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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 茜草飲片炮制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 該論文以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，以飲片準(zhǔn)入及產(chǎn)業(yè)化為目標(biāo)，堅(jiān)持傳統(tǒng)炮制方法與現(xiàn)代科學(xué)方法相結(jié)合的原則，應(yīng)用正交試驗(yàn)等方法篩選優(yōu)化茜草飲片的軟化切制工藝、干燥工藝和制炭工藝研究。從飲片名稱、來源、炮制方法、檢查、浸出物、含量測定等項(xiàng)目入手，以對照藥材溶液和大葉茜草素對照品為參照，使用HPLC法和TLC方法控制茜草飲片質(zhì)量，以血液凝固時(shí)間為指標(biāo)，對生、炭品進(jìn)行研究比較。驗(yàn)證中試樣品的生產(chǎn)工藝是否切實(shí)可行。
- 詳細(xì)介紹：
- 茜草飲片炮制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究 一、研究的意義和必要性 “中藥材”、“中藥飲片”、“中成藥”是中藥的“三大支柱”。 其中，中藥飲片是聯(lián)系中藥材與中成藥的橋梁，是中藥湯劑和中藥配方顆粒的原料，其生產(chǎn)加工過程，既影響中藥材資源能否合理的利用，又直接關(guān)系到中藥的臨床療效。但目前中藥飲片炮制工藝不規(guī)范、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)太籠統(tǒng)，飲片流通市場混亂，大量偽劣飲片混入市場，嚴(yán)重影響了飲片及中成藥的臨床療效，極大地降低了中藥的市場競爭力。中藥飲片炮制規(guī)范化研究的滯后已經(jīng)嚴(yán)重影響了中藥現(xiàn)代化研究進(jìn)程。研究規(guī)范中藥飲片的炮制工藝，制定其科學(xué)合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為中醫(yī)臨床提供優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定的中藥飲片，也可為中成藥、中藥配方顆粒的生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)的原料。因此,實(shí)現(xiàn)中藥飲片生產(chǎn)規(guī)范化、中藥飲片質(zhì)量的可控化，在中藥走向世界的進(jìn)程中尤為重要。該課題研究的目的是探討如何以中醫(yī)藥理論體系為指導(dǎo)，充分利用現(xiàn)代科學(xué)知識(shí)和手段進(jìn)行“中藥飲片炮制規(guī)范化研究”。 茜草為茜草科植物茜草Rubia cordifolia L. 的干燥根及根莖。是中醫(yī)臨床常用中藥，具有涼血止血，行血祛瘀，止咳祛痰通經(jīng)之功效。用于吐血、衄血、崩漏下血、外傷出血、經(jīng)閉瘀阻,關(guān)節(jié)痹痛,跌打腫痛等[1]。山東為茜草的主要產(chǎn)區(qū)之一[2]?！吨袊幍洹?010年版收載有茜草和茜草炭兩種炮制規(guī)格，傳統(tǒng)認(rèn)為，炒炭后可增強(qiáng)其止血作用，但目前茜草飲片生產(chǎn)仍停留在傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)控制水平，炮制工藝仍不規(guī)范，缺乏客觀的工藝技術(shù)參數(shù)；茜草飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍不完善，《中國藥典》2010年版茜草收有性狀、含量測定、鑒別、檢查和含量測定項(xiàng)，但茜草炭仍缺乏科學(xué)客觀的定性和定量標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)重影響了茜草飲片的質(zhì)量及臨床療效。 因此，以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，以飲片準(zhǔn)入及產(chǎn)業(yè)化為目標(biāo)，堅(jiān)持傳統(tǒng)炮制方法與現(xiàn)代科學(xué)方法相結(jié)合的原則，篩選優(yōu)化茜草飲片的炮制工藝，確定其具體的工藝技術(shù)參數(shù)，實(shí)現(xiàn)茜草飲片炮制工藝的規(guī)范化，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)化，以確保茜草飲片的質(zhì)量和臨床療效，是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的需要，也是實(shí)現(xiàn)飲片生產(chǎn)規(guī)范化，規(guī)?