基本信息
- 項目名稱：
- 透骨消痛膠囊含藥血清影響兔軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達的研究
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 通過MTT、RT-PCR法分別檢測不同劑量透骨消痛膠囊干預后兔軟骨細胞的增殖和CyclinD1 mRNA表達情況。得出結果：MTT、RT-PCR法檢測分別顯示含藥血清能促進軟骨細胞的增殖和CyclinD1 mRNA表達， 結論：透骨消痛膠囊含藥血清能促進軟骨細胞G1期正性調節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達，從而促進軟骨細胞增殖。
- 詳細介紹：
- 本研究是在中醫(yī)藥理論的指導下，運用細胞生物學的研究方法,在前期臨床、實驗研究的基礎上，觀察不同劑量透骨消痛膠囊含藥血清對兔軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達的影響，旨在從細胞水平探討透骨消痛膠囊調控軟骨細胞增殖的作用機制。 方法：含藥血清的制備—軟骨細胞培養(yǎng)體系建立—軟骨細胞鑒定-透骨消痛膠囊含藥血清干預方法—MTT法檢測軟骨細胞的增殖、RT-PCR法檢測軟骨細胞CyclinD1 mRNA的表達—統(tǒng)計學處理。 結果：MTT法檢測顯示含藥血清能夠促進軟骨細胞的增殖，實驗2組、實驗3組，干預72h軟骨細胞OD值顯著高于對照組（P<0.01），明顯高于實驗1組（P<0.05）; RT-PCR法檢測顯示含藥血清能夠促進軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達，實驗2組、實驗3組，干預72h軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達顯著高于對照組（P<0.01），明顯高于實驗1組（P<0.05）。 結論：透骨消痛膠囊含藥血清能促進軟骨細胞G1期正性調節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達，從而促進軟骨細胞增殖。 分別
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：探討透骨消痛膠囊含藥血清對兔軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達的影響。 基本思路：取兔膝關節(jié)軟骨，Ⅱ型膠原酶消化，建立體外培養(yǎng)體系，甲苯胺藍染色鑒定細胞功能，體外培養(yǎng)第三代軟骨細胞隨機分為對照組、實驗1、2、3組，分別加20%的空白血清、透骨消痛膠囊含藥血清低、中、高劑量繼續(xù)培養(yǎng)72h，MTT檢測細胞增殖，RT-PCR檢測細胞CyclinD1 mRNA表達，透射電子顯微鏡觀察細胞形態(tài)。
科學性、先進性及獨特之處
- （1）首次采用透骨消痛膠囊有效成分組對體外培養(yǎng)的永生化軟骨細胞周期正性調節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達影響的研究。 （2）本作品的研究能為透骨消痛膠囊治療骨性關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）提供依據(jù)，并闡釋其分子機制。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 本項目采用透骨消痛膠囊血清為受試藥物，通過含藥血清作用于體外培養(yǎng)的軟骨細胞，從細胞水平來探索關節(jié)軟骨生物學特性，從而模擬了透骨消痛膠囊在體內發(fā)生作用的過程，結果表明透骨消痛膠囊含藥血清能促進軟骨細胞G1期正性調節(jié)因子CyclinD1表達，從而促進軟骨細胞增殖。為探索中藥對骨性關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）作用環(huán)節(jié)提供了有效而簡便的方法。具有良好的推廣前景。
學術論文摘要
