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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 透骨消痛膠囊含藥血清影響兔軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)的研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 通過MTT、RT-PCR法分別檢測(cè)不同劑量透骨消痛膠囊干預(yù)后兔軟骨細(xì)胞的增殖和CyclinD1 mRNA表達(dá)情況。得出結(jié)果：MTT、RT-PCR法檢測(cè)分別顯示含藥血清能促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖和CyclinD1 mRNA表達(dá)， 結(jié)論：透骨消痛膠囊含藥血清能促進(jìn)軟骨細(xì)胞G1期正性調(diào)節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達(dá)，從而促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。
- 詳細(xì)介紹：
- 本研究是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)的研究方法,在前期臨床、實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，觀察不同劑量透骨消痛膠囊含藥血清對(duì)兔軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)的影響，旨在從細(xì)胞水平探討透骨消痛膠囊調(diào)控軟骨細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。 方法：含藥血清的制備—軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系建立—軟骨細(xì)胞鑒定-透骨消痛膠囊含藥血清干預(yù)方法—MTT法檢測(cè)軟骨細(xì)胞的增殖、RT-PCR法檢測(cè)軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA的表達(dá)—統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：MTT法檢測(cè)顯示含藥血清能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖，實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組，干預(yù)72h軟骨細(xì)胞OD值顯著高于對(duì)照組（P<0.01），明顯高于實(shí)驗(yàn)1組（P<0.05）; RT-PCR法檢測(cè)顯示含藥血清能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)，實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組，干預(yù)72h軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P<0.01），明顯高于實(shí)驗(yàn)1組（P<0.05）。 結(jié)論：透骨消痛膠囊含藥血清能促進(jìn)軟骨細(xì)胞G1期正性調(diào)節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達(dá)，從而促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。 分別
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：探討透骨消痛膠囊含藥血清對(duì)兔軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)的影響。 基本思路：取兔膝關(guān)節(jié)軟骨，Ⅱ型膠原酶消化，建立體外培養(yǎng)體系，甲苯胺藍(lán)染色鑒定細(xì)胞功能，體外培養(yǎng)第三代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1、2、3組，分別加20%的空白血清、透骨消痛膠囊含藥血清低、中、高劑量繼續(xù)培養(yǎng)72h，MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)，透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- （1）首次采用透骨消痛膠囊有效成分組對(duì)體外培養(yǎng)的永生化軟骨細(xì)胞周期正性調(diào)節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達(dá)影響的研究。 （2）本作品的研究能為透骨消痛膠囊治療骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）提供依據(jù)，并闡釋其分子機(jī)制。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 本項(xiàng)目采用透骨消痛膠囊血清為受試藥物，通過含藥血清作用于體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞，從細(xì)胞水平來探索關(guān)節(jié)軟骨生物學(xué)特性，從而模擬了透骨消痛膠囊在體內(nèi)發(fā)生作用的過程，結(jié)果表明透骨消痛膠囊含藥血清能促進(jìn)軟骨細(xì)胞G1期正性調(diào)節(jié)因子CyclinD1表達(dá)，從而促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。為探索中藥對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）作用環(huán)節(jié)提供了有效而簡(jiǎn)便的方法。具有良好的推廣前景。
學(xué)術(shù)論文摘要
- [摘要] 目的：探討透骨消痛膠囊含藥血清對(duì)兔軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)的影響。方法：取4周齡雄性新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨，Ⅱ型膠原酶消化，建立軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，甲苯胺藍(lán)染色鑒定細(xì)胞功能，體外培養(yǎng)第三代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組，分別加入20%的空白血清、透骨消痛膠囊含藥血清低、中、高劑量繼續(xù)培養(yǎng)72h后，MTT法檢測(cè)軟骨細(xì)胞增殖，RT-PCR法檢測(cè)軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)，透射電子顯微鏡觀察軟骨細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組，干預(yù)72h軟骨細(xì)胞OD值顯著高于對(duì)照組（P<0.01），明顯高于實(shí)驗(yàn)1組（P<0.05）;實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組，干預(yù)72h軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P<0.01），明顯高于實(shí)驗(yàn)1組（P<0.05）。結(jié)論：透骨消痛膠囊含藥血清能促進(jìn)軟骨細(xì)胞G1期正性調(diào)節(jié)因子CyclinD1 mRNA表達(dá)，從而促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。 [關(guān)鍵詞] 透骨消痛膠囊 含藥血清 軟骨細(xì)胞 CyclinD1 mRNA
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 情況屬實(shí)
參考文獻(xiàn)
- 參考文獻(xiàn)(更多的參考文獻(xiàn)見論文） 1 徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)學(xué)方法[M].第3版. 北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：202. 2 田代真一,“藥物血清學(xué)”と“血清藥化學(xué)”一漢方の藥理學(xué)か始きっ藥物血中濃度測(cè)定の新しぃ世界.TDM研究,1988,54(5)：11. 3 葉蕻芝，李西海，梁文娜，等.軟骨細(xì)胞體外分離培養(yǎng)與鑒定的實(shí)驗(yàn)研究，福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2008，18（6）：33-36. 4 劉獻(xiàn)祥,李西海,周江濤. 改良Hulth造模法復(fù)制膝骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005,25 (12):1104. 5 Hulit J,Lee RJ,Russell RG,et a1．ErbB-2-induced mammary tumor growth：the role of cyclinD1 and p27kipl．Biochemist Pharma col,2002,64:827-836. 6 李西海,梁文娜,劉獻(xiàn)祥,等.端粒和端粒酶與永生化軟骨細(xì)胞[J].國際骨科學(xué)雜志,2007,28（6）：35. 7 張勇，趙建寧.組織工程軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn).中國組織研究與臨床康復(fù)，2008,12（24）：8340-8343.