；男枰?，具有重要的實(shí)用價(jià)值。 二、課題相關(guān)領(lǐng)域的國內(nèi)外技術(shù)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 1 茜草及茜草炭化學(xué)成分的研究 現(xiàn)在研究表明，茜草主含蒽醌類成分[1]：羥基茜草素（purpurin）、異茜草素（purpuroxanthin）、茜草素（alizarin）及茜草酸（munjistin）和偽羥基茜草素（pseudopurpurin）。此外，還有萘醌大葉茜草素、萜類、己肽類、多糖類等。 2 茜草及茜草炭的藥理作用 2.1止血作用 宋善俊等[3]通過對中草藥的體外血液凝固實(shí)驗(yàn)篩選，發(fā)現(xiàn)茜草對凝血三階段（凝血活酶生成，凝血酶生成，纖維蛋白形成）均有促進(jìn)作用，而且其凝血作用可能與其抗肝素[4]效能有關(guān)，茜草止血作用的有效活性部位是水提取液的正丁醇萃取部分[5]。有報(bào)道動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明茜草具有延長小鼠的凝血時(shí)間的作用，而茜草炭則能明顯縮短小鼠的凝血時(shí)間（玻片法測定凝血時(shí)間）[6]，[家兔口服茜草溫浸液后30~60分鐘均有明顯的促進(jìn)血液凝固的作用，表現(xiàn)為復(fù)鈣時(shí)間、凝血酶原時(shí)間及白陶土部分凝血活酶時(shí)間縮短，茜草炭口服也能明顯縮短小白鼠尾部出血的時(shí)間[7]。 2.2抗癌作用 系川秀治等[8]發(fā)現(xiàn)從中國購進(jìn)的茜草根的甲醇提取物具有顯著的抗小鼠S180A和P388白血病活性，從中分離到的環(huán)己肽類化合物對白血病、腹水癌、P388、L1210、B16黑色素瘤和實(shí)體瘤、結(jié)腸癌38、Lewis肺癌和艾氏腹水癌均有明顯的抑制作用，廣泛適用于治療小鼠白血病、腹水癌、大腸癌、肺癌和防止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，其療效等于或優(yōu)于長春堿、絲裂霉素、阿霉素。并且對正常細(xì)胞的毒性低。茜草根的甲醇提取物的氯仿部分可抑制人肝癌細(xì)胞株（Hep3B）細(xì)胞分泌乙型肝炎表面抗原（HbsAg）,而對細(xì)胞株的活性無影響，不顯示細(xì)胞毒性；并從中分離出3個(gè)已知的萘氫醌化合物，可用它作為從天然植物中快速篩選抗HBV藥物的評價(jià)方法。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)對乳腺癌只有甲醇提取物有效，但對C1499白血病、MH134肝癌和26結(jié)腸腺癌幾乎都沒有抗癌活性[9]。 2.3對造血系統(tǒng)的影響 2.3.1 升白作用 茜草的水提醇沉干膏對環(huán)磷酰胺引起的小鼠白細(xì)胞降低有升高作用[10]。茜草雙酯是中草藥茜草的有效成分茜草酸的合成衍生物，具有明顯的抗輻射和升高白細(xì)胞的作用。茜草雙酯對人多形核白細(xì)胞受刺激產(chǎn)生的氧自由基有清除作用，這可能與脂溶性的茜草雙酯易透過細(xì)胞膜有關(guān)[11]。給正常小鼠口服茜草雙酯2.5mg/只，服后4h白細(xì)胞數(shù)已有增加，8h明顯增高，以粒細(xì)胞升高為主，然后下降恢復(fù)到正常；給正常狗口服茜草雙酯200mg,藥后6h白細(xì)胞明顯增加，為藥前的174%，18h~24h達(dá)最高峰，為藥前的196%~209%，此升高的的白細(xì)胞主要是中性桿狀粒細(xì)胞，48h和72h逐漸恢復(fù)到給藥前水平，正常狗連續(xù)15d口服茜草雙酯1g/只，24h后有明顯升白作用，維持在給藥前的141%~151%（P<0.05）[12]。 2.3.2 對小鼠造血干細(xì)胞的影響 LACH雌性小鼠口服茜草雙酯2.5mg/只，8h后，CFUS明顯增多，且CFUS自殺率高于對照組的2.9倍，充分證明了茜草雙酯促進(jìn)機(jī)體造血功能的作用[12]。對狗血栓彈力圖（TEG）的影響，正常狗連續(xù)口服茜草雙酯200mg/只5d,藥后1.5h、6h、1-6d分別取血一次，用TEG測定凝血速度（rtk）,結(jié)果表明藥后1.5h和6h無變化，而藥后1~6d血凝速度明顯延長（P<0.01）[12]。 3 茜草及茜草炭的炮制研究 茜草制炭后，抗炎、鎮(zhèn)痛、活血化瘀等藥理作用減弱，但止血作用增強(qiáng)，說明茜草炮制的目的是增強(qiáng)止血作用，為臨床分用提供了藥理學(xué)依據(jù)。