腺細胞增殖法測定培養(yǎng)上清液中IL-1的含量，以L929細胞株檢測法測定培養(yǎng)上清液中TNF-α的量，結果顯示L929細胞株在TNF-α的測定中基本不受IL-1的影響。王文良等以L929細胞株檢測法及ELISA方法檢測THP-1細胞TNF-α的分泌量時，通過相關性比較發(fā)現(xiàn)L929細胞株檢測法測定TNF-α的結果與ELISA法測定結果一致。故可通過L929細胞株檢測法半定量地反映出LPS誘導的THP-1細胞TNF-α的分泌量。
