基本信息
- 項目名稱：
- 禽流感（H5N1）油乳劑滅活疫苗抗原效價快速檢測方法的建立
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術(shù)論文
- 簡介：
- 建立了以三氯甲烷為破乳劑，8 000 r/min 離心5分鐘的快速脫乳分離疫苗抗原，應用HA試驗檢測疫苗抗原的HA效價的禽流感（H5N1）油乳劑滅活疫苗抗原效價快速檢測方法。同時明確了破乳后抗原液與制成油乳疫苗前相應水相的HA價下降1～3個滴度，用該法檢測的疫苗效價的高低順序與免疫小鴨的每周抗體水平高低順序成正相關(guān)關(guān)系。
- 詳細介紹：
- 試驗通過對低溫凍融法、研磨法、稀釋高速搗碎法、95%乙醇法及三氯甲烷法破乳效果比較, 篩選出三氯甲烷為油乳劑疫苗的有效破乳劑。將不同抗原含量的H5亞型滅活疫苗破乳后離心取上清液，測定其HA價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)脫乳后上清液與制成油乳疫苗前相應水相的HA價下降1～3個滴度, 且不同稀釋度抗原制備H5亞型疫苗經(jīng)脫乳處理后其上清液的HA價與熒光定量PCR 結(jié)果基本成正比，建立了禽流感油乳劑疫苗抗原HA價的檢測方法，該法具有快速、經(jīng)濟、簡便, 尤其適合于對大批量及基層應用。采用該法對來源于國家指定廠家生產(chǎn)的不同批次20瓶AI H5N1油乳劑滅活疫苗進行檢測，并用檢測的0log，2log2，3log2，4log2d 4個不同效價的疫苗對雛鴨進行平行免疫試驗，比較免疫抗體水平，結(jié)果不同來源疫苗的上清HA效價差異較大，最高為4log2，最低為0。HA價分別為0、2log2、3log2和4log2的AI油苗均可誘導小鴨產(chǎn)生一定水平HI抗體，其抗體峰值分別為3.73log2、4.82log2、6.54log2、6.7log2，所誘導的AIH5HI抗體水平具有明顯的差異，其抗體水平高低與免疫用疫苗效價高低情況成正相關(guān)關(guān)系。同時證明了該檢測方法的科學性。
作品圖片
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 建立了以三氯甲烷為破乳劑，8 000 r/min 離心5分鐘的快速脫乳分離疫苗抗原，應用HA試驗檢測疫苗抗原的HA效價的禽流感（H5N1）油乳劑滅活疫苗抗原效價快速檢測方法。同時明確了破乳后抗原液與制成油乳疫苗前相應水相的HA價下降1～3個滴度，用該法檢測的疫苗效價的高低順序與免疫小鴨的每周抗體水平高低順序成正相關(guān)關(guān)系。
科學性、先進性及獨特之處
- 1、建立了禽流感油乳劑滅活疫苗HA效價的快速檢測方法，解決了目前禽流感油乳劑滅活疫苗成品使用者在使用前進行疫苗效價檢測難題。 2、基本明確所檢測疫苗的HA效價與用于制備該疫苗的水相抗原效價的數(shù)量關(guān)系。 3、明確了所檢測疫苗的HA效價與免疫鴨HI抗體水平的關(guān)系，提高了本檢測方法對疫苗檢測結(jié)果評價的科學性。
應用價值和現(xiàn)實意義
- 1、禽流感油乳劑滅活疫苗HA效價的快速檢測方法可以直接應用于疫苗采購方在采購疫苗對不同來源疫苗進行基本的抗原效價檢測，從而對疫苗來源做到更好的篩選； 2、家禽生產(chǎn)者在使用疫苗前對疫苗使用前確定其抗原效價，避免使用低效價疫苗，引起免疫失敗，達不到預期防控效果。 3、本檢測方法操作簡便，所需儀器設(shè)備較為簡單，無需特別試劑，適合于畜牧獸醫(yī)基層及廣大生產(chǎn)場使用，具有較強的推廣性。
學術(shù)論文摘要
- 試驗通過對低溫凍融法、研磨法、稀釋高速搗碎法、95%乙醇法及三氯甲烷法破乳效果比較, 篩選出三氯甲烷為油乳劑疫苗的有效破乳劑。將不同抗原含量的H5亞型滅活疫苗破乳后離心取上清液，測定其HA價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)脫乳后上清液與制成油乳疫苗前相應水相的HA價下降1～3個滴度, 且不同稀釋度抗原制備H5亞型疫苗經(jīng)脫乳處理后其上清液的HA價與熒光定量PCR 結(jié)果基本成正比，建立了禽流感油乳劑疫苗抗原HA價的檢測方法，該法具有快速、經(jīng)濟、簡便, 尤其適合于對大批量及基層應用。采用該法對來源于國家指定廠家生產(chǎn)的不同批次20瓶AI H5N1油乳劑滅活疫苗進行檢測，并用檢測的疫苗對雛鴨進行平行免疫試驗，比較免疫抗體水平，其抗體水平高低與免疫用疫苗效價高低情況成正相關(guān)關(guān)系。同時證明了該檢測方法的科學性。
