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基本信息
- 項(xiàng)目名稱(chēng)：
- p38 MAPK在CCK-8調(diào)控LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞 IL-1β表達(dá)中的作用
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”作品
- 小類(lèi)：
- 生命科學(xué)
- 大類(lèi)：
- 自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文
- 簡(jiǎn)介：
- 本研究采用ELISA、RT-PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)了八肽膽囊收縮素（CCK-8）對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞 IL-1β及p38 MAPK磷酸化的影響，旨在探討CCK-8抗內(nèi)毒素休克的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CCK-8可劑量依賴(lài)地抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β蛋白及mRNA的表達(dá)，并可能通過(guò)抑制 p38 MAPK磷酸化來(lái)實(shí)現(xiàn)。
- 詳細(xì)介紹：
- 目的：研究八肽膽囊收縮素（CCK-8）對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制。方法： 用ELISA及RT-PCR法檢測(cè) CCK-8（SB）對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞 IL-1β蛋白及mRNA表達(dá)的影響；應(yīng)用 Western blot檢測(cè) CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞p38 MAPK磷酸化的影響。結(jié)果：①LPS可時(shí)間依賴(lài)性地誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-1β蛋白及mRNA表達(dá)，分別于刺激后6 h及3 h達(dá)到高峰；②低劑量（10^-10 mol/L、10^-9 mol/L）CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)無(wú)明顯影響；高劑量（10^-8 mol/L~10^-6 mol/L）CCK-8劑量依賴(lài)性抑制了LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)；③10-10 mol/L CCK-8未影響LPS誘導(dǎo)的 p-p38 MAPK水平，10^-8、10^-6 mol/L CCK-8劑量依賴(lài)性地抑制了LPS誘導(dǎo)的p-p38 MAPK水平；④ p38 MAPK特異性抑制劑SB203580可明顯抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)，與CCK-8共同作用后，抑制作用進(jìn)一步加強(qiáng)。結(jié)論 CCK-8劑量依賴(lài)性抑制了LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β蛋白及mRNA表達(dá)，并可能通過(guò)抑制 p38 MAPK磷酸化而實(shí)現(xiàn)的。
作品專(zhuān)業(yè)信息
撰寫(xiě)目的和基本思路
- 目的：通過(guò)觀察CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7中炎性介質(zhì)IL-1β及信號(hào)分子p38 MAPK表達(dá)的影響，探討CCK-8抗內(nèi)毒素休克的機(jī)制，為CCK-8在臨床治療中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?；舅悸罚簯?yīng)用LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β，建立內(nèi)毒素休克細(xì)胞模型，觀察CCK-8對(duì)IL-1β蛋白、mRNA及信號(hào)分子p38 MAPK的影響。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，對(duì)各觀察指標(biāo)的時(shí)間及量效關(guān)系作了深入細(xì)致的研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有可重復(fù)性，結(jié)論可靠。本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)、ELISA、RT-PCR及Western blot方法和技術(shù)對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，使實(shí)驗(yàn)者通過(guò)該實(shí)驗(yàn)掌握了多種分子生物學(xué)技術(shù)，使實(shí)驗(yàn)者的科研思維能力和動(dòng)手能力有了很大提高，做到了學(xué)研相結(jié)合。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，對(duì)各觀察指標(biāo)的時(shí)間及量效關(guān)系作了深入細(xì)致的研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有可重復(fù)性，結(jié)論可靠。本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)、ELISA、RT-PCR及Western blot方法和技術(shù)對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，使實(shí)驗(yàn)者通過(guò)該實(shí)驗(yàn)掌握了多種分子生物學(xué)技術(shù)，使實(shí)驗(yàn)者的科研思維能力和動(dòng)手能力有了很大提高，做到了學(xué)研相結(jié)合。