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基本信息
- 項目名稱：
- 滅活A(yù)組鏈球菌對紅細(xì)胞及其膜蛋白影響的實驗研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 本實驗通過細(xì)菌培養(yǎng)、差速離心分離、提取純化和SDS—PAGE電泳技術(shù)，對紅細(xì)胞(RBC)膜蛋白含量進(jìn)行分析，研究A組鏈球菌對RBC及其膜蛋白的影響。結(jié)果顯示，A組鏈球菌致使RBC形態(tài)異常，SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)RBC膜蛋白有多條帶含量顯著低于生理鹽水對照組。認(rèn)為滅活A(yù)組鏈球菌引起溶血性貧血是RBC膜蛋白的含量減少所致。
- 詳細(xì)介紹：
- 本研究旨在探究Ａ組鏈球菌致溶血性貧血的機(jī)理，為溶血性貧血疾病治療提供新思路。采用滅活Ａ組鏈球菌制備家兔溶血性貧血模型，在注射后5個不同時間點取血，涂片光鏡觀察；通過差速離心分離、提取純化和SDS—PAGE電泳技術(shù)，對紅細(xì)胞(RBC)膜蛋白含量進(jìn)行分析，研究A組鏈球菌對RBC及其膜蛋白的影響。每個時間點均設(shè)有生理鹽水對照組。結(jié)果顯示，A組鏈球菌在第96h、7d、和第14d，致RBC形態(tài)異常，體積和中央淡染區(qū)大小不等，計數(shù)畸形率，實驗組高于對照組（P<0.05），差異有顯著性。SDS-PAGE電泳分析發(fā)現(xiàn)有多條帶RBC膜蛋白含量顯著低于生理鹽水對照組。認(rèn)為滅活A(yù)組鏈球菌引起溶血性貧血可能是是RBC膜蛋白的含量減少所致。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的:通過對A組鏈球菌影響紅細(xì)胞膜蛋白含量的時效研究，在一個新的方向探究其對紅細(xì)胞破壞的機(jī)制，從而為以后的研究提供一種新的思路。 基本思路：實驗組分別注射滅活的A組鏈球菌全菌體（2.5ml/只）至大鼠黑質(zhì)致密部，對照組注射等量生理鹽水，按照設(shè)定的時間梯度觀察兩組家兔的體重變化、RBC形態(tài)變化和RBC膜蛋白含量變化。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨特之處
- 本研究采用滅活Ａ組鏈球菌制備家兔溶血性貧血模型，在注射后不同時間點取血，涂片光鏡觀察；差速離心分離、提取純化RBC膜蛋白，率先用SDS-PAGE電泳檢測其含量。研究Ａ組鏈球菌致溶血性貧血的機(jī)理，為治療溶血性貧血提供新思路。發(fā)現(xiàn)A組鏈球菌在第96h、7d、14d致RBC形態(tài)異常，計數(shù)畸形率，實驗組高于對照組（P<0.05），差異有顯著性。SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)多條帶RBC膜蛋白含量顯著低于對照組。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 研究表明，A組鏈球菌能導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解。紅細(xì)胞膜蛋白含量的改變，會對維持紅細(xì)胞的可變形性和完整性產(chǎn)生一定的影響。但A組鏈球菌誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶解的機(jī)制尚不清楚。為此，本研究采用滅活Ａ組鏈球菌制備家兔溶血性貧血模型，通過比較實驗組與對照組之間的差異，探究不同時間點A組鏈球菌對紅細(xì)胞形態(tài)的影響和紅細(xì)胞膜蛋白含量的變化。這對于研究Ａ組鏈球菌致溶血性貧血的機(jī)理具有很重要的理論意義，也為治療溶血性貧血提供新思路。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 【目的】研究滅活Ａ組鏈球菌誘發(fā)紅細(xì)胞破裂的機(jī)理，為A組鏈球菌導(dǎo)致的溶血性疾病治療提供新思路?！痉椒ā繉㈦s種家兔隨機(jī)分為對照組和實驗組，每組2只并分別稱重，實驗組從耳緣靜脈注射2.5ml滅活的A組鏈球菌全菌體，對照組從耳緣靜脈注射2.5ml生理鹽水。分別于注射后第6h、48h、96h、7d、14d時從耳緣靜脈取血2ml，常規(guī)分離紅細(xì)胞并提取膜蛋白，十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析各組紅細(xì)胞膜蛋白的百分含量。每次取材均做涂片，瑞氏染色，光鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)和計數(shù)異常率?！窘Y(jié)果】實驗組家兔的體重在相同時間點較對照組明顯降低。注射A組鏈球菌第96h、7d、和第14d，實驗組家兔光鏡下均見紅細(xì)胞形態(tài)異常，大小不等，部分紅細(xì)胞中央淡染區(qū)消失，部分紅細(xì)胞中央淡染區(qū)擴(kuò)大。計數(shù)紅細(xì)胞畸形，實驗組高于對照組（P<0.05），差異有顯著性。SDS-PAGE電泳分析各組紅細(xì)胞膜蛋白的百分含量，發(fā)現(xiàn)有多條帶實驗組紅細(xì)胞膜蛋白含量顯著低于生理鹽水對照組?！窘Y(jié)論】滅活A(yù)組鏈球菌從耳緣靜脈注射第96h始能引起紅細(xì)胞形態(tài)異常，其機(jī)理可能是紅細(xì)胞膜蛋白的含量變化所致。
