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基本信息

項(xiàng)目名稱(chēng)：
銀杏黃酮及GFP抗動(dòng)脈粥樣硬化作用研究
小類(lèi)：
生命科學(xué)
簡(jiǎn)介：
臨床應(yīng)用證實(shí)，銀杏黃酮由于在體內(nèi)生物利用度低，半衰期短，治療結(jié)果尚不能令人滿(mǎn)意。據(jù)此，我們對(duì)銀杏黃酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)方面的改造和加工，制備了GFP。為進(jìn)一步探討GFP抗AS作用的機(jī)理，在細(xì)胞及分子水平，以銀杏黃酮為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)GFP抗AS作用機(jī)理進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。研究結(jié)果證明，GFP抗AS作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮，這為進(jìn)一步研制和開(kāi)發(fā)新一代黃酮類(lèi)抗心腦血管疾病藥物提供了理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
詳細(xì)介紹：
動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是缺血性心、腦血管疾病發(fā)生的病理學(xué)基礎(chǔ)，其并發(fā)癥是導(dǎo)致我國(guó)中、老年人死亡的主要原因之一。目前臨床上用于治療心腦血管疾病的藥物較多，但普遍存在選擇性差、毒副作用較大等缺點(diǎn)。因此，尋求高效、低毒的心腦血管疾病治療藥物仍是新藥創(chuàng)制的重點(diǎn)領(lǐng)域之一。 銀杏、銀杏黃酮的研究和應(yīng)用在我國(guó)已有多年歷史，藥理作用明確，在治療缺血性心腦血管疾病和呼吸系統(tǒng)疾病等方面療效顯著，臨床應(yīng)用廣泛，是我國(guó)幾十年來(lái)研究和開(kāi)發(fā)中草藥的成功范例之一，并得到了世界范圍的認(rèn)可。已證明，銀杏黃酮是銀杏的主要活性成分，然而，藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，銀杏黃酮在體內(nèi)生物利用度低，半衰期短 (t1/2= 2.1hr)，為保持臨床有效的藥物治療濃度必須頻繁給藥，因此而易造成體內(nèi)蓄積，產(chǎn)生多樣化的毒副反應(yīng)，治療結(jié)果尚不能令人滿(mǎn)意。根據(jù)此特點(diǎn)，我們對(duì)銀杏黃酮進(jìn)行化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)方面的改造和加工，以銀杏葉提取物 (主要含銀杏黃酮) 為先導(dǎo)化合物，引入了具有乳化劑作用、促進(jìn)脂類(lèi)代謝、改善生物膜結(jié)構(gòu)和功能作用的天然植物磷脂，制備了銀杏磷脂復(fù)合物（ginkgo-flavone phytosomes , GFP ）。 一、銀杏磷脂復(fù)合物（ GFP ）的制備： 銀杏黃酮：濰坊醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室提取。 銀杏黃酮磷脂復(fù)合物的制備:銀杏黃酮溶于丙酮中→加溫至60℃→按1:1摩爾比加入大豆磷脂攪拌成溶液狀態(tài)→減壓除去反應(yīng)溶劑→加入適量氯仿，充分溶解其中的磷脂及復(fù)合物→過(guò)濾，收集濾液→減壓蒸餾將氯仿蒸干，收集固體，為黃褐色粉末，置干燥器中保存。 經(jīng)紫外掃描檢測(cè)，大豆磷脂在400-200nm波長(zhǎng)區(qū)無(wú)吸收峰，不干擾銀杏黃酮的測(cè)定。銀杏黃酮、銀杏黃酮磷脂混合物、銀杏黃酮磷脂復(fù)合物的紫外圖譜形狀相同，最大吸收峰均在254.0nm處，紫外光譜分析表明磷脂復(fù)合物中銀杏黃酮的發(fā)色團(tuán)結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變。證明銀杏黃酮與磷脂形成的是復(fù)合物，經(jīng)查新咨詢(xún)未見(jiàn)報(bào)道。 二、銀杏黃酮和GFP對(duì)氧化損傷內(nèi)皮功細(xì)胞功能的影響： 1、方法：第三代細(xì)胞長(zhǎng)至90%左右，換2%血清的培養(yǎng)基同步化細(xì)胞6h，隨機(jī)分為6組： A組：空白對(duì)照組；B組：氧化損傷模型組；C組：銀杏黃酮低濃度組（50ug/ml）；D組：銀杏黃酮高濃度組（100ug/ml）；E組：GFP低濃度組（70ug/ml）；F組：GFP高濃度組（140ug/ml）。各組培養(yǎng)16h后，移去含藥物的培養(yǎng)基，PBS洗2遍后加入含有100umol/L H2O2的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2h。 