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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 高效液相色譜法測(cè)定5種蝗蟲(chóng)黃酮的含量
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本研究以農(nóng)作物害蟲(chóng)斑角蔗蝗、長(zhǎng)額負(fù)蝗、短額負(fù)蝗、山稻蝗、中華稻蝗為原料，采用有機(jī)溶劑法提取5種蝗蟲(chóng)中的黃酮類化合物，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，建立了蝗蟲(chóng)中黃酮類物質(zhì)的HPLC含量測(cè)定方法，通過(guò)測(cè)定方法規(guī)范研究確定了HPLC法測(cè)定黃酮含量的條件此時(shí)黃酮類物質(zhì)與其它雜質(zhì)達(dá)到基線分離。
- 詳細(xì)介紹：
- 黃酮類化合物(flavonoids)泛指兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系列有機(jī)化合物，是重要的抗氧化劑和許多藥用動(dòng)植物的主要活性成份，是一種值得開(kāi)發(fā)利用的很好的資源。 本研究以農(nóng)作物害蟲(chóng)斑角蔗蝗、長(zhǎng)額負(fù)蝗、短額負(fù)蝗、山稻蝗、中華稻蝗為原料，采用有機(jī)溶劑法提取5種蝗蟲(chóng)中的黃酮類化合物，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，建立了蝗蟲(chóng)中黃酮類物質(zhì)的HPLC含量測(cè)定方法，通過(guò)測(cè)定方法規(guī)范研究確定了HPLC法測(cè)定黃酮含量的條件是：色譜柱C18(5um,250mmx4.6mm)；進(jìn)樣量10~20ul；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（50:50）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為257nm、268nm、370 nm；該條件下黃酮的出峰時(shí)間分別為2.94和2.45min、3.94min、3.84min；柱溫：分別為35℃和25℃；此時(shí)黃酮類物質(zhì)與其它雜質(zhì)達(dá)到基線分離；斑角蔗蝗，長(zhǎng)額負(fù)蝗，短額負(fù)蝗，山稻蝗和中華稻蝗中的黃酮類化合物含量分別為5.035 mg/g、11.2mg/g和0.96mg/g、15.5658mg/g、13.827mg/g、5.5658mg/g。5種蝗蟲(chóng)中黃酮類化合物的含量明顯高于蜂蛹的含量，也明顯高于銀杏、黃芪等常見(jiàn)中草藥中黃酮含量。 本研究材料來(lái)源廣泛，成本低廉，操作簡(jiǎn)單易行，且有效地化害為利。查新報(bào)告結(jié)果表明，很少有蝗蟲(chóng)乃至昆蟲(chóng)的黃酮類化合物研究報(bào)道很少，本研究結(jié)果證實(shí)是一類極好的黃酮類物質(zhì)的資源生物，具有潛在的實(shí)際應(yīng)用前景，符合“兩型”社會(huì)建設(shè)需求。
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作品專業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- 蝗蟲(chóng)黃酮類化合物的研究尚處于起步階段，尚存在很多不足，表現(xiàn)為以下幾點(diǎn)：1. 研究的蝗蟲(chóng)種類非常有限，2. 提取分離純化的方法簡(jiǎn)單粗放，3.檢測(cè)方法簡(jiǎn)單。本研究旨在以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)有機(jī)溶劑法提取的蝗蟲(chóng)黃酮類物質(zhì)采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行了含量測(cè)定方法研究，探索色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)等影響高效液相色譜檢測(cè)分析的各主要參數(shù)和參數(shù)組合。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 1. 運(yùn)用高效液相色譜(HPLC)法，建立適于從蝗蟲(chóng)中提取黃酮類化合物的高效、精確和重復(fù)性好的檢測(cè)方法。 2. 篩選出5種具有較高黃酮類化合物含量的蝗蟲(chóng)種類，發(fā)現(xiàn)均有較高的黃酮類化合物含量，具有較好的研發(fā)前景和應(yīng)用價(jià)值。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 開(kāi)展蝗蟲(chóng)資源化技術(shù)研究是一項(xiàng)能化害為利、變廢為寶的，有利于“兩型社會(huì)建設(shè)”的應(yīng)用基礎(chǔ)研究。已有實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明：蝗蟲(chóng)具有較高的黃酮類化合物含量，是一類有較高開(kāi)發(fā)價(jià)值的資源昆蟲(chóng)，不僅為后續(xù)研究積累技術(shù)參數(shù)與研究經(jīng)驗(yàn)，也為開(kāi)辟新的藥源途徑，緩解高含量黃酮類化合物市場(chǎng)緊缺的矛盾；同時(shí)能降低蝗蟲(chóng)的危害程度，對(duì)于防災(zāi)減災(zāi)，推進(jìn)“兩型社會(huì)”建設(shè)將取到積極作用。