茜草飲片炮制前后抗炎、鎮(zhèn)痛、活血化瘀以及止血作用不同的原因，可能與茜草飲片炒炭炮制前后化學(xué)成分發(fā)生變化，炮制后具有抗炎、鎮(zhèn)痛、活血化瘀的有效成分總蒽醌含量，以及萘醌大葉茜草素含量降低[13]和止血成分1,3二羥基蒽醌含量顯著增加[14]有關(guān)?！吨袊幍洹窂?977至2010年版藥典均收載茜草、茜草炭兩種規(guī)格。2010版《藥典》收載的茜草的炮制方法如下：茜草為“除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切厚片或段，干燥”；茜草炭為“取茜草片或段，照炒炭法炒制表面焦黑色”。但茜草炭仍缺乏科學(xué)客觀的定性和定量標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)重影響了茜草飲片的質(zhì)量及臨床療效。 4 小結(jié)與討論 通過研究表明，我們完全有必要篩選優(yōu)化茜草飲片的炮制工藝，確定其具體的工藝技術(shù)參數(shù)，實(shí)現(xiàn)茜草飲片炮制工藝的規(guī)范化，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)化，以確保茜草飲片的質(zhì)量和臨床療效。 三、研究目標(biāo) 通過本次研究我們要確定茜草飲片的常用炮制規(guī)格，并對其各種炮制規(guī)格的不同工藝進(jìn)行比較，從而篩選優(yōu)化炮制工藝，確定工藝參數(shù)。然后通過中試驗(yàn)證，確定產(chǎn)業(yè)化炮制方案，制定出切實(shí)可行的茜草飲片合格質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)茜草的工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)。這是是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的需要，也是實(shí)現(xiàn)飲片生產(chǎn)規(guī)范化，規(guī)?；男枰?，具有極其重要的實(shí)用價(jià)值。 四、研究內(nèi)容、研究方案 1 茜草炮制歷史沿革研究 茜草性苦寒，歸肝經(jīng)，具涼血祛瘀，止血痛經(jīng)[2]的功效。因其性味苦寒，易損傷脾胃，自古以來關(guān)于茜草的炮制記載眾多。 1.1古代炮制方法 茜草為人類最早使用的紅色染料之一，古文獻(xiàn)中早有記述，《詩經(jīng)》有“縞衣茹藘，聊可與娛”“東門之墠茹藘在阪”等句?！稘h官儀》記有“染園出卮茜，供染御服”之句。《黃帝內(nèi)經(jīng)》載有“四鳥賊骨-藘?nèi)阃琛?，這是茜草入藥的最早記載?！侗窘?jīng)》則載有“茜根”，明確了藥用部分為根，宋代有炒制《證類本草》，焙法《總微》，古代對茜草炮制方法有搗、炒、焙、煮等，輔料有酒、童子便等。 1.1.1切制 此類方法最早見于(雷公炮炙論)："凡使茜草根，用銅刀于槐砧上銼，日干，勿犯鐵并鉛。"《簡要濟(jì)眾方》："生搗羅為散。"《圣濟(jì)總錄》："揀凈銼碎。"現(xiàn)行，取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈潤透，切厚片或段，干燥，篩去灰屑。 1.1.2炮制 1.1.2.1單純加熱制 主要有炒制、燒灰等。炒茜草《日華子》："入藥銼炒用"現(xiàn)行，取凈茜草段或片，置鍋內(nèi)用文火加熱，炒黃?！妒幧駮罚?quot;燒灰存性，研極細(xì)末，用紙包，碗蓋于地上一夕，出火毒。而后逐步發(fā)展為炒制,炒黃為度《集成》。 1.1.2.2輔料制 主要有酒制，酒制茜草 《外科啟玄》："酒洗。"《得配本草》："酒炒”，“童便炒”。 1.2茜草現(xiàn)代炮制方法 茜草的現(xiàn)代炮制方法主要有炒制，炒炭，烤炭、炒黃，酒制等?！吨袊幍洹窂?977至2010年版藥典均收載茜草、茜草炭兩種規(guī)格，2010版《典》收載的茜草的炮制方法如下：茜草為“除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切厚片或段，干燥”；茜草炭為“取茜草片或段，照炒炭法炒制表面焦黑色”。 1.3關(guān)于茜草炮制作用的古今論述 《圣濟(jì)總錄》：生用涼血止血，活血祛瘀等；《得配本草》："酒炒行血”，“童便炒止血”；《十藥神書》："燒灰存性，研極細(xì)末，用紙包，碗蓋于地上一夕，出火毒。2010版《藥典》：涼血，止血，祛瘀，通經(jīng)。 