1.4指標(biāo)檢測(cè)：①常規(guī)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性；②MDA和LDH檢測(cè)按試劑盒(南京建成生物工程研究所)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；③SP免疫組化檢測(cè)ICAM-1在細(xì)胞膜的表達(dá)，NF-κB在細(xì)胞核的表達(dá)；④RT-PCR檢測(cè)ICAM-1 mRNA的表達(dá)。 2、結(jié)果：銀杏黃酮和GFP對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞活性、LDH釋放率、MDA含量的影響，數(shù)據(jù)以?X±S（×10-2）表示，N=10，見(jiàn)表1。 表1 銀杏黃酮和GFP對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞活性、LDH釋放率和MDA含量的影響 組別 MTT LDH MDA A B C D E F 39.56±1.399 23.69±1.271** 28.44±1.222**# 32.37±1.692*# 33.23±1.583*# 38.49±1.020## 18.4±2.0 48.0±2.6** 35.0±2.2**# 27.1±3.1*## 26.7±2.9*## 20.5±2.6## 16.5±1.4 39.5±2.1** 30.9±2.0**# 22.8±1.4*## 23.4±2.2*## 18.1±2.5## *P<0.05 vs control group; **P<0.01 vs control group; #P<0.05 vs H2O2 group(group B); ##P<0.01 vs H2O2 group; H2O2作用于內(nèi)皮細(xì)胞后，細(xì)胞活性較正常對(duì)照明顯降低，LDH釋放率、MDA含量則明顯升高，B組與A組比較有顯著差異（P<0.01）；銀杏黃酮組明顯提高細(xì)胞活性，降低LDH釋放率和MDA含量，與B組比較有明顯差異（P<0.05），且C，D兩組間亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；說(shuō)明銀杏黃酮對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷有保護(hù)作用，且呈劑量依賴(lài)性；E，F(xiàn)兩組具有和銀杏黃酮組類(lèi)似的效應(yīng)，與B組比較具有顯著性差異（P<0.01），F(xiàn)組與D組，E組與C組比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明GFP對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷有保護(hù)作用，且其效果優(yōu)于銀杏黃酮。 2.2 免疫組化檢測(cè)ICAM-1在細(xì)胞膜的表達(dá)，NF-κB在細(xì)胞核的表達(dá)結(jié)果，數(shù)據(jù)以?X±S（×10-2）表示，N=10，見(jiàn)表2； 表2 銀杏黃酮和GFP對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和NF-κB表達(dá)的影響 組別 ICAM-1 NF-κB A B C D E F 2.2±1.7 10.2±3.4** 7.9±1.6**# 5.4±1.2*## 4.9±0.9*## 1.6±0.3## 0.1±0.1 14.7±1.6** 10.1±1.5**# 4.6±1.1*## 4.3±0.7*## 0.8±0.4## *P<0.05 vs control group; **P<0.01 vs control group; #P<0.05 vs H2O2 group(group B); ##P<0.01 vs H2O2 group; 通常情況下ICAM-1在內(nèi)皮細(xì)胞膜上的表達(dá)處于低水平，正常對(duì)照組的細(xì)胞膜呈淺棕黃色，胞核不著色；H2O2100μmol/L作用2h后，血管內(nèi)皮細(xì)胞膜棕黃色顯著加深，光密度值增高，胞核著色明顯，呈深棕黃色，B組與A組比較有顯著性差異（P<0.01），說(shuō)明氧化損傷后內(nèi)皮細(xì)胞膜表面ICAM-1表達(dá)顯著增多，NF-κB活化，p65亞基移位于胞核；銀杏黃酮低、高兩個(gè)濃度組（C組、D組）內(nèi)皮細(xì)胞膜棕黃色逐漸變淺，胞核棕黃色逐漸變淺，光密度值明顯減少，與B組比較有顯著差異（P<0.05），且C、D兩組間亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明銀杏黃酮?jiǎng)┝恳蕾?lài)性地減少細(xì)胞表面ICAM-1的表達(dá)，抑制NF-кB的活化；銀杏黃酮磷脂復(fù)合物低、高兩個(gè)濃度組（E組、F組）與B組比較有顯著性差異（P<0.01）；分別與C、D組比較差別有顯著性， E組與F組比較差別亦有顯著性（P<0.05），而E組與D組無(wú)顯著性差異。