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基本信息
- 項(xiàng)目名稱(chēng)：
- 《基于痰脫落細(xì)胞學(xué)制備技術(shù)在肺癌診斷中的研究》
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類(lèi)：
- 生命科學(xué)
- 大類(lèi)：
- 自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文
- 簡(jiǎn)介：
- 肺癌是最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，發(fā)病率以及死亡率均位于首位，近年發(fā)病率呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。為此肺癌的早期發(fā)現(xiàn)，早期診斷尤為重要。痰找脫落細(xì)胞檢查是目前臨床診斷肺癌的常用方法，但敏感度較低。LCT是近年來(lái)一項(xiàng)新技術(shù)，可以使細(xì)胞快速固定并去除雜質(zhì)干擾，能提高細(xì)胞檢出率及試驗(yàn)可重復(fù)性。高滲鹽水霧化吸入通過(guò)其高滲刺激作用使支氣管深部痰液易于引出。因此，我們進(jìn)行將高滲鹽水霧化、LCT及ICC技術(shù)結(jié)合運(yùn)用于肺癌診斷的研究。
- 詳細(xì)介紹：
- 肺癌是世界各地最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，也是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，長(zhǎng)期存活率低，預(yù)后較差，發(fā)病率以及死亡率均位于所有惡性腫瘤首位，近年發(fā)病率呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。為此肺癌的早期發(fā)現(xiàn)，早期診斷尤為重要。痰找脫落細(xì)胞檢查是目前臨床診斷肺癌的常用方法，其具有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便和易被患者接受的特點(diǎn) ,其特異度高 ,但敏感度較低 ,假陰性率約為 20 %～60 % ,并有一定的假陽(yáng)性(約 2 %)。 LCT是近年來(lái)引進(jìn)的一項(xiàng)新技術(shù)，其使用專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞固定液及特殊的處理程序，可以使細(xì)胞快速固定并去除其中的血液、黏液、炎癥細(xì)胞等的干擾，從而提高細(xì)胞檢出率及試驗(yàn)的可重復(fù)性。 高滲鹽水霧化吸入對(duì)支氣管和肺泡內(nèi)壁有一定的潤(rùn)滑作用，同時(shí)其高滲刺激作用也可使支氣管深部痰液易于引出。因此，誘導(dǎo)排痰作為一種無(wú)創(chuàng)性檢查手段逐漸受到臨床醫(yī)師的認(rèn)可。 本研究首先探討液基薄層細(xì)胞學(xué)（LCT）和細(xì)胞免疫化學(xué)（ICC）技術(shù)在肺癌患者痰液檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。其次在體外建立粘膜受損模型，研究不同濃度氯化鈉在不同時(shí)間內(nèi)對(duì)粘膜細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響，探索細(xì)胞受電解質(zhì)濃度影響的耐受程度，找出較適宜的濃度范圍及作用時(shí)間，使臨床霧化吸入的高滲鹽水的濃度及作用時(shí)間更加適宜，減少脫落細(xì)胞的損傷，以提高肺癌診斷率。最后在原有的高滲鹽水霧化技術(shù)及LCT上，改進(jìn)制備細(xì)胞病理標(biāo)本工藝使得細(xì)胞膜不被破壞，保證了細(xì)胞的完整性，便于細(xì)胞的免疫組化，提高肺癌診斷率及病理分型。 研究一：應(yīng)用LCT檢測(cè) 3 466例痰標(biāo)本，共檢出135例肺癌，其中有10例不能明確癌細(xì)胞類(lèi)型的標(biāo)本，應(yīng)用ICC技術(shù)，分別進(jìn)行34βE12、Ckpan等抗體標(biāo)記，結(jié)果顯示：經(jīng)ICC標(biāo)記后明確診斷鱗癌3例、腺癌2例、小細(xì)胞癌4例，并得到纖支鏡活檢證實(shí)。