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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 芳香避穢類中藥抗流感病毒的篩選研究
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 中醫(yī)自古有“芳香避穢”的療法。中醫(yī)理論認(rèn)為，氣味可通口、鼻等孔竅入體內(nèi)，調(diào)臟腑，祛病強(qiáng)身。現(xiàn)代研究也證實(shí)：芳香氣味可促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生，增強(qiáng)抵抗力，也能調(diào)節(jié)新陳代謝。本課題據(jù)此中醫(yī)理論，選用古籍常用的廣藿香、野菊花、防風(fēng)等五味藥為對(duì)象，進(jìn)行抗流感病毒的篩選研究，并對(duì)其不同提取部位進(jìn)行抗流感病毒有效部位篩選研究。本項(xiàng)目的實(shí)施，將提供應(yīng)對(duì)流感危機(jī)的現(xiàn)代中藥，為中藥防治流感提供科學(xué)的依據(jù)。
- 詳細(xì)介紹：
- 一、前言 流感在全球范圍內(nèi)迅速傳播，已成當(dāng)前第一大傳染性疾病，它的防治是我們當(dāng)前面臨的最大問(wèn)題之一 ，有的化學(xué)藥品雖有療效，但毒副作用大，而中藥是多成分、多途徑和多靶點(diǎn)的作用，且毒副作用小，因此，中藥治療流感有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì) 。而中醫(yī)自古便有“芳香辟穢” 的治療方法。中醫(yī)理論認(rèn)為， 氣味可以通過(guò)口、鼻、皮毛等孔竅進(jìn)入體內(nèi)，進(jìn)而影響五臟的功能。芳香宜人的氣味可以平衡氣血，調(diào)和臟腑，祛病強(qiáng)身?，F(xiàn)代研究也證實(shí)：芳香宜人的氣味分子可以促進(jìn)人體免疫球蛋白的產(chǎn)生，增強(qiáng)身體抵抗力，同時(shí)能調(diào)節(jié)全身新陳代謝，平衡神經(jīng)功能。本課題根據(jù)這一中醫(yī)理論，選用古籍中常用的廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭等五味芳香類藥物為研究對(duì)象，進(jìn)行抗流感病毒作用的篩選研究，并對(duì)具有抗流感病毒作用的中藥的不同提取部位進(jìn)行抗流感病毒有效部位的研究，篩選出其有效部位。 本課題在“芳香避穢”的中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，用現(xiàn)代的技術(shù)和方法，體內(nèi)篩選出具有抗流感病毒作用的芳香性中藥，并對(duì)具有抗流感病毒的芳香性中藥的不同提取部位進(jìn)行有效部位的體內(nèi)抗流感病毒的篩選。 二、研究方案 1．研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 1.1 研究?jī)?nèi)容及目標(biāo) 本課題根據(jù)這“芳香辟穢”一中醫(yī)理論，選用古籍中常用的廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭等五味芳香類藥物為研究對(duì)象，進(jìn)行抗流感病毒作用的篩選研究，并對(duì)具有抗流感病毒作用的中藥的不同提取部位進(jìn)行抗流感病毒有效部位的研究，篩選出其有效部位。 2．?dāng)M采取的研究方法、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析 2.1芳香性中藥的抗病毒的篩選 2.1.1受試藥物 廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭、莪術(shù),病毒唑。 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 NIH小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重13-15g。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫23?2℃，相對(duì)濕度為75?10%。 2.1.3 實(shí)驗(yàn)病毒 甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株由廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱研所病毒室提供，給小鼠增強(qiáng)毒力后，于雞胚尿囊腔傳代2次。并測(cè)定其半數(shù)致死量，-70℃保存，用前流水浸融。 2.1.4實(shí)驗(yàn)儀器 Sanyo日本；精密電子分析天平，F(xiàn)A/JA系列，上海良平儀器儀表有限公司；乙醚，天津化學(xué)試劑有限公司；0.9%生理鹽水，開(kāi)開(kāi)緣生物制藥有限公司；平皿、解剖剪，眼科鑷，一次性注射器等。 2.1.