在分子水平進(jìn)一步說(shuō)明銀杏黃酮磷脂復(fù)合物的作用優(yōu)于銀杏黃酮。 2.3 半定量RT-PCR測(cè)ICAM-1表達(dá)結(jié)果：(以Rn值表示,`X±S，N=10)，見(jiàn)表3。 表3 銀杏黃酮和GFP對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1基因表達(dá)的影響 組別 ICAM-1（Rn） β-actin（Rn） ICAM-1（Rn）/β-actin（Rn） A B C D E F 2.59±0.31 16.42±1.80 11.17±0.69 8.71±0.92 9.38±1.17 3.54±0.58 0.32±0.14 0.40±0.11 0.35±0.19 0.32±0.14 0.29±0.12 0.39±0.15 8.09±1.76 41.05±3.07** 31.91±3.22**# 27.22±2.57**## 28.13±2.02**## 9.07±2.12## *P<0.05 vs control group;**P<0.01 vs control group; #P<0.05 vs H2O2 group(group B); ##P<0.01 vs H2O2 group; H2O2100μmol/L作用2h后，血管內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)ICAM-1mRNA含量顯著增高，B組與A組比較有顯著性差異（P<0.01），說(shuō)明氧化損傷后內(nèi)皮細(xì)胞活化，通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，ICAM-1基因表達(dá)顯著增強(qiáng)；銀杏黃酮低、高兩個(gè)濃度組（C組、D組）內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)ICAM-1 mRNA含量逐漸減少，與B組比較有顯著差異，且C、D兩組間亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明銀杏黃酮?jiǎng)┝恳蕾?lài)性地減輕細(xì)胞氧化損傷，抑制細(xì)胞活化，減少I(mǎi)CAM-1 mRNA的表達(dá)；銀杏黃酮磷脂復(fù)合物低、高兩個(gè)濃度組（E組、F組）與B組比較有顯著性差異（P<0.01）；分別與C、D組兩兩比較差別亦有顯著性，且E組與F組比較差別亦有顯著性(P<0.01), E組與D組間無(wú)顯著性差別（P>0.05），在基因水平證實(shí)了銀杏黃酮對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用以及其磷脂復(fù)合物的增效作用，并與免疫組化法測(cè)定各組ICAM-1在細(xì)胞膜上的表達(dá)結(jié)果相一致。 結(jié)果表明，氧化損傷后細(xì)胞活性下降、LDH釋放增多、MDA含量增高；銀杏黃酮及GFP能減輕細(xì)胞損傷，減少LDH釋放和MDA的生成，抑制NF-κB的活化，減少細(xì)胞ICAM-1表達(dá)，對(duì)過(guò)氧化氫所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用，呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，且GFP作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。由此，我們得出如下結(jié)論：銀杏黃酮及GFP對(duì)過(guò)氧化氫所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，且呈劑量依賴(lài)性，GFP效果優(yōu)于銀杏黃酮。其機(jī)理可能是通過(guò)減少氧自由基的產(chǎn)生，減輕細(xì)胞損傷，抑制NF-κB活化，減少I(mǎi)CAM-1在細(xì)胞膜的表達(dá)等發(fā)揮作用。 三、銀杏黃酮和GFP對(duì)缺血再灌注損傷大鼠內(nèi)皮功能的影響： 1、分組與給藥： 健康成年雄性Wistar大鼠40只，體重150-200g，隨機(jī)分為4組，每組10只。在造模前，每日灌胃1次，共灌胃14天。假手術(shù)組和模型組：以鼠正常飼料、普通飲水飼養(yǎng)70天。每日上午給予生理鹽水灌胃1ml/kg。銀杏黃酮組：每天上午給予銀杏黃酮乳劑灌胃90mg/kg；銀杏黃酮磷脂復(fù)合物組：每天上午給予銀杏黃酮磷脂復(fù)合物乳劑灌胃90mg/kg。 