2 茜草飲片實(shí)驗(yàn)室炮制工藝研究 2.1茜草飲片軟化切制工藝的研究 2.1.1藥材軟化時(shí)用水量考察 取粗細(xì)均勻的茜草藥材5份，每份500g,搶水洗凈，分別加藥材量10%、20%、30%、40%、50%倍量的水搶水洗凈，濕布蓋潤，以能將藥材潤透的最少加水量為指標(biāo)優(yōu)選出茜草的最佳用水量。 2.1.2軟化時(shí)間的考察 取粗細(xì)均勻的茜草藥材5份，每份500g,搶水洗凈，加入上述優(yōu)選出的最佳用水量，分別潤制1、2、3、4、5h，以潤透的最短時(shí)間為指標(biāo)優(yōu)選出茜草軟化所需時(shí)間。 2.1.3切片規(guī)格的優(yōu)選 以醇溶性浸出物、大葉茜草素、羥基茜草素含量為指標(biāo)，對不同切片規(guī)格厚片、薄片、短段1cm進(jìn)行優(yōu)選，根據(jù)各指標(biāo)在工藝選擇中的主次地位，給予不同的加權(quán)系數(shù)，求出綜合評價(jià)值，以綜合評價(jià)值對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析。最后，確定茜草飲片軟化切制的最佳規(guī)格。 2.1.4干燥工藝的優(yōu)選 選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。以干燥溫度和干燥時(shí)間為考察的主要因素，每個(gè)因素安排三個(gè)水平，干燥溫度分別為50、60、70、80℃，烘制時(shí)間為2、3、4h，以飲片含水量及大葉茜草素、羥基茜草素含量[5]為指標(biāo)，根據(jù)各指標(biāo)在工藝選擇中的主次地位，給予不同的加權(quán)系數(shù)，求出綜合評價(jià)值，以綜合評價(jià)值對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析。最后，確定茜草飲片干燥的最佳烘制溫度及時(shí)間。按照優(yōu)選出的茜草軟化切制工藝條件制備3批樣品，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，確定優(yōu)選的工藝是否穩(wěn)定可行。 2.2茜草炭炮制工藝研究 研究表明，1,3—二羥基蒽醌為茜草炭主要的止血成分，以1,3—二羥基蒽醌含量、凝血作用為指標(biāo)，以炒制溫度、炒制時(shí)間為考察的主要因素，每個(gè)因素均取三個(gè)水平，選擇L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，根據(jù)各指標(biāo)在工藝選擇中的主次地位，給予不同的加權(quán)系數(shù)，求出綜合評價(jià)值，以綜合評價(jià)值對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析。確定茜草炭的最佳炒制工藝。按照優(yōu)選出的茜草炭炮制工藝條件制備3批樣品，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，確定優(yōu)選的工藝是否穩(wěn)定可行。 3 茜草飲片炮制工藝中試驗(yàn)證 通過實(shí)驗(yàn)室的系列實(shí)驗(yàn)研究，確定了茜草飲片（茜草，茜草炭）的實(shí)驗(yàn)室炮制工藝。為了驗(yàn)證茜草飲片炮制工藝的合理性，確定其產(chǎn)業(yè)化炮制方法，應(yīng)按實(shí)際生產(chǎn)要求，進(jìn)行中試試驗(yàn)。選擇主產(chǎn)地藥材，將實(shí)驗(yàn)室優(yōu)選出的茜草炮制工藝按實(shí)際生產(chǎn)要求，茜草、茜草炭每批投藥量各30kg，進(jìn)行炮制生產(chǎn) 驗(yàn)證本工藝是否適合大生產(chǎn)。中試工藝穩(wěn)定后，生產(chǎn)茜草、茜草炭各10批中試樣品，進(jìn)行主要藥效學(xué)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。 4 主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn) 茜草生、炭品均有止血作用，但以茜草炭止血作用力強(qiáng)。取茜草、茜草炭各10批中試樣品，給家兔造出血模型，分別給家兔灌服茜草、茜草炭樣品溫浸液，或腹腔注射同種劑量茜草、茜草炭提取液。以血液凝固時(shí)間為指標(biāo)，對生、炭品進(jìn)行研究比較。驗(yàn)證中試樣品的生產(chǎn)工藝是否切實(shí)可行。 