基本信息
- 項目名稱：
- 反義寡核苷酸對人卵巢癌細胞HO-8910的抑制作用
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 依據與miRNA序列互補的原理，設計反義寡核苷酸，人工合成并全硫代修飾，在LipofectamineTM 2000介導下，轉染卵巢癌HO-8910細胞。采用臺盼藍拒染法檢測其對細胞生長抑制的作用和最佳作用濃度。 結果顯示反義寡核苷酸有效抑制細胞生長，作用的最佳濃度是0.3μmol／L,同時也顯示從轉染卵巢癌HO-8910細胞24 h開始，反義寡核苷酸組細胞生長明顯受到抑制，抑制效應持續(xù)到72h。
- 詳細介紹：
- MicroRNA是新近發(fā)現(xiàn)的一類內源性小分子RNA家族，主要作用于基因轉錄后水平，對生物體諸多生命現(xiàn)象起重要的調控作用，特別是在腫瘤的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用，發(fā)揮著類似癌基因或抑癌基因的功能.miRNAs普遍存在于真核細胞中, 進化上高度保守, 是一類約22 nt的內源性單鏈RNA分子, 作用于靶mRNA導致其降解或抑制其翻譯, 在動物和植物中均對基因表達起重要的負調控作用。因此我們檢測了以microRNA-30b為靶標的反義寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotide，AMO)對人卵巢癌細胞HO-8910的生長抑制效應，為卵巢癌的miRNA干擾治療的新靶標提供實驗依據。 依據與miRNA序列互補的原理，設計反義寡核苷酸，人工合成并全硫代修飾，在LipofectamineTM 2000介導下，轉染卵巢癌HO-8910細胞。采用臺盼藍拒染法檢測其對細胞生長抑制的作用和最佳作用濃度。結果顯示反義寡核苷酸有效抑制細胞生長，分別與隨機組、空白對照組、脂質體對照組進行比較有顯著差異(P<0．05)，反義寡核苷酸作用的最佳濃度是0.3μmol／L。臺盼藍拒染法結果也顯示從轉染卵巢癌HO-8910細胞24 h開始，反義寡核苷酸組細胞生長明顯受到抑制，抑制效應持續(xù)到72h。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- MicroRNA是一類內源性小分子RNA,作用于基因轉錄后水平,調控基因表達。因眾多miRNA在腫瘤細胞中高表達，利用有效抑制基因表達的方法是否會對腫瘤細胞生長產生影響是我們感興趣的。用反義技術抑制目的基因表達是一種較理想選擇。根據現(xiàn)有研究數據，miRNA-30b在卵巢癌細胞中高表達，故設計出針對它的反義寡核苷酸，來作用于卵巢癌HO-8910細胞，觀察其對細胞生長抑制作用，以尋找卵巢癌治療新靶點。
科學性、先進性及獨特之處
- 科學性:通過研究對microRNA-30b的反義寡核苷酸序列設計與合成,用來作用于卵巢癌HO-8910細胞，觀察其對細胞生長抑制,符合科學研究規(guī)范。先進性:以卵巢癌中高表達的miRNA-30b為研究對象，是迄今首次在卵巢癌 細胞中觀察其對細胞生長抑制。獨特性:通過對miRNA-30b的反義寡核苷酸序列設計與合成，探討其在卵巢癌中功能。為進一步了解其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后中所起作用提供實驗依據。
應用價值和現(xiàn)實意義
- miRNA與多種腫瘤發(fā)生密切相關。有的有抑癌作用，有的則有促癌功能。miRNA在各種腫瘤中表達水平不同，且不同腫瘤中有特定表達模式，說明腫瘤發(fā)生與其表達存在相關性，并在腫瘤治療中有重要作用及良好前景。以miRNA為靶點設計的基因藥物可以為腫瘤基因治療提供一條新途徑，這既是一項篩選抗腫瘤反義核酸藥物的技術，也是探討其在卵巢癌中功能的重要手段，為進一步了解其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后中所起作用奠定基礎。
學術論文摘要
- 目的：探討以miRNA-30b為靶標的反義寡核苷酸AMO對卵巢癌HO-8910細胞生長抑制效應。方法：依據與miRNA序列互補原理設計AMO，人工合成并全硫代修飾，在LipofectamineTM2000介導下，轉染卵巢癌細胞。用臺盼藍拒染檢測其對細胞生長抑制作用和最佳作用濃度。結果：染色結果顯示AMO有效抑制細胞生長，分別與隨機組、空白組、脂質體組進行比較有顯著差異P小于0．05，AMO作用的最佳濃度是0.3μmol每升，也顯示從轉染卵巢癌細胞24 h開始，AMO組細胞生長明顯受到抑制，抑制效應持續(xù)到72h。結論：以miRNA-30b為靶標的AMO可有效抑制卵巢癌細胞生長。
獲獎情況
- 2011年4月在大連醫(yī)科大學第五屆大學生課外學術科技作品大賽中獲得三等獎
鑒定結果
- 無
參考文獻
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同類課題研究水平概述
- 目前，miRNA在卵巢腫瘤的研究尚處于起步階段。主要包括 miRNA 在卵巢腫瘤的表達檢測；miRNA 與卵巢腫瘤的發(fā)生、分化、預后的相關性及其機制的研究；以及 miRNA 在卵巢腫瘤的診斷、治療等應用方面的探索。 基于 miRNA 的卵巢腫瘤治療，采用以合成的 miRNA 為工具，靶向作用于腫瘤相關基因。 Tsuda 等報道，合成的 miR-14U等3種miRNA（以HER-2 的編碼mRNA為靶基因的miRNA）轉染入SKOV3細胞后，能抑制 HER-2 蛋白的表達，并有效減少 SKOV3 細胞。后來又發(fā)現(xiàn)合成的 Gli-1-miRNA-3548 （以膠質瘤伴隨抗原1的編碼 mRNA 為靶基因的 miRNA）轉染 Gli-1+卵巢腫瘤細胞后，可以阻斷Shh（Sonic Hedgehog）信號通路，明顯抑制 Gli-1+卵巢腫瘤細胞增殖。這都預示著基于 miRNA 的靶向治療可能是今后卵巢腫瘤基因治療的新途徑。 正因為如此，本課題通過針對microRNA-30b的反義寡核昔酸序列(AMO)設計與合成，用它來作用于卵巢癌HO-8910細胞，為腫瘤基因治療提供了一條新途徑。這既是一項篩選抗腫瘤反義核酸藥物的技術，也是探討miRNA在卵巢癌中功能的重要手段，為進一步了解其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后中所起的作用奠定基礎。