五味芳香類中藥體內(nèi)抗H1N1流感病毒的篩選研究 （1）五味芳香類中藥對(duì)小鼠H1N1流感病毒性肺炎的影響 將小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物組（病毒唑）、病毒對(duì)照組（即模型組）、廣藿香提取物組、野菊花提取物組，防風(fēng)提取物組、佩蘭提取物組、莪術(shù)提取物組，除正常對(duì)照組外，每組10只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株15個(gè)LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1 d開(kāi)始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4 d，病毒感染對(duì)照組以等體積蒸餾水灌胃。第5天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實(shí)變的程度，摘取全肺稱重，與體重計(jì)算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)與抑制率。 肺指數(shù)=（鼠肺重/小鼠體重）*100% 肺指數(shù)抑制率=（對(duì)照組平均肺指數(shù)-實(shí)驗(yàn)組平均肺指數(shù)）/對(duì)照組平均肺指數(shù)*100%。 （2）五味芳香類中藥對(duì)H1N1型流感病毒小鼠的死亡保護(hù)實(shí)驗(yàn) 把小鼠隨機(jī)分成陽(yáng)性藥物組（病毒唑）、病毒對(duì)照組（即模型組）、廣藿香提取物組、野菊花提取物組，防風(fēng)提取物組、佩蘭提取物組、莪術(shù)提取物組，每組15只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株5個(gè)LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1d開(kāi)始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)12d，病毒感染對(duì)照組以等體積蒸餾水灌胃。逐日觀察動(dòng)物發(fā)病癥狀與死亡數(shù)，共觀察15d。計(jì)算死亡率、保護(hù)率、平均存活天數(shù)及生命延長(zhǎng)率。 死亡保護(hù)率=（病毒對(duì)照組死亡率—死亡組死亡率）/病毒對(duì)照組死亡率*100% 生命延長(zhǎng)率=（試驗(yàn)組平均存活天數(shù)—-病毒對(duì)照組平均存活天數(shù)）/病毒對(duì)照組平均存活天數(shù)*100% 2.1.6具有體內(nèi)抗H1N1流感病毒的中藥有效部位的篩選研究 （1）樣品的制備 對(duì)具有抗H1N1型流感病毒的芳香性的中藥的不同提取部位進(jìn)行體內(nèi)的抗病毒的篩選，優(yōu)選藥材，利用 SFE-CO2工藝抽提脂溶性成分 A，；用乙醇作夾帶劑改變 SFE-CO2工藝條件抽提脂溶性成分 B，藥渣用水超聲提取后再用凍干制粉得水溶性成分 C。 （2）不同提取部分對(duì)小鼠H1N1流感病毒性肺炎的影響 將小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物組（病毒唑）、病毒對(duì)照組（即模型組）、提取物A組、提取物B組，提取物C組，除正常對(duì)照組外，每組10只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株15個(gè)LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1 d開(kāi)始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4 d，病毒感染對(duì)照組以等體積蒸餾水灌胃。第5天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實(shí)變的程度，摘取全肺稱重，與體重計(jì)算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)與抑制率。 （3）不同提取部分對(duì)H1N1型流感病毒小鼠的死亡保護(hù)實(shí)驗(yàn) 小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥物組（病毒唑）、病毒對(duì)照組（即模型組）、提取物A組、提取物B組，提取物C組，每組15只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株5個(gè)LD50 病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0.05 mL。從感染前1d開(kāi)始按0.1 mL/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)12d，病毒感染對(duì)照組以等體積蒸餾水灌胃。逐日觀察動(dòng)物發(fā)病癥狀與死亡數(shù)，共觀察15d。計(jì)算死亡率、保護(hù)率、平均存活天數(shù)及生命延長(zhǎng)率。 2.3可行性分析 2.3.1嶺南被歷代醫(yī)家稱為“障疫之地”,尋求一種有效，簡(jiǎn)單的抗病毒方法十分必要 芳香性味中藥常用于中藥膠囊或者煎劑，用來(lái)治療因病毒而引起的流行性感冒，更能達(dá)到防治疾病的作用；而現(xiàn)在大多數(shù)醫(yī)院的室內(nèi)消毒不僅運(yùn)用現(xiàn)代的紫外消毒和化學(xué)消毒外，更有用芳香藥物，如蒼術(shù)煙熏防治細(xì)菌、病毒。