5 茜草、茜草炭飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究制定 通過以上實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)合藥典規(guī)定方法，參考相應(yīng)的有關(guān)文獻(xiàn)，我們認(rèn)為茜草、茜草炭飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究制定應(yīng)包括飲片名稱、來源、炮制方法、性狀、鑒別、檢查、浸出物、含量測定、性味與歸經(jīng)、功能與主治、用法與用量、貯藏等項(xiàng)目。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究草案如下。 茜草飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究草案 【飲片名稱】 茜草 拼音：qiancao 拉丁名：Rubiae Radix et Rhizoma 【來源】本品為茜草科植物茜草(Rubia Cordifolia L．)的干燥根及根莖的切制加工品。 【炮制方法】取茜草藥材,用優(yōu)選的最佳加水量搶水洗，悶潤至軟化，按飲片軟化切制的最佳規(guī)格切片，在用優(yōu)選的烘制溫度和時(shí)間干燥。 【性狀】根據(jù)10批中試樣品及2010版《藥典》：本品根呈圓柱形，略彎曲；表面紅棕色或暗棕色，具細(xì)縱皺紋，質(zhì)脆，斷面平坦皮部狹，紫紅色，木部寬廣，淺黃紅色，易折斷，味微苦，久嚼刺舌。 【鑒別】(1)本品橫切面：木栓細(xì)胞6～12列，含棕色物。栓內(nèi)層薄壁細(xì)胞含有紅棕色顆粒。韌皮部細(xì)胞較小。形成層不甚明顯。木質(zhì)部占根的主要部分，全部木化，射線不明顯。薄壁細(xì)胞含草酸鈣針晶束。 (2)取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。再取大葉茜草素對照品，加甲醇制成每lml含2.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取等量上述三種溶液分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素納為黏合劑的硅膠G板上，以石油醚—丙酮(4：1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜上，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。 【檢查】根據(jù)中試實(shí)驗(yàn)結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際檢查雜質(zhì)、總灰分、水分、酸不溶灰分。 【浸出物】取茜草飲片，按《中國藥典》2010年版一部茜草飲片水溶性浸出物項(xiàng)下冷浸法測定；以乙醇為溶劑，按《中國藥典》2010年版一部茜草飲片醇溶性浸出物項(xiàng)下的冷浸法測定。 【含量測定】照高效液相色譜法測定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇—水—四氫呋喃(310：90：3)為流動(dòng)相；檢測波長為250nm。理論塔板數(shù)按大葉茜草素計(jì)算應(yīng)不低于4000。 對照品溶液的制備 精密稱取大葉茜草素對照品適量，加甲醇制成每lml含大葉茜草素80μg的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品粉末約O．2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，浸泡過夜，超聲30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。 按10批中試樣品的干燥品計(jì)算，制定大葉茜草素的最低含量限度。 【性味與歸經(jīng)】苦、寒。歸肝經(jīng)。 【功能與主治】涼血、止血，祛瘀，通經(jīng)。用于吐血，衄血，崩漏，外傷出血，經(jīng)閉瘀阻，關(guān)節(jié)痹痛，跌撲腫痛。 【用法與用量】6～9g。 【規(guī)格】25kg；1 kg。 【注意】孕婦慎用。 【貯藏】置干燥處。 茜草炭飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究草案 【飲片名稱】茜草炭 拼音：qiancaotan 拉丁名： Rubiae Carbonisata Radix et Rhizoma 【來源】本品為茜草科植物茜草(Rubia Cordifolia L．)的干燥根及根莖的炒制加工品。 【炮制】取茜草飲片，用優(yōu)化的最佳炒至溫度和時(shí)間炒至表面焦褐色。同時(shí)測定1,3—二羥基蒽醌含量達(dá)到10批中試樣品的最低限度。 【性狀】根據(jù)10批中試樣品：本品表面焦黑色，內(nèi)部棕褐色，質(zhì)輕松，氣微，味澀。 