基本信息
- 項目名稱：
- 高效液相色譜法測定5種蝗蟲黃酮的含量
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 本研究以農(nóng)作物害蟲斑角蔗蝗、長額負蝗、短額負蝗、山稻蝗、中華稻蝗為原料，采用有機溶劑法提取5種蝗蟲中的黃酮類化合物，以蘆丁作為標準品，建立了蝗蟲中黃酮類物質的HPLC含量測定方法，通過測定方法規(guī)范研究確定了HPLC法測定黃酮含量的條件此時黃酮類物質與其它雜質達到基線分離。
- 詳細介紹：
- 黃酮類化合物(flavonoids)泛指兩個苯環(huán)通過中央三碳鏈相互聯(lián)結而成的一系列有機化合物，是重要的抗氧化劑和許多藥用動植物的主要活性成份，是一種值得開發(fā)利用的很好的資源。 本研究以農(nóng)作物害蟲斑角蔗蝗、長額負蝗、短額負蝗、山稻蝗、中華稻蝗為原料，采用有機溶劑法提取5種蝗蟲中的黃酮類化合物，以蘆丁作為標準品，建立了蝗蟲中黃酮類物質的HPLC含量測定方法，通過測定方法規(guī)范研究確定了HPLC法測定黃酮含量的條件是：色譜柱C18(5um,250mmx4.6mm)；進樣量10~20ul；流動相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（50:50）；流速1.0ml/min；檢測波長分別為257nm、268nm、370 nm；該條件下黃酮的出峰時間分別為2.94和2.45min、3.94min、3.84min；柱溫：分別為35℃和25℃；此時黃酮類物質與其它雜質達到基線分離；斑角蔗蝗，長額負蝗，短額負蝗，山稻蝗和中華稻蝗中的黃酮類化合物含量分別為5.035 mg/g、11.2mg/g和0.96mg/g、15.5658mg/g、13.827mg/g、5.5658mg/g。5種蝗蟲中黃酮類化合物的含量明顯高于蜂蛹的含量，也明顯高于銀杏、黃芪等常見中草藥中黃酮含量。 本研究材料來源廣泛，成本低廉，操作簡單易行，且有效地化害為利。查新報告結果表明，很少有蝗蟲乃至昆蟲的黃酮類化合物研究報道很少，本研究結果證實是一類極好的黃酮類物質的資源生物，具有潛在的實際應用前景，符合“兩型”社會建設需求。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 蝗蟲黃酮類化合物的研究尚處于起步階段，尚存在很多不足，表現(xiàn)為以下幾點：1. 研究的蝗蟲種類非常有限，2. 提取分離純化的方法簡單粗放，3.檢測方法簡單。本研究旨在以蘆丁作為標準品，對有機溶劑法提取的蝗蟲黃酮類物質采用高效液相色譜法（HPLC）進行了含量測定方法研究，探索色譜柱、流動相、檢測波長等影響高效液相色譜檢測分析的各主要參數(shù)和參數(shù)組合。
科學性、先進性及獨特之處
- 1. 運用高效液相色譜(HPLC)法，建立適于從蝗蟲中提取黃酮類化合物的高效、精確和重復性好的檢測方法。 2. 篩選出5種具有較高黃酮類化合物含量的蝗蟲種類，發(fā)現(xiàn)均有較高的黃酮類化合物含量，具有較好的研發(fā)前景和應用價值。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 開展蝗蟲資源化技術研究是一項能化害為利、變廢為寶的，有利于“兩型社會建設”的應用基礎研究。已有實驗證據(jù)表明：蝗蟲具有較高的黃酮類化合物含量，是一類有較高開發(fā)價值的資源昆蟲，不僅為后續(xù)研究積累技術參數(shù)與研究經(jīng)驗，也為開辟新的藥源途徑，緩解高含量黃酮類化合物市場緊缺的矛盾；同時能降低蝗蟲的危害程度，對于防災減災，推進“兩型社會”建設將取到積極作用。
學術論文摘要