獲獎情況
- 論文《滅活A(yù)組鏈球菌對紅細(xì)胞及其膜蛋白影響的實驗研究》已投《醫(yī)學(xué)研究雜志》。
鑒定結(jié)果
- 論文《滅活A(yù)組鏈球菌對紅細(xì)胞及其膜蛋白影響的實驗研究》已投《醫(yī)學(xué)研究雜志》。
參考文獻(xiàn)
- [1] Fukuizumi T， Inoue H， Tsujisawa T， et a1．Streptococcus sobrinus antigens that react to salivary antibodies induced by tonsillar application of formalin-killed S sobrinus in rabbits[J]．Infect Immun，2000，68(2)：725—731． [2] Fukuizumi T，Inoue H，Tsujisawa T，et a1．Tonsillar application of form alin-killed cells of Streptococcus sobrinus reduces experimental dental caries in rabbits [J]．Infect Immun，1999，67(1)：426-428． [3] 方福德，周 呂，丁濂，等．現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗技巧全書一生物膜研究技術(shù)[M]．北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)學(xué)大學(xué)聯(lián)合出版社，1995．521～523. [4] 汪家政，范明 ．蛋白質(zhì)技術(shù)手冊[M]．北京：科學(xué)出版社，2002．79～82. [5] 王也飛,胡翊群.蛋白異常與膜骨架相關(guān)溶血性貧血的發(fā)生[J].J Diagn Concepts Pract,2009,8(1)：104-107. [6] 唐彥萍,涂應(yīng)琴.GSH 引起的病態(tài)紅細(xì)胞膜蛋白變化[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1994,7(1)：15-17.
同類課題研究水平概述
- 20世紀(jì)8O年代以來，對人類紅細(xì)胞膜蛋白異常與紅細(xì)胞疾病的研究已有不少進(jìn)展，尤其是對膜骨架蛋白的分子水平異常的研究，不斷有新發(fā)現(xiàn)。這對某些紅細(xì)胞疾病的診治有較大幫助。然而，對于A組鏈球菌是如何誘發(fā)紅細(xì)胞溶解機(jī)制的研究甚少。 現(xiàn)有研究表明，A組鏈球菌能改變血細(xì)胞的性能和數(shù)量，并且使紅細(xì)胞溶血。紅細(xì)胞膜為雙層磷脂結(jié)構(gòu)，其間鑲嵌著多種膜蛋白。這些膜蛋白包括包埋在脂質(zhì)雙分子層中的整合蛋白及存在于膜內(nèi)側(cè)的細(xì)胞膜骨架蛋白，而后者與紅細(xì)胞膜缺陷所致的溶血關(guān)系密切。細(xì)胞膜骨架蛋白維持紅細(xì)胞的正常形態(tài)和變形性，其量或質(zhì)的缺陷及蛋白質(zhì)間相互作用異?？稍斐啥喾N紅細(xì)胞疾病。并且現(xiàn)已肯定，溶血性疾病患者的紅細(xì)胞膜蛋白較正常者減少。已有相關(guān)實驗證明紅細(xì)胞膜的鑲嵌蛋白數(shù)量、排序及質(zhì)量的改變可能是溶血性貧血和再生障礙性貧血紅細(xì)胞壽命縮短的重要原因。 本課題以雜種家兔為實驗對象，從耳緣靜脈注射滅活Ａ組鏈球菌全菌體，觀察設(shè)定的不同時間點紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，按照上述時間點采集相同血量的血液樣品進(jìn)行離心分離用低滲溶血法差速離心獲得紅細(xì)胞膜，經(jīng)膜蛋白的純化獲得高純度的膜蛋白，經(jīng)十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PAGE)，對所獲高純度膜蛋白進(jìn)行分離，通過對所獲條帶的分析，進(jìn)而整理出A組鏈球菌對紅細(xì)胞膜蛋白含量的時效影響的數(shù)據(jù)結(jié)果。旨在對A組鏈球菌誘發(fā)紅細(xì)胞溶解及膜蛋白含量的時效變化進(jìn)行研究，探討其對紅細(xì)胞理化性質(zhì)的影響，從而為許多相關(guān)臨床疾病的病因研究提供一些思路。