【鑒別】取本品粉末O.5g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lml，作為供試品溶液。另取茜草炭對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。再取1，3-二羥基蒽醌對照品，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素納為黏合劑的硅膠G板上，以石油醚—丙酮(3：2)為展開劑，展開，取出，晾干，日光下在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的棕黃色斑點(diǎn)。置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光黃褐色斑點(diǎn)。 【檢查】根據(jù)中試實(shí)驗(yàn)結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際檢查雜質(zhì)、總灰分、水分、酸不溶灰分。 【浸出物】取茜草飲片，按《中國藥典》2010年版一部茜草飲片水溶性浸出物項(xiàng)下冷浸法測定；以乙醇為溶劑，按《中國藥典》2010年版一部茜草飲片醇溶性浸出物項(xiàng)下的冷浸法測定。 【含量測定】照高效液相色譜法測定。 按10批中試樣品計(jì)算，制定1,3二羥基蒽醌的最低含量限度。 【性味與歸經(jīng)】苦、澀。歸肝經(jīng)。 【功能與主治】止血，用于吐血，衄血，崩漏。 【用法與用量】6—9g。 【規(guī)格】25kg：1kg。 【貯藏】置干燥處。 五 、技術(shù)路線 六、參考文獻(xiàn) [1] 石俊英,李家實(shí).中藥鑒定學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2006:183. [2] 高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京.中國中醫(yī)藥出版社.2007:298. [3] 宋善俊.中草藥的體外血液凝固實(shí)驗(yàn)篩選[J].新醫(yī)學(xué)，1998,9（2）：55. [4] 宋善俊.茜草凝血作用機(jī)理[J].武漢醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999,8（2）：22. [5] 小管卓夫.茜草止血作用的有效活性部位篩選[J].藥學(xué)雜志（日），1991,101（6）：501. [6] 孫翠華，趙金燕.茜草及茜草炭藥理作用比較研究[J].中成藥，1998,20（12）：39. [7] 蘇秀玲，周運(yùn)鵬.茜草的藥理作用及研究與應(yīng)用[J].中醫(yī)藥研究，1991,7（3）：54-56. [8] Hideji Itokawa.茜草抗癌作用的基礎(chǔ)研究[J].藥學(xué)雜志(日),1994，32(1)：284. [9] 樊中心.茜草中的抗癌成分[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)藥分冊,1997，19(4)：3—5. [10] 蘇秀玲,周運(yùn)鵬.茜草,小紅參藥理作用的比較研究[J].中國中藥志,1992,17(6):377. [11] 康鑫,方允中,李小杰.茜草雙酯和S一2(3一氨基丙氨)乙基硫代磷酸對人多形核白細(xì)胞吞噬中化學(xué)發(fā)光和電子順磁共振的影響[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,1990,4(4):251—253. [12] 宋書元,丁琳茂,陳鷹.茜草雙酯參考造血功能的影響及其毒性研究[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志,1985,(10)：625—626. [13] 王鋼力,王金改,陳德昌.茜草與歐茜草的化學(xué)成分研究[J].藥物分析雜志，1997,17(4)：219-220. [14] 張振凌,周艷,黃顯峰.茜草炭止血成分的研究[J].中成藥,2007,(12):31. [15] 2010版《中國藥典》[M].