獲獎情況
- 2010年在佛山科學技術(shù)學院舉辦的第九屆“挑戰(zhàn)杯”獲得二等獎; 2011年在廣東省舉辦的第十一屆“挑戰(zhàn)杯”廣東大學生課外學術(shù)科技作品競賽終審決賽獲得三等獎
鑒定結(jié)果
- 已完成論文
參考文獻
- 現(xiàn)有技術(shù)： 1、對抗原（水相）制備油乳劑疫苗前的效價測定技術(shù)； 2、對油乳劑滅活疫苗接種動物后的免疫抗體檢測技術(shù)； 3、免疫動物的免疫保護試驗（攻毒）。 相關(guān)技術(shù)文獻檢索目錄： [1]農(nóng)業(yè)部. 中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程[M]．化學工業(yè)出版社，2000 [2]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.高致病性禽流感疫情處置技術(shù)規(guī)范( 試行)[S],2004 [3]姜北宇.禽用新疫苗的研發(fā)與申報[J].中國家禽,2010,31(24):5-8 [4]王蕾. 禽用生物制品的質(zhì)量檢測[J].畜禽業(yè)，2007,9：38-39 [5]丁宜寶.獸用疫苗學[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，2008,11:217-220,336-344
同類課題研究水平概述
- 禽流感自1878年暴發(fā)于意大利，100余年來，該疾病逐步傳遍世界各主要養(yǎng)禽的國家和地區(qū)。目前禽流感在世界范圍內(nèi)的流行，給養(yǎng)禽業(yè)以嚴重打擊的同時，對公共衛(wèi)生事業(yè)也構(gòu)成重大威脅。防控禽流感已成為國際社會共同的責任，目前世界各國均高度重視防控禽流感，投入大量的人力物力進行相關(guān)研究。國內(nèi)外眾多專家學者對禽流感的流行趨向、病原演變動態(tài)、致病機理、診斷技術(shù)、免疫機理等進行了大量研究，近年來我國對禽流感相關(guān)疫苗研制、免疫程序、免疫效果等方面更是進行深入的研究，并取得了可喜的成績，在有效防控禽流感上起到了關(guān)鍵作用。但是由于禽流感病毒易于變異，加上水禽（尤其是白鴨）對禽流感疫苗的免疫反應低下等因素，禽群防控禽流感的壓力越來越大，禽群仍然受到禽流感的嚴重威脅，應當注意到水禽禽流感免疫失敗的情況仍然時有發(fā)生，事實上對大量水禽禽流感免疫監(jiān)測的結(jié)果顯示，眾多的免疫群抗體合格率較低，遠未達到合格的標準。但究其原因，除了免疫程序的科學性和家禽自身的免疫機能外，所用疫苗的質(zhì)量是免疫成功的前提，尤其是疫苗抗原效價的高低與免疫效果具有直接關(guān)系。對于禽流感疫苗抗原效價檢測，目前主要由生產(chǎn)廠家按照國家相關(guān)要求與規(guī)程進行檢測把控，制備成品出廠后直至接種家禽基本不再進行檢測，用戶只有通過采用動物免疫接種后的抗體檢測來衡量免疫效果。雖然目前對禽流感疫苗免疫抗體的檢測方法、免疫抗體的消長規(guī)律以及免疫效力等方面均進行了深入的研究，并形成了較為成熟的技術(shù)體系。但免疫效果檢測費時費力，不利于大量樣品的檢測，且步驟繁瑣，只能進行少數(shù)的抽檢，而更多的中小養(yǎng)戶沒有相關(guān)的檢測能力，只能是按常規(guī)注射疫苗。實際上，疫苗出廠后還要經(jīng)過運輸、貯存等諸多環(huán)節(jié)，這些環(huán)節(jié)如出現(xiàn)不當均可疫苗的效價造成影響，所以禽流感疫苗在使用前如能進行效價的檢測，可以有效避免低效價疫苗進入流通與使用，導致引起免疫失敗而達不到預期防控效果。但目前有關(guān)適合基層使用的禽流感疫苗成品抗原效價的快速檢測方法尚為欠缺，本實驗建立了“氯仿脫乳－HA快速檢測AI油乳劑滅活苗效價”檢測方法，該法具有快速、經(jīng)濟、簡便, 尤其適合于對大批量及基層應用，基本解決禽流感油乳劑疫苗成品的抗原檢測問題。