- 本實驗以長額負蝗，短額負蝗，斑角蔗蝗，山稻蝗和中華稻蝗這五種蝗蟲為材料，以蘆丁作為標準品，探索了有機溶劑法提取黃酮類物質的最佳工藝，通過實驗建立了蝗蟲中黃酮類物質HPLC含量的檢測體系，其條件是：色譜柱C18(5um,250mmx4.6mm)；進樣量10~20ul；流動相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（50:50）；流速1.0ml/min；檢測波長分別為257nm 、268nm、370 nm；該條件下黃酮的出峰時間分別為2.94和2.45min、3.94min、3.84min；柱溫：分別為35℃和25℃；此時黃酮類物質與其它雜質達到基線分離；檢測出的斑角蔗蝗，長額負蝗，短額負蝗，山稻蝗和中華稻蝗中的黃酮類化合物含量分別為5.035mg/g、11.2mg/g和0.96mg/g、13.77621mg/g、13.827mg/g、5.5658mg/g。結果顯示蝗蟲是黃酮類化合物含量很高的資源生物，具有進一步研發(fā)的廣闊前景。
獲獎情況
- 無
鑒定結果
- 從檢出的文獻看，有基于有機溶劑提取法的稻蝗、黃脛小車蝗、東亞飛蝗等黃酮含量測定方法的報道，未見基于高效液相色譜法的5種蝗蟲黃酮的含量確定方法的報道。
參考文獻
- 1、張躍林. 蝗蟲中黃酮的含量及提取工藝研究.安徽農(nóng)業(yè)科學，2006， 34(17):4395-4396，4398. 2、丁紅軍，段玉峰，劉愛青等.中華稻蝗黃酮的提取及抗氧化活性研究.江西農(nóng)業(yè)學報，2007，19(7):87-89. 3、劉愛青，段玉峰，王應強. 蝗蟲中黃酮含量的測定及最佳提取工藝.廣西農(nóng)業(yè)生物科學，2007，1(3):63-66. 4、張躍林，李龍江，張濱. 蝗蟲中黃酮含量測定與提取工藝研究初報. 食品工業(yè).2007，28(4).1-3 5、劉愛青 段玉峰 王應強. 中華稻蝗內黃酮組分的抗氧化活性. 江蘇農(nóng)業(yè)學報.2007，23(3).233-238
同類課題研究水平概述
- 近年來已有學者（何忠1991；熊正英 1999；滕葳 2002；龐凌云 2004）對中華稻蝗、東亞飛蝗、中華蚱蜢等20余種蝗蟲開展營養(yǎng)價值分析與評價研究，部分種類還開展了功能成分研究。在對這些蝗蟲的研究中發(fā)現(xiàn)蛋白質含量占其鮮重的22％，其中7種必需氨基酸的含量占總氨基酸均在30％以上，必需氨基酸含量總和高于FAO/WHO標準模式中氨基酸總量。對中華稻蝗等僅10種蝗蟲開展了黃酮類化合物、脂肪及必需脂肪酸、磷脂、SOD等進行了提取工藝研究（段玉峰 2005； 張躍林 2006；劉愛清 2006，2007）。 目前黃酮類化合物提取方法主要有溶劑法、酶解法和超聲提取法。黃酮類化合物的苷類和極性較大的配基則使用極性較大的溶劑如丙酮、乙醇、甲醇和水或這些溶劑的組合物來提取；酶解法的原理是酶能夠充分破壞以纖維素為主的細胞壁結構及其細胞間相連的果膠，使植物中的果膠完全分解成小分子物質，減小提取的傳質阻力，使植物中的黃酮類物質能夠充分地釋放出來。 黃酮類化合物含量測定有電化學法，光譜法和色譜法三類；采用較多的是光譜法和色譜法，光譜法包括比色法和熒光法，比色法適合測定樣品中的總黃酮，且不需價格昂貴的儀器，一般實驗室均可完成，但精度不高；采用熒光光度法測定總黃酮含量，可排除一些常見金屬離子的干擾，進一步提高了測定結果的準確性。色譜分析法包括薄層掃描法(TLC-Scanning method)、高效液相色譜(high performance liquid chromatography，簡稱HPLC)法（曾里，2008）和超臨界流體色譜(supercritical fluid chromatography，簡稱SFC)法，薄層掃描法簡便快速、靈敏準確、專屬性好；尤其在中草藥復雜成分的分析應用中幾乎是首選方法，現(xiàn)已被國內外藥典普遍采用；HPLC和SFC法對設備要求高，但定量準確、穩(wěn)定，且重現(xiàn)性好。目前這些提取和測定方法主要用于從植物組織中提取分離和純化黃酮類化合物（W. E. Bronner ,1995; Mei-Chih Lin,1999; Daniela Cristea,2003; Kou-Lung Chiu,2002; Yiannis C.,2004; Wei Wu,2004）。