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本作品以中醫(yī)藥理論體系為指導(dǎo)，充分利用現(xiàn)代科學(xué)知識(shí)和手段進(jìn)行“中藥飲片炮制規(guī)范化研究”，以實(shí)現(xiàn)中藥飲片生產(chǎn)規(guī)范化、中藥飲片質(zhì)量的可控化。通過本次研究著重要確定茜草飲片的常用炮制規(guī)格，并對其各種炮制規(guī)格的不同工藝進(jìn)行比較，從而篩選優(yōu)質(zhì)炮制工藝，確定工藝參數(shù)，然后通過中試驗(yàn)證，確定產(chǎn)業(yè)化炮制方案，制定出切實(shí)可行的茜草飲片合格質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)茜草的工業(yè)化、規(guī)模化生產(chǎn)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 本課題利用中藥現(xiàn)代炮制分析手段，重點(diǎn)研究茜草飲片軟化切制的工藝及茜草炭炮制工藝，并以1,3—二羥基蒽醌含量、凝血時(shí)間為客觀指標(biāo)，科學(xué)地制定了茜草炭的定性和定量標(biāo)準(zhǔn)。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 本課題研究規(guī)范中藥飲片的炮制工藝，制定其科學(xué)合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為中醫(yī)臨床提供優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定的中藥飲片，也可為中成藥、中藥配方顆粒的生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)的原料。通過研究以確保茜草飲片的質(zhì)量和臨床療效，是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化、飲片生產(chǎn)規(guī)范化、規(guī)?；男枰?，具有重要的實(shí)用價(jià)值。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的 本次研究主要確定茜草飲片的常用炮制規(guī)格，并對其各種炮制規(guī)格的不同工藝進(jìn)行比較，從而篩選優(yōu)化炮制工藝，確定工藝參數(shù)。然后通過中試驗(yàn)證，確定產(chǎn)業(yè)化炮制方案，制定出切實(shí)可行的茜草飲片合格質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)茜草的工業(yè)化、規(guī)模化生產(chǎn)。 方法 利用中藥現(xiàn)代炮制技術(shù)，主要從茜草飲片的軟化切制工藝以及茜草炭的炮制工藝著手研究，并選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)選干燥工藝。同時(shí)以中試試驗(yàn)和主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證比較，并以1,3—二羥基蒽醌含量、凝血時(shí)間為客觀指標(biāo)，科學(xué)地制定了茜草炭的定性和定量標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 通過以上方法研究，并結(jié)合藥典規(guī)定，參照相關(guān)研究文獻(xiàn)，初步制定了茜草、茜草炭飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。 結(jié)論 結(jié)合初步的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，說明現(xiàn)階段中藥飲片炮制工藝不規(guī)范、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)太籠統(tǒng)，飲片流通市場混亂，大量偽劣飲片混入市場，通過規(guī)范中藥飲片的炮制工藝，制定其科學(xué)合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以確保茜草飲片的質(zhì)量和臨床療效。
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- [1] 石俊英,李家實(shí).中藥鑒定學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2006:183. [2] 高學(xué)敏.中藥學(xué)[M].北京.中國中醫(yī)藥出版社.2007:298. [3] 宋善俊.中草藥的體外血液凝固實(shí)驗(yàn)篩選[J].新醫(yī)學(xué)，1998,9（2）：55. [4] 宋善俊.茜草凝血作用機(jī)理[J].武漢醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999,8（2）：22. [5] 小管卓夫.茜草止血作用的有效活性部位篩選[J].藥學(xué)雜志（日），1991,101（6）：501. [6] 孫翠華，趙金燕.