本課題主要進(jìn)行芳香味藥物的抗病毒的篩選，這對(duì)今后的防治醫(yī)學(xué)范疇?wèi)?yīng)該會(huì)起到積極性的作用。 2.3.2嶺南醫(yī)家一直致力于研究抗病毒研究，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn) 南粵一直以來(lái)都是世界流感流行的疫源之一，2003年的第一例非典型肺炎（SARS）在廣東首次發(fā)下，2005年禽流感首次感染人類發(fā)生在香港，在于病毒做持久站的嶺南醫(yī)家，在抗病毒研究領(lǐng)域有著豐富的臨床用藥經(jīng)驗(yàn)，形成了一整套獨(dú)特的抗病毒體系。本次研究所用的芳香藥物，一直以來(lái)都被多數(shù)醫(yī)家關(guān)注，而且組方療效確切。 2.3.3廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心申報(bào)了多個(gè)抗流感病毒的專利，有條件落實(shí)本項(xiàng)研究的具體項(xiàng)目 廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥中心一直以來(lái)專注于抗病毒的研究，以建立完善的體內(nèi)、體外的病毒篩選方法，可以為本次研究提供必要的技術(shù)與理論支持。
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撰寫(xiě)目的和基本思路
- 通過(guò)查閱古籍和相關(guān)文獻(xiàn)及借鑒現(xiàn)代醫(yī)家對(duì)防治流感病毒的經(jīng)驗(yàn)，選擇常用于防治流感病毒的具有芳香性中藥為研究對(duì)象，用超臨界萃取等方法進(jìn)行提取，得到芳香藥物的不同提取部位，采用體內(nèi)抗病毒篩選實(shí)驗(yàn)方法，篩選出具有抗流感病毒作用的有效部位。課題的主要目的是為深入研究中藥抗流感病毒的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為中藥安全、科學(xué)的應(yīng)用于防治流感提供科學(xué)依據(jù)，實(shí)現(xiàn)中藥的現(xiàn)代化。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 以“芳香辟穢”中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，用超臨界萃取等科學(xué)方法和先進(jìn)儀器，選芳香藥物不同提取部位進(jìn)行抗病毒研究，篩選出有效部位。根據(jù)古籍記載和現(xiàn)代醫(yī)家防治流感的經(jīng)驗(yàn)，選常用芳香性中藥來(lái)研究，使實(shí)驗(yàn)具有可行性，且此次研究可作為有效部位體內(nèi)篩選的模板，且中藥有多成分、多途徑和多靶點(diǎn)的作用，毒副作用小，因此，中藥治療流感有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 嶺南被歷代醫(yī)家稱為“障疫之地”,尋求一種有效，簡(jiǎn)單的抗病毒方法十分必要。芳香性中藥抗病毒療效確切，不僅能治療流行性感冒，更能防治疾?。换瘜W(xué)藥雖療效好，但毒副作用大，而中藥是多成分、多途徑和多靶點(diǎn)作用，且毒副作用小，因此中藥治療流感有獨(dú)特優(yōu)勢(shì) 。本課題對(duì)芳香味藥物進(jìn)行篩選，篩選出廣藿香和野菊花的有效部位；本項(xiàng)目的實(shí)施，將提供應(yīng)對(duì)流感危機(jī)的現(xiàn)代中藥，為中藥安全、科學(xué)的應(yīng)用于防治流感提供科學(xué)依據(jù)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：對(duì)廣藿香、野菊花、防風(fēng)、佩蘭、莪術(shù)五味芳香類中藥進(jìn)行抗H1N1流感病毒的篩選研究，并對(duì)篩選出具有抗H1N1流感病毒中藥的不同提取部位進(jìn)行有效部位研究。方法：通過(guò)建立小鼠H1N1流感病毒性肺炎模型和小鼠死亡模型，篩選出廣藿香、野菊花、防風(fēng)等五味藥芳香類中藥中具有抗流感病毒作用的中藥，并研究具有抗流感病毒中藥的不同提取部位對(duì)小鼠肺指數(shù)和死亡保護(hù)的影響，確定抗流感病毒的有效部位。結(jié)果：與病毒對(duì)照組比較，廣藿香能明顯降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指數(shù)（P<0.01）、野菊花能降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指數(shù)（P<0.05），其他幾味中藥作用不顯著。不同提取部位的研究中，廣藿香提取物A (廣藿香油部位)和野菊花提取物A能顯著降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指數(shù)（P<0.01）；廣藿香提取物A (廣藿香油部位)能顯著延長(zhǎng)生存時(shí)間（P<0.01），廣藿香提取物B、野菊花提取物A能延長(zhǎng)生存時(shí)間（P<0.05），其余各組均能延長(zhǎng)生存時(shí)間，但與正常對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。結(jié)論：廣藿香提取物A(廣藿香油部位)、廣藿香提取物B和野菊花提取物A具有一定的抗H1N1流感病毒的作用。
