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基本信息
- 項目名稱：
- 豬屎豆致SD大鼠肝硬化腹水動物模型研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 主要是研究豬屎豆湯藥致肝硬化腹水SD大鼠各項指標(biāo)以及致肝硬化腹水的機(jī)制的，以及存活時間。以確定此模型，更好地應(yīng)用到有關(guān)肝硬化腹水的實驗研究中。
- 詳細(xì)介紹：
- 研究方案： 一．研究目標(biāo)：研究出與臨床上肝硬化腹水病人更加接近的肝硬化腹水SD大鼠的模型，以便進(jìn)一步利用到研究有關(guān)肝硬化腹水實驗中去。 二．研究內(nèi)容：主要是研究豬屎豆湯藥致肝硬化腹水SD大鼠各項指標(biāo)以及致肝硬化腹水的機(jī)制的，以及存活時間。以確定此模型，更好地應(yīng)用到有關(guān)肝硬化腹水的實驗研究中。 三．研究方法： 1．材料：健康SD雄性大鼠20只，體重：200-250g 2．試劑與器材： （1）豬屎豆：由醫(yī)藥市場購買； （2）氯胺酮； （3）HE染色； （4）門靜脈插管； （5）組織切片機(jī)等。 3．觀察指標(biāo): （1）肝功能檢查：采用斷尾取血的方法采血，分別于用藥前及用藥后第3，1O，2O天測定肝功能，包括血清透明質(zhì)酸（HA）谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、γ-谷氨(酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT))、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)、球蛋白，由自動生化分析儀測定。 （2）門靜脈壓檢測：用氯胺酮麻醉SD大鼠，打開腹腔，門靜脈插管測門靜脈壓力。 （3）腹水檢測：觀察實驗組造模前后腹圍變化，實驗結(jié)束后處死實驗組的大鼠，打開腹腔,測量腹水量。 （4）肝臟組織學(xué)觀察：將固定好的肝臟組織用石蠟包埋、制成組織切片，常規(guī)HE染色。 （5）肝硬化程度檢查：用Child pugh分級的方法。 4．動物分組與豬屎豆給藥： 取20只健康SD大鼠，按照隨機(jī)數(shù)字表法分組，分成2組，實驗組10只，對照組10只。 實驗組（10只）：用豬屎豆30g，1000ml水，煎40分鐘，第1-2周按2.0ml/100g灌胃，每天2次，第3-4周根據(jù)動物的飲食、體質(zhì)量反應(yīng)情況，劑量調(diào)整為1.0ml／100g； 對照組（10只）：生理鹽水，按2.0ml/100g灌胃對照組。 5．統(tǒng)計學(xué)處理： 使用SPSS 13．0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，定量資料經(jīng)方差齊性檢驗，對方差齊的資料采用t檢驗的方法，對方差不齊的資料采用方差分析，檢驗水準(zhǔn)a=0．05。 6．技術(shù)路線： A．選20只健康SD大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法分組，分成2組，實驗組10只，對照組10只。化驗每組中各大鼠的血清透明質(zhì)酸（HA）谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、γ-谷氨(酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT))、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)、球蛋白； B．實驗組用豬屎豆30g，1000ml水，煎40分鐘，第1-2周按2.0ml/100g灌胃，每天2次，第3-4周根據(jù)動物的飲食、體質(zhì)量反應(yīng)情況，劑量調(diào)整為1.0ml／100g；用生理鹽水，按2.0ml/100g灌胃對照組。持續(xù)一個月左右。在第二周末和第四周末化驗每只大鼠的各項肝功能生化指標(biāo)，并從每組隨機(jī)抽取2只大鼠，用氯胺酮麻醉SD大鼠，打開腹腔，門靜脈插管測門靜脈壓力；處死大鼠，打開腹腔,測量腹水量；將固定好的肝臟組織用石蠟包埋、制成組織切片，常規(guī)HE染色，做組織病理學(xué)切片觀察；用Child pugh分級的方法作為診斷肝硬化程度的指標(biāo)； C．比較實驗組和對照組的各項肝功能生化指標(biāo)
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目前肝硬化腹水動物模型的復(fù)制方法主要有采用膽管結(jié)扎復(fù)制肝硬化腹水動物模型和四氯化碳皮下或腹腔注射法或結(jié)合酒精的四氯化碳復(fù)合法、門靜脈狹窄法等，這需要特殊手術(shù)過程及材料，制作繁瑣，成功率低，死亡率高。 根據(jù)前人已經(jīng)研究過豬屎豆對肝臟有毒性作用，本研究旨在建立符合肝硬化腹水的簡便、可靠、穩(wěn)定的動物模型，為進(jìn)一步研究肝硬化腹水的病理變化及相關(guān)治療作準(zhǔn)備，更適合用于臨床研究和實驗研究中。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨特之處