茜草及茜草炭藥理作用比較研究[J].中成藥，1998,20（12）：39. [7] 蘇秀玲，周運(yùn)鵬.茜草的藥理作用及研究與應(yīng)用[J].中醫(yī)藥研究，1991,7（3）：54-56. [8] Hideji Itokawa.茜草抗癌作用的基礎(chǔ)研究[J].藥學(xué)雜志(日),1994，32(1)：284. [9] 樊中心.茜草中的抗癌成分[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)藥分冊,1997，19(4)：3—5. [10] 蘇秀玲,周運(yùn)鵬.茜草,小紅參藥理作用的比較研究[J].中國中藥志,1992,17(6):377. [11] 康鑫,方允中,李小杰.茜草雙酯和S一2(3一氨基丙氨)乙基硫代磷酸對人多形核白細(xì)胞吞噬中化學(xué)發(fā)光和電子順磁共振的影響[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,1990,4(4):251—253. [12] 宋書元,丁琳茂,陳鷹.茜草雙酯參考造血功能的影響及其毒性研究[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志,1985,(10)：625—626. [13] 王鋼力,王金改,陳德昌.茜草與歐茜草的化學(xué)成分研究[J].藥物分析雜志，1997,17(4)：219-220. [14] 張振凌,周艷,黃顯峰.茜草炭止血成分的研究[J].中成藥,2007,(12):31. [15] 2010版《中國藥典》[M].
同類課題研究水平概述
- 一、茜草及茜草炭的炮制研究 《中國藥典》從1977至2010年版藥典均收載茜草、茜草炭兩種規(guī)格?！吨袊幍洹?010年版收載有茜草和茜草炭兩種炮制規(guī)格，傳統(tǒng)認(rèn)為，炒炭后可增強(qiáng)其止血作用，但目前茜草飲片生產(chǎn)仍停留在傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)控制水平，炮制工藝仍不規(guī)范，缺乏客觀的工藝技術(shù)參數(shù)；茜草飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍不完善，《中國藥典》2010年版茜草收有性狀、含量測定、鑒別、檢查和含量測定項(xiàng)，但茜草炭仍缺乏科學(xué)客觀的定性和定量標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)重影響了茜草飲片的質(zhì)量及臨床療效。 二、止血作用 宋善俊等[3]通過對中草藥體外血液凝固實(shí)驗(yàn)篩選，發(fā)現(xiàn)茜草對凝血三階段（凝血活酶生成，凝血酶生成，纖維蛋白形成）均有促進(jìn)作用，而且其凝血作用可能與其抗肝素[4]效能有關(guān)，茜草止血作用的有效活性部位是水提取液的正丁醇萃取部分[5]。有報(bào)道動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明茜草具有延長小鼠的凝血時(shí)間的作用，而茜草炭則能明顯縮短小鼠的凝血時(shí)間（玻片法測定凝血時(shí)間）[6]，[家兔口服茜草溫浸液后30~60分鐘均有明顯的促進(jìn)血液凝固的作用，表現(xiàn)為復(fù)鈣時(shí)間、凝血酶原時(shí)間及白陶土部分凝血活酶時(shí)間縮短，茜草炭口服也能明顯縮短小白鼠尾部出血的時(shí)間[7]。 三、抗癌作用 系川秀治等[8]發(fā)現(xiàn)從中國購進(jìn)的茜草根的甲醇提取物具有顯著的抗小鼠S180A和P388白血病活性，從中分離到的環(huán)己肽類化合物對白血病、腹水癌、P388、L1210、B16黑色素瘤和實(shí)體瘤、結(jié)腸癌38、Lewis肺癌和艾氏腹水癌均有明顯的抑制作用，廣泛適用于治療小鼠白血病、腹水癌、大腸癌、肺癌和防止癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，其療效等于或優(yōu)于長春堿、絲裂霉素、阿霉素。并且對正常細(xì)胞的毒性低。茜草根的甲醇提取物的氯仿部分可抑制人肝癌細(xì)胞株（Hep3B）細(xì)胞分泌乙型肝炎表面抗原（HbsAg）,而對細(xì)胞株的活性無影響，不顯示細(xì)胞毒性；并從中分離出3個(gè)已知的萘氫醌化合物，可用它作為從天然植物中快速篩選抗HBV藥物的評價(jià)方法。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)對乳腺癌只有甲醇提取物有效，但對C1499白血病、MH134肝癌和26結(jié)腸腺癌幾乎都沒有抗癌活性[9]。