2、造模：按常規(guī)方法制備缺血再灌注損傷模型； 3、結(jié)果：1）銀杏黃酮及GFP對(duì)大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮ET1、PGI2和TXA2的影響，見(jiàn)表4； 表4 銀杏黃酮及GFP對(duì)缺血再灌注大鼠血清ET1、PGI2和TXA2的影響（`X±S, n=10） 組別 ET1 PGI2 TXA2 PGI2/ TXA2 假手術(shù)組 69.85±13.09 377.60±35.67 294.71±45.79 1.29±0.31 模型組 168.14±24.32* 206.86±34.72* 520.13±37.53* 0.39±0.05* 銀杏黃酮組 131.39±20.41# 259.18±63.63# 429.01±73.64# 0.66±0.21# GFP組 110.31±23.44**△ 307.99±42.33**△ 351.31±39.4**△ 0.89±0.18**△ 注：*與假手術(shù)組比較，P<0.01；#與模型組比較，P<0.05；**與模型組比較，P<0.01;△與銀杏黃酮組比較，P<0.05 從表4中可見(jiàn)，模型組各項(xiàng)指標(biāo)與假手術(shù)組比較，均有顯著差異（P<0.01），表明缺血再灌注后血漿中縮血管物質(zhì)明顯升高，而擴(kuò)血管物質(zhì)明顯降低，PGI2與TXA2的比例失調(diào)，造模成功。兩藥物組各項(xiàng)指標(biāo)與模型組相比，亦有顯著差異（分別為P<0.05， P<0.01），表明對(duì)大鼠預(yù)先給予藥物干預(yù)后，可明顯改善縮血管與擴(kuò)血管物質(zhì)的比例失衡，從而達(dá)到保護(hù)血管內(nèi)皮的功能，而兩藥物組之間，亦有明顯差異(P<0.05)，表明GFP對(duì)改善這種比例失衡的作用要比銀杏黃酮更強(qiáng)，保護(hù)血管內(nèi)皮的作用更好。 2）銀杏黃酮及GFP對(duì)大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮NO、SOD和MDA的影響，見(jiàn)表5； 表5 銀杏黃酮及GFP對(duì)大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮NO、SOD和MDA的影響 組別 NO MDA SOD 假手術(shù)組 32.37±8.21 4.71±1.09 176.23±29.98 模型組 103.74±25.42* 16.43±5.93* 98.90±12.64* 銀杏黃酮組 83.19±9.57# 12.12±2.26# 122.23±13.21# GFP組 63.51±8.79△ 8.29±2.55△ 144.23±15.13△ 注：*與假手術(shù)組比較，P<0.01；#與模型組比較，P<0.05；**與模型組比較，P<0.01;△與銀杏黃酮組比較，P<0.05 從表中可見(jiàn)，模型組各項(xiàng)指標(biāo)與假手術(shù)組比較，均有顯著差異（P<0.01），表明缺血再灌注后自由基生成明顯增多，而自由基清除劑明顯減少。兩藥物組各項(xiàng)指標(biāo)與模型組相比，亦有顯著差異（分別為P<0.05， P<0.01），表明對(duì)大鼠預(yù)先給予藥物干預(yù)后，可減少體內(nèi)自由基的生成，增強(qiáng)自由基清除劑的活性，從而減少自由基對(duì)血管內(nèi)皮的損傷。而兩藥物組之間，亦有明顯差異(P<0.05)，說(shuō)明GFP對(duì)減少自由基生成，增強(qiáng)抗氧化酶活性的作用要比銀杏黃酮更強(qiáng)，從而說(shuō)明其保護(hù)血管內(nèi)皮的作用更好。 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們得出如下結(jié)論： 一、對(duì)過(guò)氧化氫所致血管EC損傷的保護(hù)作用 1、銀杏黃酮及GFP對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致的EC損傷有保護(hù)作用,其機(jī)制可能是直接清除過(guò)氧自由基、提高細(xì)胞抗氧化能力、抑制炎癥反應(yīng)的信號(hào)通路NF-кB活化及炎癥相關(guān)基因ICAM-1的表達(dá)； 2、GFP效果優(yōu)于銀杏黃酮,與其提高銀杏黃酮的溶解度,增加與生物膜的親和性從而提高其生物利用度有關(guān)； 3、銀杏黃酮及GFP對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷有保護(hù)作用在一定濃度范圍內(nèi)有劑量依賴(lài)性。 二、抑制大鼠AS的作用 1、GFP可能通過(guò)抑制NF-?B的活化進(jìn)而抑制iNOS、NO、TNF-α等相關(guān)因子的表達(dá)增強(qiáng)來(lái)抑制AS病變的發(fā)生發(fā)展；結(jié)果表明，GFP抗AS作用強(qiáng)于銀杏黃酮； 2、免疫組化實(shí)驗(yàn)表明，銀杏黃酮和GFP可以抑制高脂血癥引起的主動(dòng)脈壁ICAM-1基因的蛋白表達(dá)；GFP的作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。