同類課題研究水平概述
- “骨與關(guān)節(jié)十年（bone and joint decade）”這一世界范圍內(nèi)活動(dòng)表明了研究和治療OA的重要性和必要性。目前，西醫(yī)采用非甾體抗炎藥、抗氧化藥物、局部關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射藥物及外科手術(shù)等多種方式，但這些治療方式副作用大，價(jià)格昂貴，且遠(yuǎn)期療效不肯定?，F(xiàn)代研究表明，中藥是通過多成分、多靶點(diǎn)的整合調(diào)節(jié)作用，對(duì)于解決慢性復(fù)雜多因素疾病的治療問題具有單體藥物無法比擬的優(yōu)勢(shì)。因此，深入研究OA的發(fā)病機(jī)制為開發(fā)治療OA的中藥復(fù)方尤其顯得意義重大。 Cyclin D1是G1期細(xì)胞增殖信號(hào)的關(guān)鍵調(diào)控蛋白，在細(xì)胞增殖過程中具有重要的作用，Cyclin D1與CDK的結(jié)合是細(xì)胞周期關(guān)鍵限速點(diǎn)G1/S期切換的正向調(diào)節(jié)因子，細(xì)胞一旦通過該點(diǎn)，就會(huì)不再依賴外源性增殖分裂信號(hào)的刺激，而能自主完成細(xì)胞的增殖周期。在正常細(xì)胞周期中，Cyclin D1與CDK4形成復(fù)合物Cyclin D1-CDK4，能磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤易感因子(Rb)蛋白，磷酸化Rb的構(gòu)象變化而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄活化因子(E2F)的分離，并釋放E2F，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)效應(yīng)，解除Rb調(diào)控G1期的停滯作用，啟動(dòng)DNA的合成，使細(xì)胞周期從G1期順利進(jìn)入S期，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡。因此，Cyclin D1在軟骨細(xì)胞周期調(diào)控中起著重要的作用。 透骨消痛膠囊由巴戟天、杭白芍、川芎、腫節(jié)風(fēng)等組成(460mg/粒，1g藥粉含13g生藥，批準(zhǔn)文號(hào)：閩制字Z20100006),福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院院內(nèi)制劑。該方長期運(yùn)用于臨床，是防治骨性關(guān)節(jié)炎行之有效的組方。方中以巴戟天補(bǔ)腎之品治本為君藥；白芍養(yǎng)血柔肝以助固本為臣藥；川芎活血行血、血行風(fēng)自滅，腫節(jié)風(fēng)祛風(fēng)除濕、風(fēng)祛痹痛止，為佐使藥，具有補(bǔ)腎柔肝，活血祛風(fēng)的功效。前期研究表明透骨消痛膠囊具有有效抑制細(xì)胞因子、MMP-3、氧自由基的生物學(xué)效應(yīng)來延緩關(guān)節(jié)宏觀形態(tài)、軟骨基質(zhì)及軟骨細(xì)胞退變的作用。而從軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)角度探討透骨消痛膠囊作用機(jī)制未見報(bào)道。 因此，本課題通過探討透骨消痛膠囊對(duì)軟骨細(xì)胞CyclinD1 mRNA表達(dá)的影響，證實(shí)了透骨消痛膠囊干預(yù)軟骨細(xì)胞的有效性，具有促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖的作用，從而為中藥防治骨性關(guān)節(jié)炎提供新線索。