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 本實(shí)驗(yàn)以長(zhǎng)額負(fù)蝗，短額負(fù)蝗，斑角蔗蝗，山稻蝗和中華稻蝗這五種蝗蟲(chóng)為材料，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，探索了有機(jī)溶劑法提取黃酮類物質(zhì)的最佳工藝，通過(guò)實(shí)驗(yàn)建立了蝗蟲(chóng)中黃酮類物質(zhì)HPLC含量的檢測(cè)體系，其條件是：色譜柱C18(5um,250mmx4.6mm)；進(jìn)樣量10~20ul；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（50:50）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為257nm 、268nm、370 nm；該條件下黃酮的出峰時(shí)間分別為2.94和2.45min、3.94min、3.84min；柱溫：分別為35℃和25℃；此時(shí)黃酮類物質(zhì)與其它雜質(zhì)達(dá)到基線分離；檢測(cè)出的斑角蔗蝗，長(zhǎng)額負(fù)蝗，短額負(fù)蝗，山稻蝗和中華稻蝗中的黃酮類化合物含量分別為5.035mg/g、11.2mg/g和0.96mg/g、13.77621mg/g、13.827mg/g、5.5658mg/g。結(jié)果顯示蝗蟲(chóng)是黃酮類化合物含量很高的資源生物，具有進(jìn)一步研發(fā)的廣闊前景。
獲獎(jiǎng)情況
- 無(wú)
鑒定結(jié)果
- 從檢出的文獻(xiàn)看，有基于有機(jī)溶劑提取法的稻蝗、黃脛小車蝗、東亞飛蝗等黃酮含量測(cè)定方法的報(bào)道，未見(jiàn)基于高效液相色譜法的5種蝗蟲(chóng)黃酮的含量確定方法的報(bào)道。
參考文獻(xiàn)
- 1、張躍林. 蝗蟲(chóng)中黃酮的含量及提取工藝研究.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006， 34(17):4395-4396，4398. 2、丁紅軍，段玉峰，劉愛(ài)青等.中華稻蝗黃酮的提取及抗氧化活性研究.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007，19(7):87-89. 3、劉愛(ài)青，段玉峰，王應(yīng)強(qiáng). 蝗蟲(chóng)中黃酮含量的測(cè)定及最佳提取工藝.廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2007，1(3):63-66. 4、張躍林，李龍江，張濱. 蝗蟲(chóng)中黃酮含量測(cè)定與提取工藝研究初報(bào). 食品工業(yè).2007，28(4).1-3 5、劉愛(ài)青 段玉峰 王應(yīng)強(qiáng). 中華稻蝗內(nèi)黃酮組分的抗氧化活性. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào).2007，23(3).233-238
同類課題研究水平概述
- 近年來(lái)已有學(xué)者（何忠1991；熊正英 1999；滕葳 2002；龐凌云 2004）對(duì)中華稻蝗、東亞飛蝗、中華蚱蜢等20余種蝗蟲(chóng)開(kāi)展?fàn)I養(yǎng)價(jià)值分析與評(píng)價(jià)研究，部分種類還開(kāi)展了功能成分研究。在對(duì)這些蝗蟲(chóng)的研究中發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)含量占其鮮重的22％，其中7種必需氨基酸的含量占總氨基酸均在30％以上，必需氨基酸含量總和高于FAO/WHO標(biāo)準(zhǔn)模式中氨基酸總量。對(duì)中華稻蝗等僅10種蝗蟲(chóng)開(kāi)展了黃酮類化合物、脂肪及必需脂肪酸、磷脂、SOD等進(jìn)行了提取工藝研究（段玉峰 2005； 張躍林 2006；劉愛(ài)清 2006，2007）。 目前黃酮類化合物提取方法主要有溶劑法、酶解法和超聲提取法。黃酮類化合物的苷類和極性較大的配基則使用極性較大的溶劑如丙酮、乙醇、甲醇和水或這些溶劑的組合物來(lái)提??；酶解法的原理是酶能夠充分破壞以纖維素為主的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及其細(xì)胞間相連的果膠，使植物中的果膠完全分解成小分子物質(zhì)，減小提取的傳質(zhì)阻力，使植物中的黃酮類物質(zhì)能夠充分地釋放出來(lái)。 黃酮類化合物含量測(cè)定有電化學(xué)法，光譜法和色譜法三類；采用較多的是光譜法和色譜法，光譜法包括比色法和熒光法，比色法適合測(cè)定樣品中的總黃酮，且不需價(jià)格昂貴的儀器，一般實(shí)驗(yàn)室均可完成，但精度不高；采用熒光光度法測(cè)定總黃酮含量，可排除一些常見(jiàn)金屬離子的干擾，進(jìn)一步提高了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。色譜分析法包括薄層掃描法(TLC-Scanning method)、高效液相色譜(high performance liquid chromatography，簡(jiǎn)稱HPLC)法（曾里，2008）和超臨界流體色譜(supercritical fluid chromatography，簡(jiǎn)稱SFC)法，薄層掃描法簡(jiǎn)便快速、靈敏準(zhǔn)確、專屬性好；尤其在中草藥復(fù)雜成分的分析應(yīng)用中幾乎是首選方法，現(xiàn)已被國(guó)內(nèi)外藥典普遍采用；HPLC和SFC法對(duì)設(shè)備要求高，但定量準(zhǔn)確、穩(wěn)定，且重現(xiàn)性好。目前這些提取和測(cè)定方法主要用于從植物組織中提取分離和純化黃酮類化合物（W. E. Bronner ,1995; Mei-Chih Lin,1999; Daniela Cristea,2003; Kou-Lung Chiu,2002; Yiannis C.,2004; Wei Wu,2004）。
