基本信息
- 項目名稱：
- 雙標配體法檢測LDL受體活性試劑盒的研發(fā)
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 科技發(fā)明制作A類
- 簡介：
- 現代快節(jié)奏的生活中諸多因素，均可導致高膽固醇血癥的發(fā)生，進而誘發(fā)危險的心腦血管病。低密度脂蛋白膽固醇是造成血脂升高的主要原因。有效的檢測LDLR活性功能對及早檢查和治療高膽固醇血癥對防治心血管疾病具有十分重要的意義。 我們通過開發(fā)低價高效、快速穩(wěn)定、科研臨床通用的雙標配體試劑盒，進一步完善LDLR活性的檢測技術，極大地促進相關領域的研究，提高臨床診斷篩選家族性高膽固醇血癥的效率。
- 詳細介紹：
- 隨著人們生活水平的提高，飲食結構的改變，所引起的脂質代謝紊亂（如高脂血癥，冠狀動脈粥樣硬化等疾?。┱饾u威脅著人們的身心健康，這些疾病正越來越受到人們的重視。經研究表明，低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）是造成血脂升高的主要原因，它在體內主要是通過LDLR介導，內吞進入細胞而完成代謝活動的。所以，如何有效的檢測LDLR活性功能的手段將可以為及早檢查和治療高膽固醇血癥對防治心血管疾病具有十分重要的意義。 目前，國內市場上已有商品化的LDL受體 ELISA檢測試劑盒被廣泛應用，但是這種方法只能檢測細胞LDL受體的含量，而無法反映LDL受體結合、內吞活性的變化及LDL在細胞內的分布情況，而且操作過程繁瑣，費時、昂貴。 國外公司研制的DiI-LDL試劑雖然已具有一定的市場，但因其價格昂貴,大大增加了檢測成本, 仍未被國內大多數研究機構和醫(yī)院采用。從而嚴重制約著我國LDL受體功能活性研究、臨床FH診斷篩選以及脂蛋白探針標記技術等的發(fā)展。而且我國市場上尚未有商品化的膠體金Au熒光素DiI標記的LDL（Au-DiI-LDL）配體檢測LDL受體的試劑盒，且國內市場上的商品化DiI-LDL,僅有北京協(xié)生生物科技有限責任本項目的熒光標記的氧化型低密度脂蛋白、上海麥莎生物科技有限本項目DiI標記氧化型低密度脂蛋白，但市場份額較小，進行LDL受體活性檢測研究所需要的DiI-LDL大多依賴于國外公司（如BTI公司的DiI標記的人低密度脂蛋白、Kanlen BioMedical公司的DiI-n-LDL等）。而同時利用熒光素DiI和膠體金Au共同標記配體LDL，并將該雙標記配體(Au-DiI-LDL)進一步研制成試劑盒，用于檢測LDL受體活性的方法在國內外均未見報道。 本項目的雙標配體試劑盒能夠對細胞LDL受體活性做定性定量檢測，靈敏度高，特異性強，操作簡便，對人體無毒害，并且能夠反映單細胞LDL受體的活性變化及LDL被細胞攝入后在細胞內的分布情況，所蘊含的市場前景巨大。 同批細胞即可應用熒光顯微鏡、流式細胞儀、激光共聚焦顯微鏡等多種檢測技術對細胞LDL受體結合、內吞的活性進行定性定量分析，也可以利用透射電鏡直觀檢測單細胞內LDL受體的內吞活性及LDL在細胞內的分布情況，即可應用于科學研究中對LDL受體的活性檢測，也可應用于臨床高效診斷篩選FH，具有較高的應用價值。 技術關鍵和主要技術指標： 本項目根據低密度脂蛋白（LDL）受體能夠特異性結合LDL，并內吞進入胞內代謝這一機制，旨在利用成熟的LDL提取純化技術、熒光素(DiI)標記和膠體金(Au)標記技術。通過靈敏性、穩(wěn)定性、重復性、樣本適用性等指標進行質量檢測。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設計、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點、技術關鍵和主要技術指標
- 隨著人們生活水平的提高，飲食結構的改變，所引起的脂質代謝紊亂正逐漸威脅著人們的身心健康，這些疾病正越來越受到人們的重視。經研究表明，低密度脂蛋白膽固醇是造成血脂升高的主要原因。所以，如何有效的檢測LDLR活性功能的手段將可以為及早檢查和治療高膽固醇血癥對防治心血管疾病具有十分重要的意義。 本項目的雙標配體試劑盒能夠對細胞LDL受體活性做定性定量檢測，靈敏度高，特異性強，操作簡便，對人體無毒害，并且能夠反映單細胞LDL受體的活性變化及LDL被細胞攝入后在細胞內的分布情況，所蘊含的市場前景巨大。 同批細胞即可應用熒光顯微鏡、流式細胞儀、激光共聚焦顯微鏡等多種檢測技術對細胞LDL受體結合、內吞的活性進行定性定量分析，也可以利用透射電鏡直觀檢測單細胞內LDL受體的內吞活性及LDL在細胞內的分布情況，即可應用于科學研究中對LDL受體的活性檢測，也可應用于臨床高效診斷篩選FH，具有較高的應用價值。 本項目根據低密度脂蛋白（LDL）受體能夠特異性結合LDL，并內吞進入胞內代謝這一機制，旨在利用成熟的LDL提取純化技術、熒光素(DiI)標記和膠體金(Au)標記技術。通過靈敏性、穩(wěn)定性、重復性、樣本適用性等指標進行質量檢測。