- [摘要] 目的：探討透骨消痛膠囊含藥血清對兔軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達的影響。方法：取4周齡雄性新西蘭大白兔膝關節(jié)軟骨，Ⅱ型膠原酶消化，建立軟骨細胞體外培養(yǎng)體系，甲苯胺藍染色鑒定細胞功能，體外培養(yǎng)第三代軟骨細胞隨機分為對照組、實驗1組、實驗2組、實驗3組，分別加入20%的空白血清、透骨消痛膠囊含藥血清低、中、高劑量繼續(xù)培養(yǎng)72h后，MTT法檢測軟骨細胞增殖，RT-PCR法檢測軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達，透射電子顯微鏡觀察軟骨細胞形態(tài)。結果：實驗2組、實驗3組，干預72h軟骨細胞OD值顯著高于對照組（P<0.01），明顯高于實驗1組（P<0.05）;實驗2組、實驗3組，干預72h軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達顯著高于對照組（P<0.01），明顯高于實驗1組（P<0.05）。結論：透骨消痛膠囊含藥血清能促進軟骨細胞G1期正性調節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達，從而促進軟骨細胞增殖。 [關鍵詞] 透骨消痛膠囊 含藥血清 軟骨細胞 CyclinD1 mRNA
獲獎情況
- 無
鑒定結果
- 情況屬實
參考文獻
- 參考文獻(更多的參考文獻見論文） 1 徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實驗學方法[M].第3版. 北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：202. 2 田代真一,“藥物血清學”と“血清藥化學”一漢方の藥理學か始きっ藥物血中濃度測定の新しぃ世界.TDM研究,1988,54(5)：11. 3 葉蕻芝，李西海，梁文娜，等.軟骨細胞體外分離培養(yǎng)與鑒定的實驗研究，福建中醫(yī)學院學報2008，18（6）：33-36. 4 劉獻祥,李西海,周江濤. 改良Hulth造模法復制膝骨性關節(jié)炎的實驗研究.中國中西醫(yī)結合雜志,2005,25 (12):1104. 5 Hulit J,Lee RJ,Russell RG,et a1．ErbB-2-induced mammary tumor growth：the role of cyclinD1 and p27kipl．Biochemist Pharma col,2002,64:827-836. 6 李西海,梁文娜,劉獻祥,等.端粒和端粒酶與永生化軟骨細胞[J].國際骨科學雜志,2007,28（6）：35. 7 張勇，趙建寧.組織工程軟骨細胞體外培養(yǎng)技術要點.中國組織研究與臨床康復，2008,12（24）：8340-8343.
同類課題研究水平概述
- “骨與關節(jié)十年（bone and joint decade）”這一世界范圍內活動表明了研究和治療OA的重要性和必要性。目前，西醫(yī)采用非甾體抗炎藥、抗氧化藥物、局部關節(jié)腔內注射藥物及外科手術等多種方式，但這些治療方式副作用大，價格昂貴，且遠期療效不肯定?，F(xiàn)代研究表明，中藥是通過多成分、多靶點的整合調節(jié)作用，對于解決慢性復雜多因素疾病的治療問題具有單體藥物無法比擬的優(yōu)勢。因此，深入研究OA的發(fā)病機制為開發(fā)治療OA的中藥復方尤其顯得意義重大。 Cyclin D1是G1期細胞增殖信號的關鍵調控蛋白，在細胞增殖過程中具有重要的作用，Cyclin D1與CDK的結合是細胞周期關鍵限速點G1/S期切換的正向調節(jié)因子，細胞一旦通過該點，就會不再依賴外源性增殖分裂信號的刺激，而能自主完成細胞的增殖周期。在正常細胞周期中，Cyclin D1與CDK4形成復合物Cyclin D1-CDK4，能磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤易感因子(Rb)蛋白，磷酸化Rb的構象變化而導致轉錄活化因子(E2F)的分離，并釋放E2F，發(fā)揮轉錄因子的生物學效應，解除Rb調控G1期的停滯作用，啟動DNA的合成，使細胞周期從G1期順利進入S期，從而實現(xiàn)細胞增殖，抑制細胞凋亡。因此，Cyclin D1在軟骨細胞周期調控中起著重要的作用。 透骨消痛膠囊由巴戟天、杭白芍、川芎、腫節(jié)風等組成(460mg/粒，1g藥粉含13g生藥，批準文號：閩制字Z20100006),福建中醫(yī)藥大學附屬第二人民醫(yī)院院內制劑。該方長期運用于臨床，是防治骨性關節(jié)炎行之有效的組方。方中以巴戟天補腎之品治本為君藥；白芍養(yǎng)血柔肝以助固本為臣藥；川芎活血行血、血行風自滅，腫節(jié)風祛風除濕、風祛痹痛止，為佐使藥，具有補腎柔肝，活血祛風的功效。前期研究表明透骨消痛膠囊具有有效抑制細胞因子、MMP-3、氧自由基的生物學效應來延緩關節(jié)宏觀形態(tài)、軟骨基質及軟骨細胞退變的作用。而從軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達角度探討透骨消痛膠囊作用機制未見報道。 因此，本課題通過探討透骨消痛膠囊對軟骨細胞CyclinD1 mRNA表達的影響，證實了透骨消痛膠囊干預軟骨細胞的有效性，具有促進軟骨細胞增殖的作用，從而為中藥防治骨性關節(jié)炎提供新線索。
