基本信息
- 項目名稱：
- 豬卵母細胞孤雌激活中電激活參數(shù)及培養(yǎng)體系的研究
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 作品對豬卵母細胞孤雌激活參數(shù)和培養(yǎng)液對孤雌胚胎發(fā)育的影響進行了研究，實驗中設定了不同脈沖電壓，脈沖持續(xù)時間，脈沖次數(shù)，對體外成熟卵母細胞進行電激活，采用了PZM3和NCSU23培養(yǎng)液體外培養(yǎng)孤雌激活胚胎，對比不同電激活參數(shù)和培養(yǎng)液對豬卵母細胞的影響。綜上所述，在脈沖電壓為150v/mm、脈沖持續(xù)時間為100μs，脈沖次數(shù)為1次的電激活條件下，豬卵母細胞孤雌激活的效果最佳。
- 詳細介紹：
- 本研究為優(yōu)化電激活和胚胎培養(yǎng)的相關技術體系，開展了電激活參數(shù)和培養(yǎng)液對豬卵母細胞孤雌胚胎發(fā)育的影響研究。結果表明，在脈沖持續(xù)時間和脈沖次數(shù)恒定的條件下，脈沖電壓150v/mm組的囊胚率顯著高于100v/mm組和125v/mm組（P<0.05）；在脈沖電壓和脈沖次數(shù)恒定的條件下，脈沖持續(xù)時間為100μs時囊胚率顯著高于其它兩組（P<0.05），達50.5%；在脈沖電壓和脈沖持續(xù)時間恒定的條件下，1次脈沖的卵裂率和囊胚率顯著高于2次脈沖（P<0.05）；PZM3和NCSU23培養(yǎng)液對豬孤雌激活胚胎發(fā)育的影響差異不顯著（P＞0.05），但PZM3培養(yǎng)液組的卵裂率、囊胚率和囊胚細胞數(shù)均略高于NCSU23組。綜上所述，在脈沖電壓為150v/mm、脈沖持續(xù)時間為100μs，脈沖次數(shù)為1次的電激活條件下，豬卵母細胞孤雌激活的效果最佳。
作品圖片
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 作品對豬卵母細胞孤雌激活參數(shù)和培養(yǎng)液對孤雌胚胎發(fā)育的影響進行了研究，目的篩選出較好的豬卵母細胞孤雌激活的條件參數(shù)和培養(yǎng)體系，為提高體細胞核移植效率提供技術依據(jù)。實驗中設定了不同脈沖電壓，脈沖持續(xù)時間，脈沖次數(shù)對體外成熟卵母細胞進行電激活，采用了PZM3和NCSU23培養(yǎng)液體外培養(yǎng)孤雌激活胚胎，對比不同電激活參數(shù)和培養(yǎng)液對豬卵母細胞的影響。
科學性、先進性及獨特之處
- 豬卵母細胞孤雌激活受多個方面因素的影響，主要受激活方法、體外培養(yǎng)體系和激活劑的控制。近幾年來國內外有很多的研究報道，對比了不同激活方法、不同體外培養(yǎng)體系及在培養(yǎng)液中添加不同的成分對豬卵母細胞孤雌激活、體細胞核移植的影響。本作品從電激活參數(shù)、體外培養(yǎng)體系方面優(yōu)化豬卵母細胞孤雌激活相關技術體系。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 激活處理及培養(yǎng)體系對胚胎的后期發(fā)育非常關鍵，也是豬體細胞核移植技術所要解決的難點之一，有許多問題亟待解決，重構胚的激活及培養(yǎng)體系等很多因素影響豬核移植技術的效率。本作品開展了電激活參數(shù)和培養(yǎng)液對豬卵母細胞孤雌胚胎發(fā)育的影響研究，優(yōu)化電激活和胚胎培養(yǎng)的相關技術體系，為核移植等研究奠定了基礎。
學術論文摘要
- [1]戴建軍，吳華莉，張廷宇，等. 豬體細胞克隆胚的胚胎移植研究[J]. 上海農業(yè)學報. 2007(04). [2] 潘登科.影響豬體細胞克隆胚胎發(fā)育能力的因素研究[D].中國農業(yè)大學,2005 [3]孫興參,岳奎忠,羅明久,等.豬卵母細胞孤雌激活方法及影響因素的研究.中國農業(yè)科學,2004,37:431-435. [4] 馬育芳，衛(wèi)恒習，李燕等.化學激活和季節(jié)對克隆豬出生率的影響.中國科學C輯:生命科學,2009,39(4):384-391. [5]史文軍.豬胚胎移植時間與胚胎生長發(fā)育關系的探討[J].河南畜牧獸醫(yī),2005,12:7-8. [6]葉華虎,魏泓,陳緊顧.豬卵母細胞在不同培養(yǎng)液中成熟后的發(fā)育能力[J].第三軍醫(yī)大學報,2003,25(6):511-513. [7]葉華虎,魏泓,陳緊顧.豬卵母細胞在不同培養(yǎng)液中成熟后的發(fā)育能力[J].第三軍醫(yī)大學報,2003,25(6):511-513. [8]張運海.利用體細胞核移植技術生產豬克隆胚胎的研究[D]．北京:中國農業(yè)大學,2005.