- 目前實驗室做肝硬化腹水模型主要采用膽管結(jié)扎復(fù)制肝硬化模型和CCL4和乙醇反復(fù)給藥，但是前者操作起來很困難，而后者成功率不是很高。此課題發(fā)揮中藥的優(yōu)勢，用中藥豬屎豆來研究制造出肝硬化腹水SD大鼠的模型。如果能成功復(fù)制出模型，將能夠解決以上的問題，并為進(jìn)一步研究肝硬化腹水的病理變化及相關(guān)治療作準(zhǔn)備，更適合用于臨床研究和實驗研究中。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 通過研究豬屎豆造模SD大鼠肝硬化腹水動物模型，不僅可解決前人制造肝硬化腹水大鼠所面臨的問題，還為后人制造肝硬化腹水模型提供廣闊的道路，讓人們知道制造肝硬化腹水模型的方法不僅僅局限于西醫(yī)的方法，中醫(yī)中藥也具有無可倫比的優(yōu)勢。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：對豬屎豆致SD大鼠的肝硬化腹水模型研究，構(gòu)建出穩(wěn)定的肝硬化大鼠模型并降低制模過程中大鼠的死亡率，為相關(guān)的實驗提供穩(wěn)定可靠的疾病模型。材料和方法：10只SD大鼠，造模前適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，低劑量組是由豬屎豆中藥煎取液（濃度為100%），每1g濃縮液含1g全藥，灌胃一天一次，高劑量組是一天兩次，大鼠灌胃給藥體積為1ml/100g。結(jié)果：造模四周后，高劑量組的肝細(xì)胞水腫，肝小葉結(jié)構(gòu)消失，淋巴細(xì)胞浸潤，嗜酸性細(xì)胞變性。低劑量組的嗜酸性粒細(xì)胞沒有明顯變性，情況較高劑量組輕。結(jié)論：豬屎豆對SD大鼠的肝臟具有損害性，但要造成肝硬化動物模型仍需要較長時間。
獲獎情況
- 獲得廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院創(chuàng)新課題立項獎 獲得廣州中醫(yī)藥大學(xué)“挑戰(zhàn)杯”立項獎
鑒定結(jié)果
- 本次血液檢驗結(jié)果主要由廣州金域體檢中心提供。本次病理切片的制作由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科協(xié)助完成
參考文獻(xiàn)
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同類課題研究水平概述
- 目前，肝硬化、門脈高壓的動物模型包括源于肝纖維化的動物模型(如CCl4、膽總管結(jié)扎或縮窄等)及門靜脈縮窄等方法，但該模型制作為刨傷性，死亡率高，不能大量成模，膽管有時再通而使組織學(xué)發(fā)生逆轉(zhuǎn)。 豬屎豆又稱響鈴豆、野黃豆，是一種豆科綠肥用植物，一年生或多年生，分布于熱帶、亞熱帶，約有600余種，我國的豬屎豆屬植物多達(dá)42種，分布于西郊、東南沿海及西南各省，以廣東、廣西、海南、臺灣、云南、福建最多。 豬屎豆屬植物的化學(xué)成分種類較多，目前從豬屎豆屬植物中分離得到的化學(xué)成分主要有生物堿、黃酮類、糖、多糖、糖苷、有機(jī)酸、甾體等。其含蛋白質(zhì)高，故多被利用作料，但是莖葉和種子均能引起中毒。其含有有毒成分野百合堿、吡咯烷、雙稠吡咯啶生物堿等。其有毒成分含量，種子為0．40％一1．69％，莖葉、莢為0．2％，進(jìn)入機(jī)體后引起肝損害，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮、腦充血、黃疸、腹水、淋巴結(jié)腫大和壞死。 豬屎豆屬植物大都含有吡咯里西啶生物堿，其結(jié)構(gòu)由兩個基本部分組成：necine base和necic acid，且1，2位多具雙鍵。關(guān)于PAs的致畸作用報道較少，果蠅實驗、A—rues實驗、哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)等實驗證實，本屬Monocrotaline、Integerrimine、Fulvine、Senkirkine等有誘變活性。許多實驗已經(jīng)證明PAs及其原植物的致癌作用。 PAs是目前已知的最重要的植物性肝毒成分，被稱為肝毒吡咯里西啶生物堿，其最明顯的毒性是肝臟毒，可引起肝細(xì)胞出血性壞死，肝巨細(xì)胞癥及靜脈閉塞癥等。 自十八世紀(jì)以來，人們已經(jīng)認(rèn)識到許多PAs是高毒性的。1976年，Lyford等報道美國1例35歲的厄瓜多爾婦女因大量腹水而就診，經(jīng)肝靜脈造影和肝穿刺活檢被證實患有肝小靜脈閉塞病。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，她在發(fā)病前6個月長期飲用豬屎豆屬植物葉茶。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查研究，在南非、阿富汗、牙買加、印度、伊朗及前蘇聯(lián)等國家，大量肝病的發(fā)生與食用含PAs的食物、飲用含PAs的飲料(牛奶、茶葉等)及服用含PAs的草藥有關(guān)。 基于以上的研究現(xiàn)狀，我們將發(fā)揮中藥的優(yōu)勢，運用豬屎豆湯劑灌胃健康SD大鼠，制造肝硬化腹水模型，以建立符合肝硬化腹水的簡便、可靠、穩(wěn)定的動物模型，為進(jìn)一步研究肝硬化腹水的病理變化及相關(guān)治療作準(zhǔn)備，更適合用于臨床研究和實驗研究中。