科學性、先進性
- 本項目根據低密度脂蛋白受體能夠特異性結合LDL，并內吞進入胞內代謝這一機制，旨在利用成熟的LDL提取純化技術、熒光素標記和膠體金標記技術，研制開發(fā)低價高效、快速穩(wěn)定、科研臨床通用的雙標配體法檢測LDL受體活性的試劑盒，同批細胞即可應用熒光顯微鏡、流式細胞儀、激光共聚焦顯微鏡等多種檢測技術對細胞LDL受體結合、內吞的活性進行定性定量分析，也可以利用透射電鏡直觀檢測單細胞內LDL受體的內吞活性及LDL在細胞內的分布情況，即可應用于科學研究中對LDL受體的活性檢測，也可應用于臨床高效診斷篩選FH，具有較高的應用價值。 本試劑盒標記配體的獲得率高，樣品適用范圍廣，通過質量檢測與控制保證該試劑盒的特異性達99%，在10～25ug/ml工作范圍內敏感性≥95%，重復性好、穩(wěn)定性高、兩種信號的交叉性小、完全能滿足LDL受體活性檢測試劑盒的要求。
獲獎情況及鑒定結果
- 1、論文：《Construction of Colloid Gold-Fluorescein Double-Labelled Method to Detect LDL Receptor Function》一篇，已投稿Methods（IF：3.763）。 2、《雙標配體法檢測LDL受體活性試劑盒的研發(fā)》獲得2009年的浙江省大學生科技創(chuàng)新活動計劃（新苗人才計劃）的資助。（編號：1160100631）
作品所處階段
- 中試階段
技術轉讓方式
- 面議
作品可展示的形式
- 實物、產品
使用說明,技術特點和優(yōu)勢,適應范圍,推廣前景的技術性說明,市場分析,經濟效益預測
- 本項目試劑盒的部分推廣范圍包括國內各大醫(yī)院（臨床上明確高血脂的病因并確定相應的治療方法，從人群中普查體檢篩選FH患者等診斷需要）、科研單位（相關科學研究中對LDL-R檢測）等LDL-R檢測試劑盒的用戶，市場前景非常廣闊。該產品試劑盒與進口試劑相比，在不影響檢測效果的情況下，由于技術含量高，生產成本低，有很強的市場競爭力，市場潛在價值非?？捎^。 根據雙標配體法檢測LDL受體試劑盒的產品特點項目推廣將選擇無差異市場營銷。無差異市場營銷指公司只推出一種產品,或只用一套市場營銷辦法來進行市場推廣，采取大量市場營銷策略. 大量生產雙標配體法檢測LDL受體試劑盒產品，并通過眾多的渠道大量推銷該產品，用這個產品來獲取市場，取得有利競爭力，提高經濟效益。
同類課題研究水平概述
- 細胞表面LDL-R的分析方法主要包括受體含量檢測和受體活性檢測兩個方面：利用LDL-R抗體和酶聯(lián)免疫的方法可以直接測定LDL-R的含量，但是這種方法只能檢測細胞LDL-R的含量，而無法反映LDL-R結合、內吞活性的變化及LDL在細胞內的分布情況（如目前已有商品化的LDL受體 ELISA檢測試劑盒被廣泛應用。但是這種方法只能檢測細胞LDL受體的含量，而無法反映LDL受體結合、內吞活性的變化及LDL在細胞內的分布情況）。 而為了體外研究LDL的細胞代謝和LDL-R活性，起先使用同位素，采樣困難和操作過程繁瑣，且費時、昂貴，故在研究和臨床診斷中難以廣泛開展。后用膠體金記配體LDL制備Au-LDL探針，與細胞直接孵育，利用透射電鏡觀察細胞內LDL-R的內吞功能及LDL在細胞內的分布情況。 近年來，隨著熒光顯微鏡技術的發(fā)展和專一的熒光分子探針的問世，以DiI、FITC等熒光試劑標記的LDL已代替125I-LDL成為檢測LDL-R結合、內吞活性的主要技術手段，并得到廣泛應用。這種方法能夠對細胞LDL-R功能做定性定量檢測，靈敏度高，特異性強，操作簡便，對人體無毒害，并且能夠反映單細胞LDL-R的活性變化及LDL被細胞攝入后在細胞內的分布情況。 隨著人們生活水平的提高，飲食結構的改變，所引起的脂質代謝紊亂（如高脂血癥，冠狀動脈粥樣硬化等疾?。?，相關的疾病正越來越受到人們的重視，同時相關的研究也在逐漸的深入。 目前，我國市場上尚未有商品化的膠體金Au熒光素DiI標記的LDL配體檢測LDL受體的試劑盒，且國內市場上的商品化DiI-LDL,僅有北京協(xié)生生物科技有限責任本項目的熒光標記的氧化型低密度脂蛋白、上海麥莎生物科技有限本項目DiI標記氧化型低密度脂蛋白，但市場份額較小，進行LDL受體活性檢測研究所需要的DiI-LDL大多依賴于國外本項目。雖然國外本項目研制的DiI-LDL試劑已具有一定的市場，但因其價格昂貴,大大增加了檢測成本, 仍未被國內大多數研究機構和醫(yī)院采用，從而嚴重制約著我國LDL受體功能活性研究、臨床FH診斷篩選以及脂蛋白探針標記技術等的發(fā)展。而同時利用熒光素DiI和膠體金Au共同標記配體LDL，并將該雙標記配體(Au-DiI-LDL)進一步研制成試劑盒，用于檢測LDL受體活性的方法在國內外均未見報道。
