基本信息
- 項目名稱：
- 原花青素對大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 目的 研究缺血再灌注對于骨骼肌產(chǎn)生的損傷同時探討原花青素對其損傷的保護作用和機理。方法 動物對比實驗。結(jié)果 通過本項研究，確定原花青素對肢體骨骼肌缺血再灌注損傷的影響，為臨床以及今后的研究提供一定的實驗依據(jù)；并且結(jié)合缺血再灌注損傷的發(fā)病機制做出相關(guān)推斷。結(jié)論 原花青素對大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷具有明顯的保護。
- 詳細介紹：
- 有時缺血后再灌注．不僅不能使組織、器官功能恢復(fù)，反而加重組織、器官的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷。這種在缺血基礎(chǔ)上恢復(fù)血流后組織損傷反而加重，甚至發(fā)生不可逆性損傷的現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷(ischemi-a-reperfusion injury)。骨骼肌的缺血再灌注損傷的是臨床上常見的病征。近年來的研究表明，其發(fā)病機制很可能與自由基的釋放、細胞內(nèi)鈣反常等有關(guān)[1]。原花青素（OPC）則是一種有著特殊分子結(jié)構(gòu)的生物類黃酮，是目前國際上公認的清除人體內(nèi)自由基最有效的天然抗氧化劑，一般為葡萄籽提取物或法國海岸松樹皮提取物，具有非常強的體內(nèi)活性。實驗證明，OPC的抗自由基氧化能力是維生素E的50倍，維生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分鐘即可達到最高血液濃度，代謝半衰期達7小時之久。眾多的研究表明，原花青素普遍對心肌、腎、腦的缺血再灌注損傷具有保護作用，而對于骨骼肌的影響則研究較少，本實驗以大鼠骨骼缺血再灌注模型為基礎(chǔ)，再使用原花青素液體進行處理，以探討其保護作用，為臨床防治骨骼肌缺血再灌注損傷提供依據(jù). 1.材料與方法 1.1 動物 24只健康成年SD大鼠； 1.2 藥品 原花青素：由重慶市武隆仙女天然色素有限責(zé)任公司提供，原花青素絕對含量達48.7%； 1.3 實驗方法 1.3.1 動物分組隨機均等分為三組：假手術(shù)組（Ⅰ組）、I/R＋生理鹽水組（Ⅱ組）、I/R＋原花青素組（Ⅲ組）；分組大鼠8只 1.3.2 動物模型制作大鼠稱重后，以戊巴比妥納按45mg/kg腹腔麻醉；固定于手術(shù)臺上，行氣管切開術(shù)并加以氣管插管；Ⅰ組僅脫毛、切開、暴露股血管；Ⅱ、Ⅲ組在右后肢股三角脫毛，沿血管走形處切開皮膚及皮下組織和肌肉，分離股動、靜脈，股神經(jīng)，于其下端用張力帶環(huán)扎，阻斷肢體側(cè)支循環(huán)。以無創(chuàng)止血夾夾閉股動、靜脈。缺血6h后取下止血夾和張力帶以恢復(fù)血供； 1.3.3 實驗處理恢復(fù)血流灌注前10分鐘給予Ⅲ組股動脈推注一定體重比例的原花青素液體，同時Ⅱ組推注等量的生理鹽水，兩組皆再灌注12h；取大鼠股動脈血用于檢查；處死動物；用全自動生化分析儀測定血漿LDH活性； 2.結(jié)果與分析表1 原花青素對大鼠骨骼肌缺血再灌注影響所得數(shù)據(jù)取平均值 LDH（U/L）假手術(shù)組（Ⅰ組） 463.85±84.32 I/R＋生理鹽水組（Ⅱ組） 1183.70±211.66 I/R＋原花青素組（Ⅲ組） 626.43±191.28 與假手術(shù)組比較p<0.01；與I/R＋生理鹽水組比較p<0.01，該數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)意義。 LDH即乳酸脫氫酶，作為一種常用指標使用于眾多缺血再灌注損傷的研究中。原花青素對血漿LDH的影響如下：當(dāng)骨骼肌缺血6h再灌注12h后，Ⅲ組和Ⅱ組血漿LDH與Ⅰ組也就是假手術(shù)組比較有顯著的差異，說明Ⅲ組和Ⅱ組有不同程度的缺血再灌注損傷。Ⅲ組和Ⅱ組相比，血漿LDH明顯降低，可以說明原花青素對骨骼缺血再灌注損傷具有保護作用。（見表1） 3.討論良好的血液循環(huán)是組織細胞獲得充足的氧和營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)并排出代謝產(chǎn)物的基本保證,各種原因造成的組織血液灌注量減少可使細胞發(fā)生缺血性損傷。然而，在動物實驗和臨床觀察中也發(fā)現(xiàn)，恢復(fù)血液再灌注后，部分動物或患者的細胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞沒有減輕反而更加重，這就是本次實驗所看到的缺血再灌注損傷。而目前對骨骼缺血再灌注機制的研究也從傳統(tǒng)的氧自由基學(xué)說、鈣超載學(xué)說和白細胞學(xué)說發(fā)展到細胞凋亡、微循環(huán)的無復(fù)流現(xiàn)象以及一氧化氮作用。這里，我們主要探討傳統(tǒng)的氧自由基學(xué)說，氧自由基是指含有氧，而且不成對電子位于氧原子上的自由基，又稱活性氧，是氧分子單價還原過程中的中間產(chǎn)物。它活性強，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，存在時間短，反應(yīng)過常呈連鎖式反應(yīng)，因此可對機體造成持續(xù)性的損害。在缺血的條件下，機體產(chǎn)生氧自由基主要有4個途徑： 1、中性白細胞NADP/NADPH氧化酶系統(tǒng)：中性粒細胞是氧自由基的主要來源，介導(dǎo)骨骼肌缺血再灌注損傷。