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  • 銀杏黃酮及GFP抗動(dòng)脈粥樣硬化作用研究
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作品專(zhuān)業(yè)信息

撰寫(xiě)目的和基本思路

目的：研究銀杏黃酮磷脂復(fù)合物（GFP）對(duì)過(guò)氧化氫所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，在分子水平探討藥物的作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新一代治療缺血性心、腦血管疾病藥物提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。思路：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，用過(guò)氧化氫復(fù)制內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，以銀杏黃酮為陽(yáng)性對(duì)照藥物，用不同濃度的GFP預(yù)處理實(shí)驗(yàn)組的內(nèi)皮細(xì)胞后，運(yùn)用免疫組化、分子生物學(xué)等技術(shù)方法，觀察GFP對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)理。

科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處

1、臨床應(yīng)用證實(shí)，銀杏黃酮由于在體內(nèi)生物利用度低，半衰期短，治療結(jié)果尚不能令人滿(mǎn)意。據(jù)此，我們對(duì)銀杏黃酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)方面的改造和加工，制備了GFP，經(jīng)電鏡、紫外光譜、紅外光譜分析和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定表明，該復(fù)合物與銀杏黃酮和銀杏黃酮、磷脂的混合物明顯不同，證明銀杏黃酮與磷脂形成的是復(fù)合物，經(jīng)查新咨詢(xún)尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究和文獻(xiàn)報(bào)道。2、我們研究結(jié)果表明，GFP抗AS作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。

應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義

我們的初步研究結(jié)果表明，GFP抗AS作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。這為進(jìn)一步探索黃酮類(lèi)天然藥物抗AS作用的分子機(jī)理，研制和開(kāi)發(fā)新一代黃酮類(lèi)抗心腦血管疾病藥物提供了理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具有很大臨床應(yīng)用價(jià)值和廣闊市場(chǎng)前景。

學(xué)術(shù)論文摘要

目的：以銀杏黃酮為陽(yáng)性對(duì)照藥物，觀察銀杏黃酮磷脂復(fù)合物（GFP）對(duì)H2O2所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，在分子水平探討藥物的作用機(jī)制。方法：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，用H2O2復(fù)制氧化損傷模型，用不同濃度的銀杏黃酮和GFP預(yù)處理實(shí)驗(yàn)組的內(nèi)皮細(xì)胞16h后，H2O2 100umol/L孵育2h。然后MTT法檢測(cè)各組內(nèi)皮細(xì)胞的活性；試劑盒檢測(cè)細(xì)胞LDH的釋放率及培養(yǎng)液中MDA含量；利用免疫組化觀察血管細(xì)胞粘附分子（ICAM-1）和核因子κB（NF-κB）在不同組的表達(dá)量；RT-PCR觀察ICAM-1在不同組的表達(dá)差異。結(jié)果：氧化損傷后細(xì)胞活性下降、LDH釋放增多、MDA含量增高；銀杏黃酮及GFP能減輕細(xì)胞損傷，減少LDH釋放和MDA的生成，抑制NF-κB的活化，減少細(xì)胞ICAM-1表達(dá)，對(duì)H2O2所致內(nèi)皮細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用，呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，且GFP作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。結(jié)論：銀杏黃酮及GFP對(duì)過(guò)氧化氫所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，且呈劑量依賴(lài)性，GFP效果優(yōu)于銀杏黃酮。其機(jī)理可能是通過(guò)減少氧自由基的產(chǎn)生，減輕細(xì)胞損傷，抑制NF-κB活化，減少I(mǎi)CAM-1在細(xì)胞膜的表達(dá)等發(fā)揮作用。