用ICC標(biāo)記后診斷明確率達(dá)90%，明顯優(yōu)于單純LCT。結(jié)論：在痰液脫落細(xì)胞檢查中，LCT結(jié)合ICC能使肺癌細(xì)胞類(lèi)型診斷明確率顯著提高。 研究二：通過(guò)爬片培養(yǎng)粘膜上皮細(xì)胞30份，分5組，分別以5個(gè)梯度濃度（0.9%、1.8%、2.7%、3.6%、4.5%）NaCl溶液作用，并各取6個(gè)時(shí)間點(diǎn)（10min、20min、30min、40min、50min、60min）的玻片進(jìn)行HE染色固定；應(yīng)用病理顯微圖像分析系統(tǒng)采集圖片測(cè)定細(xì)胞及胞核的等效直徑，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞總數(shù)、裸核細(xì)胞數(shù)；計(jì)算核漿比和裸核出現(xiàn)率。結(jié)果顯示：粘膜上皮細(xì)胞核漿比例和裸核細(xì)胞出現(xiàn)率與高滲鹽水的濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)。且高滲鹽水濃度達(dá)到2.7%、作用時(shí)間達(dá)到20min時(shí)，粘膜上皮細(xì)胞的核漿比例和裸核細(xì)胞出現(xiàn)率均開(kāi)始出現(xiàn)顯著升高。結(jié)論：粘膜上皮細(xì)胞對(duì)高滲鹽水濃度低于2.7%且作用時(shí)間在20min內(nèi)具有耐受現(xiàn)象，超過(guò)此范圍可對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生較嚴(yán)重的損傷。為高滲鹽水霧化吸入提供了適宜的濃度及時(shí)間。 研究三：40例疑診為支氣管肺癌患者經(jīng)霧化吸入40ml的2.7%的高滲鹽水20min，所得到痰標(biāo)本進(jìn)行LCT處理，進(jìn)行常規(guī)診斷， 35例LCT殘液同時(shí)進(jìn)行ICC標(biāo)記。結(jié)果顯示： 40例可疑患者中，常規(guī)診斷肺癌共35例，陽(yáng)性檢出率87.50%，靈敏度100%，特異性100%，兩種方法肺癌檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。35例經(jīng)ICC標(biāo)記結(jié)果顯示細(xì)胞類(lèi)型與常規(guī)診斷一致。結(jié)論：運(yùn)用2.7%高滲鹽水霧化20min后結(jié)合LCT技術(shù)與ICC技術(shù)檢查的研究值得重視和推廣，可為早期肺癌及其他呼吸系統(tǒng)疾病的研究、監(jiān)測(cè)和普查奠定了基礎(chǔ)。 LCT技術(shù)的應(yīng)用在很大程度上解決了常規(guī)痰涂片中存在的粘液、炎細(xì)胞及其它雜質(zhì)等的干擾問(wèn)題，如結(jié)合ICC技術(shù)，不但能提高痰脫落細(xì)胞的陽(yáng)性檢出率，并且能明確腫瘤細(xì)胞的類(lèi)型，為臨床治療提供幫助。 本組研究表明，應(yīng)用2.7%濃度的高滲鹽水霧化誘導(dǎo)20分鐘，可解決痰量少等問(wèn)題，并且能保證細(xì)胞的完整性，為明確腫瘤診斷提供了保證。我們發(fā)現(xiàn)在取痰的過(guò)程中，有些患者盡管超聲霧化吸入，但還是不能將痰液咳出。臨床上，患有呼吸系統(tǒng)疾病的病人也會(huì)出現(xiàn)咳痰困難的現(xiàn)象，如慢性阻塞性肺疾病、呼吸衰竭病人。痰液的潴留對(duì)機(jī)體帶來(lái)危害，并促進(jìn)呼吸道內(nèi)的微生物繁殖滋生，導(dǎo)致炎癥惡化與擴(kuò)散，引發(fā)繼發(fā)感染。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)一款操作簡(jiǎn)單、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)的輔助排痰裝置?；颊呖梢杂迷撗b置自行刺激排痰，從而節(jié)省護(hù)士在協(xié)助排痰上所浪費(fèi)的時(shí)間。由于此款裝置操作簡(jiǎn)單，在家療養(yǎng)的患者也可使用此裝置。