再灌注期組織重新獲得氧供，中性粒細胞被激活后耗氧量顯著增加發(fā)生呼吸爆發(fā)，在其自身含有的NADPH氧化酶作用下，使分子氧轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子；同時,激活的中性白細胞還可分泌髓過氧化物酶，催化過氧化氫和氯離子形成次氯酸，次氯酸作為強氧化劑和氯化劑，與其他自由基一起,使氨基酸和蛋白質(zhì)降解，引起組織廣泛損傷[2]； 2、黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)：組織缺血缺氧時，ATP生成減少,次黃嘌呤大量堆積。再灌注時供氧增加，大量分子氧隨血液進入缺血組織，次黃嘌呤及黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的作用下轉(zhuǎn)化為尿酸并產(chǎn)生大量O2-，由于缺氧，超氧化物歧化酶生成不足，O2-的清除功能下降，從而進一步使O2-增加，產(chǎn)生大量氧自由基。這條途徑不是主要的氧自由基生成途徑；[3] 3、線粒體電子傳遞系統(tǒng)：呼吸鏈電子漏是生物體中氧自由基恒定的主要來源。隨著缺血時間的延長，電子漏增加，再灌注后電子漏有增加趨勢，勢必影響呼吸鏈正常電子傳遞，使ATP產(chǎn)生減少，能量不足，導(dǎo)致抗氧化保護機制對氧自由基的清除作用減弱[4]； 4、花生四烯酸途徑；正是由于氧自由基的產(chǎn)生導(dǎo)致了表1中所見到的I/R＋生理鹽水組在缺血再灌注情況下LDH的大幅度增高。原花青素具有顯著的清楚自由基作用，對缺血再灌注大腦、心肌以及腎都有明顯的保護作用[5] [6] [7]。原花青素有效清楚自由基，減輕線粒體膜脂質(zhì)的過氧化，保護線粒體功能，緩解細胞能量的供應(yīng)，從而增強細胞對再灌注的抵抗力。本實驗結(jié)果顯示，原花青素有效降低血漿LDH含量，從一定的程度可以說明原花青素對骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用。但是關(guān)于原花青素的劑量等還有待研究。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本實驗以大鼠骨骼缺血再灌注模型為基礎(chǔ)，采用對照組實驗原則，以探討原花青素對骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用，為臨床的防治提供參考和依據(jù).
科學(xué)性、先進性及獨特之處
- 以動物試驗為基礎(chǔ)，嚴格遵守試驗法則，從數(shù)據(jù)的采取到處理均采用統(tǒng)計學(xué)標準進行；骨骼肌的缺血再灌注損傷的是臨床上常見的病征。眾多的研究表明，原花青素普遍對心肌、腎、腦的缺血再灌注損傷具有保護作用，而對于骨骼肌的影響則研究較少，本試驗以大鼠為試驗材料，隨機分組進行動物試驗。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 通過本項研究，探討原花青素對骨骼肌缺血再灌注損傷的影響，為臨床提供一定的實驗依據(jù)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 1.材料與方法 1.1 動物 1.2 藥品 1.3 實驗方法 1.3.1 動物分組 1.3.2 動物模型制作 1.3.3 實驗處理 2.結(jié)果與分析 3.討論
獲獎情況
- 校內(nèi)科創(chuàng)基金結(jié)題
鑒定結(jié)果
- 本實驗設(shè)計合理，實驗技術(shù)討論清晰，實驗結(jié)果可信，實驗具有很好的科學(xué)性、嚴謹性及臨床使用價值，達到本“挑戰(zhàn)杯”參賽作品的要求。
參考文獻
- Oden M. Rol e of reperfusi on- induced injury in the pat hogens is of the crush syndr ome ［J］. N- Engl J Med，1991，324( 20) ：1 417. KoksalC，Bozkurt，AK，CangelU，et al.Attenuation of ischemia/reperfus ion injury by N-acetylcyste in ein arathindlimbmodel.JSurgRes2003;111(2):236-239 ErdoganD,OmerogluS,SarbanS,etal.Prevention of oxidative stress due to tourniquet application. Analysis of the effects of local hypotherm ia and systemical lopurinol administration.Act a Or thop Belg1999;65(2):164-169 SchlagMG,HarrisKA,PotterRF.Roleofleukocyteaccumulationand oxygen radicals in ischemia-reperfusion-induced injury in skeletal Haber-Weiss muscle. Am Jphysiol HeartCircPhysiol2001;280(4):H1716-H1721 汪晨凈，高明堂，時小燕，吳勇杰，李文廣 原花青素對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué) CN34-1206/R, ISSN1009-250 吳嵐，劉開祥，俸軍林，李清華，曾愛源 原花青素對腦缺血再灌注損傷大鼠血腦屏障通透性和自由基含量的影響 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志 2009.7 Vo.7 NO.7 王之發(fā)，孫建偉，張浩，陳健康，劉芳娥 葡萄籽原花青素對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用 Practical Pharmacy And Clinical Remedies 2009,Vo.l12,No.6
同類課題研究水平概述
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