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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 川芎多糖的純化及抗氧化研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 通過水提醇沉法將川芎多糖提取出來，提取率為5.71%，總糖含量為72.48%。采用DEAE-650C靜態(tài)洗脫對川芎多糖進(jìn)行純化，確定最佳洗脫條件和洗脫次數(shù)，得到3個(gè)多糖組分。 利用紫外光解過氧化氫溶液產(chǎn)生羥基自由基，以對羥基苯甲酸作為捕捉劑，與羥基自由基反應(yīng)后產(chǎn)生3，4-二羥基苯甲酸，通過HPLC檢測出生成的3，4-二羥基苯甲酸含量間接測定多糖清除羥基自由基的能力。
- 詳細(xì)介紹：
- 采用DEAE-650C分級，靜態(tài)洗脫得到3個(gè)多糖組分，LCXP1為蒸餾水洗脫，LCXP2和LCXP3為NaCl洗脫組分。 確定了最佳靜態(tài)洗脫條件：最大上樣量600 mg；洗脫溶液為水、0.05 mol/L NaCl、0.35 mol/L NaCl；洗脫次數(shù)3次。 在研究多糖對?OH的清除率時(shí)，一般采用分光光度法、熒光光度法測定，而用 HPLC測定多糖對 ?OH的清除作用報(bào)道較少。本研究以對羥基苯甲酸為?OH捕捉劑，采用高效液相色譜法檢測對羥基苯甲酸與?OH反應(yīng)的生成物3，4-二羥基苯甲酸的含量來計(jì)算多糖對?OH的清除率。本實(shí)驗(yàn)建立的 HPLC測定川芎對羥基自由基的清除率的方法，系統(tǒng)性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，相對熒光光度法與分光光度法，提高了分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，對篩選清除羥基自由基的天然抗氧化劑和研究清除自由基的機(jī)制具有一定的科學(xué)意義。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- HPLC抗氧化能力評價(jià)體系，達(dá)到定量準(zhǔn)確、快速的目的，為多糖抗氧化能力評價(jià)提供一個(gè)可靠的手段并且闡述多糖抗氧化機(jī)理。 川芎多糖的提取→DEAE-纖維素柱層析方法對川芎多糖進(jìn)行分離純化→靜態(tài)洗脫方法對川芎多糖進(jìn)行分離純化→多糖含量測定→川芎多糖的組分研究； 利用紫外光解過氧化氫溶液產(chǎn)生·OH→捕捉劑與羥基自由基反應(yīng)→通過HPLC檢測含量→間接測定多糖清除羥基自由基的能力。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 一、采用水提醇析法提取川芎多糖，DEAE-纖維素柱層析結(jié)合靜態(tài)洗脫方法對川芎多糖進(jìn)行分離純化。獲得了LCXP-1，LCXP-2，LCXP-3三個(gè)多糖組分。 二、確定最佳反應(yīng)條件，并且對該方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。采用公認(rèn)的抗氧化劑維生素C及蘆丁對該方法進(jìn)行了驗(yàn)證。 三、川芎多糖可以通過捕捉脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中產(chǎn)生的自由基，達(dá)到對自由基的直接清除作用。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 本研究建立一種HPLC檢測多糖清除?OH模型，通過對測定條件的優(yōu)化，得到最佳實(shí)驗(yàn)條件。并采用公認(rèn)的抗氧化劑維生素C及蘆丁對該方法進(jìn)行了驗(yàn)證。相對熒光光度法與分光光度法，提高了分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，對篩選清除羥基自由基的天然抗氧化劑和研究清除自由基的機(jī)制具有一定的指導(dǎo)意義。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 通過水提醇沉法將川芎多糖提取出來，提取率為5.71%，總糖含量為72.48%。采用DEAE-650C靜態(tài)洗脫對川芎多糖進(jìn)行純化，確定最佳洗脫條件為最大上樣量600 mg；洗脫溶液為水、0.05 mol/L NaCl、0.35 mol/L NaCl；洗脫次數(shù)為3次，得到3個(gè)多糖組分分別為LCXP1、LCXP2、LCXP3。 