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：探討CCK-8抗內(nèi)毒素休克機(jī)制。方法：用ELISA、RT-PCR及Western blot法檢測(cè) CCK-8（SB）對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞 IL-1β及p38 MAPK磷酸化的影響。結(jié)果： ①LPS可時(shí)間依賴(lài)性的誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-1β蛋白及mRNA表達(dá)，分別于刺激后6 h及3 h達(dá)到高峰；②低劑量CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)無(wú)明顯影響；高劑量CCK-8劑量依賴(lài)性抑制了LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)；③10^-10 mol/L CCK-8未影響LPS誘導(dǎo)的 p-p38 MAPK水平，10^-8、10^-6 mol/L CCK-8劑量依賴(lài)性地抑制了LPS誘導(dǎo)的p-p38 MAPK水平；④ p38 MAPK特異性抑制劑SB203580可明顯抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-1β表達(dá)，與CCK-8共同作用后，抑制作用進(jìn)一步加強(qiáng)。結(jié)論：CCK-8劑量依賴(lài)性抑制了 LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-1β蛋白及mRNA表達(dá)，并可能通過(guò)抑制 p38 MAPK磷酸化而實(shí)現(xiàn)的。
獲獎(jiǎng)情況
- 無(wú)
鑒定結(jié)果
- 無(wú)
參考文獻(xiàn)
- 1.Keshet Y，Seger R．The MAP kinase signaling cascades: a system of hundreds of components regulates a diverse array of physiological functions[J]．Methods Mol Biol, 2010, 661: 35-38 2.Chen SR, Xu XZ, Wang YH, et al. Icariin Derivative inhibits inflammation through suppression of p38 Mitogen-activated protein kinase and nuclear factor-κB pathways[J]. Biological & pharmaceutical bulletin, 2010,33(8):1307-1313 3.高維娟, 許順江, 叢斌, 等. CCK-8對(duì)大鼠肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞cAMP-PKA信號(hào)通路的激活作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2007,23(3):321-326 4.倪志宇, 李淑瑾, 叢斌, 等.CCK-8對(duì)LPS攻擊小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10表達(dá)的影響[J].中國(guó)病理生理雜志, 2007, 23(2): 331-335 5.Mogensen TH. Pathogen recognition and inflammatory signaling in innate immune defenses[J]. Clinical microbiology reviews. 2009, 22(2): 240-2733
同類(lèi)課題研究水平概述
- 絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）是介導(dǎo)細(xì)胞外信號(hào)引起細(xì)胞核反應(yīng)的極其重要的信號(hào)系統(tǒng)，已證明在哺乳動(dòng)物中存在四個(gè)MAPK成員，即ERK、JNK/SAPK、p38和ERK5/BMK1等MAPK亞族，其中p38 MAPK通路主要對(duì)炎性細(xì)胞因子和多種類(lèi)型的細(xì)胞應(yīng)激信號(hào)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，大量研究表明阻斷p38級(jí)聯(lián)能減輕炎癥反應(yīng)。八肽膽囊收縮素（cholecystokinin octapeptide，CCK-8）屬小分子肽類(lèi)物質(zhì)，參與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫等多系統(tǒng)機(jī)能活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)CCK-8的系列研究表明，CCK-8具有抗內(nèi)毒素休克（endotoxin shock，ES）作用。在ES大鼠肺組織及大鼠肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞（pulmonary interstitial macrophages，PIMs），CCK-8可通過(guò)激活cAMP-PKA信號(hào)通路，抑制PKC通路而抑制NF-κB的活性，從而抑制炎癥介質(zhì)的表達(dá)，發(fā)揮抗ES作用。但CCK-8是否通過(guò)p38 MAPK通路調(diào)控炎癥反應(yīng)尚未見(jiàn)報(bào)道。在參與炎癥反應(yīng)的眾多介質(zhì)中，最有影響的是IL-1β、TNF-α等，與內(nèi)毒素休克發(fā)病和死亡的關(guān)系也最為密切。因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞 IL-1β表達(dá)的影響及是否與p38 MAPK通路調(diào)控有關(guān)，探討CCK-8抗內(nèi)毒素休克的作用機(jī)制。