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作品專(zhuān)業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- 目的：改進(jìn)痰脫落細(xì)胞學(xué)制備技術(shù)，提高肺癌診斷率。 基本思路：首先，探討液基薄層細(xì)胞學(xué)（LCT）技術(shù)及免疫化學(xué)標(biāo)記（ICC）技術(shù)在肺癌及其類(lèi)型診斷中價(jià)值。其次，研究不同濃度氯化鈉和時(shí)間對(duì)粘膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響，說(shuō)明高滲鹽水誘導(dǎo)痰在臨床應(yīng)用中出現(xiàn)裸核及細(xì)胞膜破裂原因。再次，在原有高滲鹽水霧化技術(shù)及LCT上，改進(jìn)制備細(xì)胞病理標(biāo)本工藝，保證細(xì)胞完整性。最后，設(shè)計(jì)一款簡(jiǎn)單、實(shí)用輔助排痰裝置，協(xié)助患者排痰。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 1、高滲鹽水霧化誘導(dǎo)取痰能增加痰量和卷帶脫落細(xì)胞量，根據(jù)體外建模得到的耐受濃度和時(shí)間提取細(xì)胞能有效提高肺癌陽(yáng)性診斷率，且較纖支鏡安全。 2、液基細(xì)胞診斷試劑能保存細(xì)胞完整性、抗原生物特性并能去除痰中雜質(zhì)，延長(zhǎng)痰液送檢時(shí)間，最大限度收集有效細(xì)胞，利于病理醫(yī)師觀察診斷。 3、按壓胸骨切跡上氣管前壁引起咳嗽從而促進(jìn)痰排出是一種生理反射，對(duì)機(jī)體無(wú)損害。設(shè)計(jì)的裝置使臨床取痰標(biāo)本更簡(jiǎn)便、安全、有效。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 1、體外得到的耐受濃度可作為今后粘膜細(xì)胞提取的參考，助于完整細(xì)胞提取。 2、將高滲鹽水霧化誘導(dǎo)痰、LCT與ICC結(jié)合運(yùn)用于肺癌早期診斷及分型的技術(shù)可操作性好、無(wú)創(chuàng)，能避免一系列并發(fā)癥且成本較低，可廣泛運(yùn)用于肺癌篩查及診斷，為肺癌治療提供依據(jù)，改善肺癌患者生活質(zhì)量并提高生存率，進(jìn)而增加社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。 3、制作的裝置方便患者自行取痰，減少人力浪費(fèi)；也可在家使用，減少醫(yī)院人流及醫(yī)源性感染機(jī)會(huì)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 為提高早期肺癌患者支氣管黏膜脫落細(xì)胞的陽(yáng)性檢出率。首先應(yīng)用LCT技術(shù)對(duì)3466例可疑肺癌痰標(biāo)本檢查診斷，判斷陽(yáng)性率，不能明確癌細(xì)胞類(lèi)型的，結(jié)合ICC對(duì)其LCT殘液分別進(jìn)行抗體標(biāo)記，從而確定細(xì)胞類(lèi)型，探討LCT和ICC技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。其次爬片培養(yǎng)粘膜上皮細(xì)胞30份，分5組以5個(gè)梯度濃度（0.9%、1.8%、2.7%、3.6%、4.5%）NaCl溶液作用，并各取6個(gè)時(shí)間點(diǎn)玻片進(jìn)行HE染色固定，應(yīng)用病理顯微圖像分析系統(tǒng)采集圖片測(cè)定細(xì)胞及胞核的等效直徑，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞總數(shù)、裸核細(xì)胞數(shù)，計(jì)算核漿比和裸核出現(xiàn)率，為高滲鹽水霧化吸入提供適宜的數(shù)據(jù)。最后對(duì)40例疑診為支氣管肺癌的患者霧化吸入適宜濃度高滲鹽水獲取痰液，并對(duì)其痰標(biāo)本進(jìn)行LCT處理，并應(yīng)用ICC標(biāo)記，以明確肺癌診斷及細(xì)胞分型。 經(jīng)上述研究發(fā)現(xiàn)：1.痰液脫落細(xì)胞檢查中，LCT結(jié)合ICC使肺癌細(xì)胞類(lèi)型診斷明確率顯著提高。2. 粘膜上皮細(xì)胞對(duì)高滲鹽水濃度低于2.7%且作用時(shí)間在20min內(nèi)具有耐受現(xiàn)象，超過(guò)此范圍對(duì)細(xì)胞可產(chǎn)生較嚴(yán)重的損傷。3. 運(yùn)用2.7%高滲鹽水霧化20min后結(jié)合LCT技術(shù)與ICC技術(shù)檢查的研究值得重視和推廣。