獲獎(jiǎng)情況

1、論文《銀杏黃酮及GFP對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究》已被《山東醫(yī)藥》雜志接受； 2、論文《銀杏黃酮及GFP抗動(dòng)脈粥樣硬化作用研究》已被濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)接受。

鑒定結(jié)果

該項(xiàng)目有一定創(chuàng)新性，設(shè)計(jì)合理，技術(shù)路線(xiàn)嚴(yán)謹(jǐn)，技術(shù)資料完整，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，國(guó)內(nèi)未查到與本項(xiàng)目查新點(diǎn)相同的研究報(bào)道。綜合評(píng)審達(dá)國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平。 建議對(duì)GFP的臨床應(yīng)用進(jìn)行深入的研究。

參考文獻(xiàn)

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同類(lèi)課題研究水平概述

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是缺血性心、腦血管疾病發(fā)生的病理學(xué)基礎(chǔ)，其并發(fā)癥是導(dǎo)致我國(guó)中、老年人死亡的主要原因之一。目前臨床上用于治療心腦血管疾病的藥物較多，但普遍存在選擇性差、毒副作用較大等缺點(diǎn)。因此，尋求高效、低毒的心腦血管疾病治療藥物仍是新藥創(chuàng)制的重點(diǎn)領(lǐng)域之一。 銀杏黃酮的研究和應(yīng)用在我國(guó)已有多年歷史，藥理作用明確，在治療缺血性心腦血管疾病和呼吸系統(tǒng)疾病等方面療效顯著，并得到了世界范圍的認(rèn)可。然而，藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，銀杏黃酮在體內(nèi)生物利用度低，半衰期短 (t1/2= 2.1hr)，其治療結(jié)果尚不能令人滿(mǎn)意。據(jù)此，我們對(duì)銀杏黃酮進(jìn)行結(jié)構(gòu)方面的改造和加工，以銀杏黃酮為先導(dǎo)化合物，引入了具有乳化劑作用、促進(jìn)脂類(lèi)代謝、改善生物膜結(jié)構(gòu)和功能作用的天然植物磷脂，制備了銀杏磷脂復(fù)合物（ginkgo-flavone phytosomes , GFP ），經(jīng)電鏡、紫外光譜、紅外光譜分析和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定表明，該復(fù)合物與銀杏黃酮和銀杏黃酮、磷脂的混合物明顯不同，證明銀杏黃酮與磷脂形成的是復(fù)合物，經(jīng)查新咨詢(xún)未見(jiàn)報(bào)道。 為進(jìn)一步探討GFP抗AS作用的機(jī)理，利用多種技術(shù)和方法，在細(xì)胞及分子水平，以銀杏黃酮為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)GFP抗AS作用機(jī)理進(jìn)行了以下較為系統(tǒng)的研究：①血管內(nèi)皮細(xì)胞（EC）氧化損傷的保護(hù)作用：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，制備內(nèi)皮細(xì)胞（EC）氧化損傷模型，檢測(cè)EC活性、LDH和MDA水平，NF-κB和ICAM-I表達(dá)；②大鼠心肌再灌注血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用：健康Wister大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，銀杏黃酮保護(hù)組及GFP保護(hù)組，檢測(cè)各組ET1、PGI2、TXA2水平及血清NO、MDA水平及SOD活性；結(jié)果表明：①過(guò)氧化損傷后，血管EC活性降低，LDH釋放增多，MDA含量升高，銀杏黃酮磷脂復(fù)合物能明顯減輕EC損傷，提高EC抗氧化能力，并能抑制NF-κB活性，降低細(xì)胞膜表面ICAM-I的表達(dá)，對(duì)損傷EC有明顯保護(hù)作用，呈劑量依賴(lài)性，且GFP作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。②GFP對(duì)心肌再灌注大鼠可明顯降低血清NO及MDA含量，而使SOD活性增強(qiáng)，PGI2水平增高，亦使血清ET1、TXA2水平下降，且GFP作用明顯優(yōu)于銀杏黃酮。這為進(jìn)一步探索黃酮類(lèi)天然藥物抗AS作用的分子機(jī)理，研制和開(kāi)發(fā)新一代黃酮類(lèi)抗心腦血管疾病藥物提供了依據(jù)，具有很大臨床應(yīng)用價(jià)值和廣闊市場(chǎng)前景。
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