獲獎情況
- 2011年5月在云南農業(yè)大學第九屆“挑戰(zhàn)杯”榮獲校級二等獎。 2011年6月榮獲第六屆云南高校青年學術科技節(jié)三等獎。
鑒定結果
- 無
參考文獻
- [1]戴建軍，吳華莉，張廷宇，等. 豬體細胞克隆胚的胚胎移植研究[J]. 上海農業(yè)學報. 2007(04). [2] 潘登科.影響豬體細胞克隆胚胎發(fā)育能力的因素研究[D].中國農業(yè)大學,2005 [3]孫興參,岳奎忠,羅明久,等.豬卵母細胞孤雌激活方法及影響因素的研究.中國農業(yè)科學,2004,37:431-435. [4] 馬育芳，衛(wèi)恒習，李燕等.化學激活和季節(jié)對克隆豬出生率的影響.中國科學C輯:生命科學,2009,39(4):384-391. [5]史文軍.豬胚胎移植時間與胚胎生長發(fā)育關系的探討[J].河南畜牧獸醫(yī),2005,12:7-8. [6]葉華虎,魏泓,陳緊顧.豬卵母細胞在不同培養(yǎng)液中成熟后的發(fā)育能力[J].第三軍醫(yī)大學報,2003,25(6):511-513. [7]葉華虎,魏泓,陳緊顧.豬卵母細胞在不同培養(yǎng)液中成熟后的發(fā)育能力[J].第三軍醫(yī)大學報,2003,25(6):511-513. [8]張運海.利用體細胞核移植技術生產豬克隆胚胎的研究[D]．北京:中國農業(yè)大學,2005. [9]王媛,孫爽,劉仲鳳等.豬植入前胚胎體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化.中國畜牧獸醫(yī),2009,36（11）:89-93.
同類課題研究水平概述
- 豬卵母細胞孤雌激活受多個方面因素的影響，主要受激活方法、體外培養(yǎng)體系和激活劑的控制，不同的激活方法、體外培養(yǎng)體系、激活劑的選擇，對卵母細胞的孤雌激活率、卵裂率及孤雌發(fā)育率均有較大程度的影響。近幾年來國內外有很多的研究報道，對比了不同激活方法[1-4]（化學激活、電激活、電激活聯(lián)合化學激活）、不同體外培養(yǎng)體系[5-9]（NCSU23、BECM3和PZM系列）及在培養(yǎng)液中添加不同的成分(生物大分子)[10-12]（胰島素、維生素E、FBS、葡萄糖等）對豬卵母細胞孤雌激活、體細胞核移植的影響。這些研究優(yōu)化了孤雌激活方法及培養(yǎng)體系，但其中對一些問題的看法并不一致，如對激活方法、培養(yǎng)基選擇。 電激活所用的儀器型號和各實驗室條件不同，其激活核移植胚所用參數(shù)差異也較大。Koo等[13]的研究表明采用120v/mm電場強度，30μs脈沖激活核移植卵母細胞，其囊胚發(fā)育率高于150v/mm電壓，30μs脈沖。趙浩斌等[14]]的研究表明電場強度為125v/mm、脈沖時程為40-60μs，對于豬體外成熟卵母細胞的激活效果最好，1次脈沖激活率可達80％，增加脈沖次數(shù)并不能顯著提高激活率。李光鵬等[15]的研究表明電場強度為150v/mm、脈沖時程為30μs時對于豬體外成熟卵母細胞的激活效果最好，1次脈沖激活率可達71％。本研究結果表明，脈沖電壓為150V/mm、脈沖持續(xù)時間為100μs、脈沖次數(shù)為1次對豬卵母細胞孤雌激活胚胎的發(fā)育效果最好，這與Onishi A等[17]，Kure-bayashi等[18]的研究結果相一致。各實驗室采用的電激活參數(shù)不同，可能是由于實驗設備、實驗條件的差異導致的。 North Carolina University 23 Medium（NCSU23）和Porcine Zygote Medium-3（PZM3）是豬胚胎體外培養(yǎng)較為成功的兩種培養(yǎng)基，利用這兩種培養(yǎng)基均獲得了克隆后代[17,19,20]。NCSU23為學界公認的效果確切和穩(wěn)定的豬胚胎培養(yǎng)基，PZM3是近年來新發(fā)展起來的培養(yǎng)基，更接近于豬體內的生理環(huán)境，兩種培養(yǎng)基對豬胚胎體外培養(yǎng)效果有不同的說法[6-9]。本研究中PZM3和NCSU23培養(yǎng)液對豬卵母細胞孤雌激活胚胎的發(fā)育影響沒有明顯的差異。