建立了一種HPLC檢測多糖清除?OH模型，通過對測定條件的優(yōu)化，得到了最佳實(shí)驗(yàn)條件，并采用抗氧化劑維生素C以及蘆丁對該方法進(jìn)行了驗(yàn)證。利用紫外光解過氧化氫溶液產(chǎn)生羥基自由基，以對羥基苯甲酸作為捕捉劑，與羥基自由基反應(yīng)后產(chǎn)生3，4-二羥基苯甲酸，通過HPLC檢測出生成的3，4-二羥基苯甲酸含量間接測定多糖清除羥基自由基的能力。這樣可以達(dá)到定量準(zhǔn)確、快速的目的，為多糖抗氧化能力評價(jià)提供一個(gè)可靠的方法，對于多糖抗氧化研究具有重要意義。
獲獎(jiǎng)情況
- １．孫曉春，顏軍，何鋼，易勇等．川芎多糖的分離純化及其單糖組成測定[J]．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，29（1）：54-60． ２．顏軍，陶濤，孫曉春，易勇等．茯苓多糖的純化及分子量測定[J]．化學(xué)與生物工程，2011，28(3):88-90. ３．顏軍，孫曉春，何鋼，房晨等．苦蕎多糖的分離純化及單糖組成測定[J].食品科學(xué).（已收稿）
鑒定結(jié)果
- HPLC定量檢測多糖清除羥基自由基模型。系統(tǒng)穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，對篩選抗氧化劑和研究清除自由基的機(jī)制具有科學(xué)意義。 川芎多糖進(jìn)行分離純化方案，設(shè)計(jì)合理，指標(biāo)先進(jìn)，結(jié)果可靠，結(jié)論可信。
參考文獻(xiàn)
- [1] Rongmin Yu, Yin Yin , Wei Yang, etal .Structural elucidation and biological activity of a novel polysaccharide by alkaline extraction from cultured Cordyceps militaris. Carbohydrate Polymers ,2009, 75,166–171. [2] Libin Ye, Jianrong Li, Jingsong Zhang, et al NMR characterization for polysaccharide moiety of a glycopeptide. Fitoterapia ,2010, 81,93–96. [3] Chen Xiaoping, Tang QiChun, Chen Yan, et al.Simultaneous extraction of polysaccharides from Poria cocos by ultrasonic technique and its inhibitory activities against oxidative injury in rats with cervical cancer. Carbohydrate Polymers ,2010 (79): 409–413. [4] Huang Zhiping, Zhang Lina.Chemical structures of water-soluble polysaccharides from Rhizoma Panacis Japonici. Carbohydrate Research ,2009 ,344,1136–1140. [5] 范智超, 張志琪.川芎中多糖的研究.中草藥，2006,37（7）:973-976. [6] 唐崎,王維香,王曉君.堿法提取川芎多糖的研究.時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19（9）:2096-2097. [7] 丁文武，王維香，王曉君.酶法提取川芎多糖的研究.西華大學(xué)學(xué)報(bào),2008,27（1）:42-43.
同類課題研究水平概述
- 川芎煎劑對動物放射病實(shí)驗(yàn)治療有一定療效。川芎水溶性粗制劑對大鼠、小鼠及犬的放射線照射與氮芥損傷均有保護(hù)作用, 而對氮芥治療艾氏腹水癌的療效無明顯影響。川芎對大鼠的抗放射效果較小鼠好、腹腔注射較肌注好, 肌注又較口服好。提示本品可作為腫瘤患者放射治療的輔助療法, 以減輕其毒副作用。 川芎可治療維生素E缺乏癥, 對于因維生素E缺乏引起的雛雞營養(yǎng)性腦病有保護(hù)作用。川芎還有一定的抗癌作用, 對白血病細(xì)胞有一定的抑制作用。因此，掌握銀耳的培育生長、藥理作用及生產(chǎn)加工特性對于我們的研究很有意義。
