基本信息
- 項目名稱：
- 探索考馬斯亮藍G-250染料進行惡性瘧原蟲抗藥性測定的研究
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術(shù)論文
- 簡介：
- 根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的考馬斯亮蘭法（Bradford法）是目前六種蛋白質(zhì)含量測定常用方法中靈敏度最高最有效的一種。本次實驗將從考慮通過使用考馬斯亮藍G-250染料，來對抗藥性測定版中培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)進行抗藥性測定。
- 詳細介紹：
- 瘧疾是一種流行廣泛,對人類危害最為嚴重的重要傳染病之一。隨著蚊蟲對殺蟲劑及瘧原蟲對各種治療藥物的抗性的不斷增加,且缺乏有效地預(yù)防疫苗,防治形勢一直很嚴峻。因此，抗藥性的測定變得越發(fā)重要。 目前對于瘧原蟲抗藥性的測定方法主要有三種：一種是通過放射性H3標記， 另外一種是通單克隆抗體進行酶標測定，最近，有通過對核酸測定的方法測定抗藥性的報道。 H3標記，價格昂貴，而且有放射性。酶標測定， 不穩(wěn)定，價格昂貴。SYBR Green I熒光核酸測定的方法，雖然價格便宜，但是需要不常見的設(shè)備熒光讀盤儀。 我們希望，通過使用考馬斯亮藍G-250染料，來對抗藥性測定版中培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)進行抗藥性測定。根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的考馬斯亮蘭法（Bradford法）是目前六種蛋白質(zhì)含量測定常用方法中靈敏度最高最有效的一種。 所以本次實驗將從考慮應(yīng)用Bradford法與楊照青教授實驗室已經(jīng)建立的SYBR Green I，對照研究，探索考馬斯亮藍G-250染料用于抗藥性測定的可能性和可行性。 類似研究國內(nèi)外未見報道。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 應(yīng)用Bradford法與楊照青教授實驗室已經(jīng)建立的SYBR Green I，對照研究，探索考馬斯亮藍G-250染料用于惡性瘧原蟲抗藥性測定的可能性和可行性。
科學性、先進性及獨特之處
- 目前對瘧原蟲抗藥性的主要三種測定方法中，H3標記，價格昂貴，且有放射性。酶標測定， 不穩(wěn)定，價格昂貴。SYBR Green I熒光核酸測定法，雖然價格便宜，但是需要不常見的設(shè)備熒光讀盤儀。本次實驗考慮使用考馬斯亮藍G-250染料，來對抗藥性測定版中培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)進行抗藥性測定，探索考馬斯亮藍G-250染料用于抗藥性測定的可能性和可行性。 國內(nèi)外未見類似研究報道。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 探索一種價格價格便宜、操作簡便的瘧原蟲抗藥性測定的方法，為以后的相關(guān)研究提供一定的參考依據(jù)。
學術(shù)論文摘要
- 目的 探索考馬斯亮藍G-250染料用于惡性瘧原蟲抗藥性測定的可能性和可行性。 方法 根據(jù)考馬斯亮藍法（Bradford法），在加有氯喹濃度梯度藥的96孔板的惡性瘧原蟲標準株3D7的培養(yǎng)基中，加入考馬斯亮藍G-250染料，用酶標儀進行OD值測定從而達到蛋白的含量測定，以反映藥物的抗藥性。同時與楊照青教授實驗室已經(jīng)建立的SYBR Green I法做對照分析。 結(jié)果 Bradford法測定結(jié)果中瘧原蟲標準株3D7的OD值與加入藥物氯喹的濃度梯度并沒有較好的線性關(guān)系。并且以近來廣為應(yīng)用的蛋白定量方法Bicinchoninic acid (BCA )進行對比測定所得結(jié)果也是如此。而用SYBR Green I法的抗藥性測定結(jié)果中瘧原蟲標準株3D7的OD值與加入藥物氯喹的濃度梯度則具有較好的線性關(guān)系。 結(jié)論 考馬斯亮藍G-250染料不具有用于惡性瘧原蟲抗藥性測定的可能性和可行性。
獲獎情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻
- [1]王孝平; 邢樹禮 考馬斯亮藍法測定蛋白含量的研究 [J]天津化工 2009-05-30 [2]杜承 ,惡性瘧原蟲Pf332抗原的免疫原性分析[D]吉林大學 2010-06-01 [3]Basco, L. K. 2003. Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XV.Experimental studies on serum substitutes and supplements and alternative culture media for in vitro drug sensitivity assays using fresh isolates of Plasmodium falciparum. Am. J. Trop. Med. Hyg. 69:168–173. [4]Basco, L. K. 2003. Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XVII. Baseline monitoring of atovaquone-resistant Plasmodium falciparum by in vitro drug assays and cytochrome b gene sequence analysis. Am. J. Trop. Med. Hyg. 69:179–183. [5]Basco, L. K. 2004. Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XX.Experimental studies on various factors of in vitro drug sensitivity assays using fresh isolates of Plasmodium falciparum. Am. J. Trop. Med. Hyg.70:474–480
同類課題研究水平概述
- 目前對于瘧原蟲抗藥性的測定方法主要有三種：一種是通過放射性H3標記， 另外一種是通單克隆抗體進行酶標測定，最近，有通過對核酸測定的方法測定抗藥性的報道。 H3標記，價格昂貴，而且有放射性。酶標測定， 不穩(wěn)定，價格昂貴。SYBR Green I熒光核酸測定的方法，雖然價格便宜，但是需要不常見的設(shè)備熒光讀盤儀。 我們希望，通過使用考馬斯亮藍G-250染料，來對抗藥性測定版中培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)進行抗藥性測定。根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的考馬斯亮蘭法（Bradford法）是目前六種蛋白質(zhì)含量測定常用方法中靈敏度最高最有效的一種。 所以本次實驗應(yīng)用Bradford法與楊照青教授實驗室已經(jīng)建立的SYBR Green I，對照研究，探索考馬斯亮藍G-250染料用于抗藥性測定的可能性和可行性。 類似研究國內(nèi)外未見報道。