獲獎(jiǎng)情況
- 2011年，《廣藿香不同提取部位體內(nèi)抗流感病毒作用研究》發(fā)表在《時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥》雜志上。
鑒定結(jié)果
- 本課題篩選出廣藿香和野菊花具有抗流感病毒作用，并對(duì)其不同提取部位進(jìn)行抗流感病毒研究，篩選出廣藿香提取物A(廣藿香油部位)、廣藿香提取物B和野菊花提取物A具有抗流感病毒的作用。
參考文獻(xiàn)
- [1].任守忠，靳德軍，張俊清，等. 廣藿香藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006,8（8）：27. [2]嚴(yán)銀芳等.石香薷揮發(fā)油對(duì)流感病毒的抑制作用[J]. 微生物學(xué)雜志2002年1月第22卷第1期. [3]夏泉等. 莪術(shù)油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2004年03月20日（3）. [4]胡興昌,鄭偉強(qiáng)．板藍(lán)根粗提液抑制流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究[J]．上海師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2003，32(1)：62． [5]胡克杰,孫考祥，王璐,等．綠原酸體外抗病毒作用研究[J]．哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，35(6)：430．
同類課題研究水平概述
- 目前抗流感病毒藥物分為兩類：一是臨床常用的抗流感病毒西藥。其又包括了M2離子通道蛋白抑制劑和神經(jīng)氨酸酶(NA)抑制劑。M2離子通道蛋白抑制劑是長(zhǎng)期以來(lái)惟一的一類抗流感病毒藥物，包括1966年上市的金剛和1987年上市的金剛乙胺。金剛烷胺和金剛乙胺可以通過(guò)阻斷M2離子通道蛋白阻止病毒脫殼，使病毒RNA不能釋放到細(xì)胞質(zhì)中，病毒的早期復(fù)制被中斷，從而起到抗流感病毒的作用。神經(jīng)氨酸酶(NA)抑制劑20世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)了流感A和B型病毒NA的晶體結(jié)構(gòu)，直到1983年才首次公布了流感A和B各亞型病毒NA的共有保守序列，繼而通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，成功的合成出2個(gè)NA抑制劑扎那米韋和奧司他，兩藥于1999年幾乎同時(shí)上市，為漫長(zhǎng)的抗流感病毒藥物研究開(kāi)創(chuàng)了新紀(jì)元。其優(yōu)點(diǎn)在于高效、低毒、極少產(chǎn)生耐藥性，而且對(duì)A和B各亞型流感病毒均有效。扎那米韋與奧司他韋都為唾液酸類似物，以酶和底物的作用形式與NA中的保守序列結(jié)合而使NA失活。鹽酸嗎琳胍(病毒靈)，利巴韋林(病毒唑)和阿比朵爾也是我國(guó)臨床常用的抗流感病毒藥物。二是抗流感病毒的中藥。其又包括了抗流感病毒的單味中藥和復(fù)方中藥或中成藥?？沽鞲胁《镜膯挝吨兴幯芯看蠖鄶?shù)為清熱解毒類中藥，所含成分復(fù)雜，目前已經(jīng)研究比較清楚的成分主要有兩類：一類是多酚類物質(zhì)，不僅可以抑制流感病毒蛋白質(zhì)和RNA合成，同時(shí)也可抑制流感病毒的吸附作用；另一類是黃酮類物質(zhì)，它能夠抑制流感病毒唾液酸酶的活性和抑制膜融合作用。胡興昌等用丙酮脫脂提取板藍(lán)根生藥的凝集素對(duì)流感病毒進(jìn)行的體外抑制試驗(yàn)結(jié)果表明，板藍(lán)根凝集素對(duì)流感病毒具有顯著的直接殺滅作用和預(yù)防作用及較好的治療用，并且抑制流感病毒的效果與板藍(lán)根凝集素血凝活性的高低相關(guān)。柴胡對(duì)雞胚內(nèi)流感病毒的增殖有顯著抑制作用。 但目前對(duì)芳香類藥物的揮發(fā)油成分治療流感的研究并不多：倪文澎等人研究發(fā)現(xiàn)荊芥穗揮發(fā)油具有抗甲型流感病毒的作用。 麻葉千里光揮發(fā)油對(duì)呼吸道合胞病毒和單純皰疹病毒I型有顯著抑制作用，能不同程度地延緩副流感病毒、柯薩奇病毒B、腺病毒Ⅲ型和流感病毒致細(xì)胞病變作用。陳建偉等人的實(shí)驗(yàn)以甲型流感病毒滴鼻感染小鼠，觀察神術(shù)散及其組成藥味的不同提取物對(duì)甲型流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用。嚴(yán)銀芳等人通過(guò)體內(nèi)外試驗(yàn)證明石香薷揮發(fā)油對(duì)流感病毒的抑制作用。 夏泉等通過(guò)體內(nèi),外實(shí)驗(yàn)研究莪術(shù)油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒的作用。