獲獎(jiǎng)情況
- 1、《LCT與ICC在肺癌患者痰液檢測(cè)中的應(yīng)用及評(píng)價(jià)》發(fā)表于二級(jí)核心期刊《山東醫(yī)藥》2009 年49卷52期 。 2、《粘膜上皮細(xì)胞對(duì)高滲鹽水的耐受性研究》發(fā)表于《嘉興學(xué)院學(xué)報(bào)》2010年22卷6期。
鑒定結(jié)果
- 同意推薦。
參考文獻(xiàn)
- LCT技術(shù): [1]陳世梁.膜式超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用[J].實(shí)用癌癥雜志,2007,3(2):196-197. [2]Laverty CR, Farnsworth A, Thurloe J K, et al. Evaluation of the Cyto Rich slide preparation process [J]. Anal Quant Cytol Histol, 1997,19(3):239-245. [3]李建華,付志民,吳廣平,等.液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)對(duì)非婦科細(xì)胞標(biāo)本腫瘤細(xì)胞診斷的意義[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2004,10(5):414-420. [4]吳廣平,王恩華,李建華,等.液基細(xì)胞學(xué)檢查系統(tǒng)在肺癌患者痰液檢查中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)肺癌雜志,2006,9(2):192-195. 高滲鹽水超聲霧化技術(shù): [1]楊曉蕓，胡雪蓮，景莉玲.高滲鹽水霧化吸入誘導(dǎo)痰在肺癌細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志,2008,30（4）:336. [2]羅曉東，婁德劍等.高滲鹽水霧化吸入誘導(dǎo)痰對(duì)老年人肺癌細(xì)胞學(xué)的診斷作用[J] .中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2005,2(24):117-118.
同類(lèi)課題研究水平概述
- 纖維支氣管鏡肺泡灌洗術(shù)是目前臨床肺癌確診常用手段，其是以纖支鏡嵌入到肺段或亞段支氣管水平，反復(fù)以無(wú)菌生理鹽水灌洗、回收的一項(xiàng)技術(shù)，并對(duì)其回收液（BALF）進(jìn)行細(xì)胞學(xué)、生化學(xué)、酶學(xué)和免疫學(xué)等一系列檢測(cè)和分析。 該技術(shù)與霧化吸入高滲鹽水誘導(dǎo)痰比較： 共同目的：支氣管末端粘膜脫落細(xì)胞制備與診斷 不同之處：纖維支氣管鏡肺泡灌洗術(shù)是使用纖維支氣管鏡進(jìn)行操作，對(duì)近期心肌梗死、嚴(yán)重心律失?；颊呤墙玫?；在患有高血壓病、冠心病、大咯血急性期、危重病人或體質(zhì)極度衰弱者的情況下需要慎用；在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)惡心、咳嗽、紫紺、出汗、煩躁、呼吸困難、肺部哮鳴音、呼吸和（或）心跳停止等情況；術(shù)后會(huì)出現(xiàn)鼻腔咽喉不適、疼痛、鼻衄、聲嘶、頭暈、胸悶等狀況。而霧化吸入高滲鹽水誘導(dǎo)痰是使用霧化機(jī)，適用于任何患者，甚至對(duì)于重癥穩(wěn)定性哮喘、慢性阻塞性肺病患者、對(duì)纖維支鏡檢有相對(duì)禁忌證或有危險(xiǎn)或拒絕纖維支氣管鏡檢的老年人；無(wú)任何禁忌癥、慎用情況、操作過(guò)程中可能出現(xiàn)的不良情況以及術(shù)后不良反應(yīng)。從上述比較中，可以發(fā)現(xiàn)霧化吸入高滲鹽水誘導(dǎo)痰技術(shù)不論從適用對(duì)象、操作方式還是操作后對(duì)機(jī)體的影響上均占優(yōu)勢(shì)。
