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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 漢坦病毒雙啟動子雙價核酸疫苗載體的構(gòu)建
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 腎綜合征出血熱是一種由漢坦病毒引起的嚴(yán)重危害人體健康的自然疫源性疾病。它是我國重點(diǎn)防治的傳染病之一。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗。它可誘導(dǎo)保護(hù)性體液免疫和以特異性CTL為標(biāo)志的細(xì)胞免疫，具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點(diǎn)。但一般單抗原表達(dá)的核酸疫苗免疫效果并不盡人意。本研究擬構(gòu)建兩種漢坦病毒血清型的單質(zhì)粒雙真核啟動增強(qiáng)子表達(dá)載體，將為后續(xù)研制高表達(dá)的雙價核酸疫苗奠定基礎(chǔ)。
- 詳細(xì)介紹：
- 腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一種由漢坦病毒引起的嚴(yán)重危害人體健康的自然疫源性疾病。它是我國重點(diǎn)防治的傳染病之一，其發(fā)病率占全世界的90％以上。在我國人群中流行的漢坦病毒主要有漢灘病毒(HTNV)和漢城病毒(SEOV)兩種亞型，病死率分別約為10%和1%，而且在同一地區(qū)存在此兩種亞型的交叉混合流行。由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、臨床表現(xiàn)多樣、病情危重易變、并發(fā)癥多且沒有特效的治療藥物，所以病死率居高不下，直接危害人民的生命健康和經(jīng)濟(jì)建設(shè)。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗。它是將編碼某一特定蛋白抗原的基因片段與真核表達(dá)載體相連，而后直接注入人體，即可誘導(dǎo)保護(hù)性體液免疫和以特異性CTL為標(biāo)志的細(xì)胞免疫，具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點(diǎn)。但一般單抗原表達(dá)的核酸疫苗免疫效果并不盡人意，因此如何提高其免疫原性以刺激機(jī)體產(chǎn)生高效的免疫效應(yīng)成為學(xué)者們關(guān)注的焦點(diǎn)。我們前期已構(gòu)建漢灘病毒S基因和B7-1分子基因頭尾相接的順式雙啟動子共表達(dá)載體，使多個外源基因在同一細(xì)胞中同時表達(dá)，顯著增強(qiáng)了其免疫效果。為此，本研究擬構(gòu)建兩種漢坦病毒血清型的單質(zhì)粒雙真核啟動增強(qiáng)子表達(dá)載體，并觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況，將為后續(xù)研制高表達(dá)的雙價核酸疫苗奠定基礎(chǔ)。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 在構(gòu)建漢灘病毒（HTNV）和漢城病毒（SEOV）的雙價M2基因單質(zhì)粒雙真核啟動增強(qiáng)子表達(dá)載體，并觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況。 1)從漢灘病毒76-118株和漢城病毒BjHD01株分離M基因片段。應(yīng)用PCR方法從中擴(kuò)增出各自的M2基因片段。2）構(gòu)建攜帶雙真核啟動增強(qiáng)子、表達(dá)HTNV和SEOV的M2基因片段的真核表達(dá)載體。3）檢測上述載體在體外哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 1、目前本項(xiàng)目已擴(kuò)增出并分析出所需漢灘病毒和漢城病毒的M2基因片段，并具備構(gòu)建單質(zhì)粒雙增強(qiáng)子-啟動子雙M2基因表達(dá)載體的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2、本項(xiàng)目將構(gòu)建單質(zhì)粒雙增強(qiáng)子-啟動子雙M2基因表達(dá)載體，是目前一種對漢坦病毒有良好免疫效果的雙價核酸疫苗。 3、對單質(zhì)粒雙增強(qiáng)子-啟動子雙M2基因表達(dá)載體進(jìn)行順、反式構(gòu)建，并進(jìn)行此兩種載體表達(dá)效果的比較。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實(shí)意義
- HFRS是由漢坦病毒引起的一組急性自然疫源性疾病，我國是世界上受其危害最嚴(yán)重的國家。至今為止沒有特效藥物，疫苗是預(yù)防本病的關(guān)鍵。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗，它具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點(diǎn)。但一般單抗原表達(dá)的核酸疫苗免疫效果不佳。通過上述載體的構(gòu)建可以完善雙價核酸疫苗，從而達(dá)到對此兩種病毒更好的免疫效果，能為進(jìn)一步控制我國HFRS奠定基礎(chǔ)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一種由漢坦病毒引起的嚴(yán)重危害人體健康的自然疫源性疾病。它是我國重點(diǎn)防治的傳染病之一，其發(fā)病率占全世界的90％以上。在我國人群中流行的漢坦病毒主要有漢灘病毒(HTNV)和漢城病毒(SEOV)兩種亞型，病死率分別約為10%和1%，而且在同一地區(qū)存在此兩種亞型的交叉混合流行。由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、臨床表現(xiàn)多樣、病情危重易變、并發(fā)癥多且沒有特效的治療藥物，所以病死率居高不下，直接危害人民的生命健康和經(jīng)濟(jì)建設(shè)。核酸疫苗是近年發(fā)展的新型疫苗。它是將編碼某一特定蛋白抗原的基因片段與真核表達(dá)載體相連，而后直接注入人體，即可誘導(dǎo)保護(hù)性體液免疫和以特異性CTL為標(biāo)志的細(xì)胞免疫，具有效價高、安全、穩(wěn)定和生產(chǎn)簡便等特點(diǎn)。但一般單抗原表達(dá)的核酸疫苗免疫效果并不盡人意，因此如何提高其免疫原性以刺激機(jī)體產(chǎn)生高效的免疫效應(yīng)成為學(xué)者們關(guān)注的焦點(diǎn)。本研究擬構(gòu)建兩種漢坦病毒血清型的單質(zhì)粒雙真核啟動增強(qiáng)子表達(dá)載體，并觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況，將為后續(xù)研制高表達(dá)的雙價核酸疫苗奠定基礎(chǔ)。
獲獎情況
- 2010年8月發(fā)表于《中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》第39卷第8期 文章編號：0258-4646（2010）08-0673-0
鑒定結(jié)果
- pETBlue2—重組片段載體經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳;重組表達(dá)片段-HTNV-M2載體經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳;pcDNA 3.1+SEOV-M2-重組表達(dá)片段-HTNV-M2載體經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳
參考文獻(xiàn)
- 細(xì)胞生物信息技術(shù)：《細(xì)胞生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)指南》《細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)教程》等 基因工程技術(shù)：《基因工程原理和技術(shù)》等 免疫熒光技術(shù)：《熒光和免疫熒光染色技術(shù)及應(yīng)用》等
同類課題研究水平概述
- 腎病綜合癥是我國重點(diǎn)防治疾病之一，而漢坦病毒是引起的腎病綜合癥的主要病毒。對于漢坦病毒疫苗的研制主要為了在傳統(tǒng)的診治方法以及疫苗的研究上改善發(fā)病情況，預(yù)防腎病綜合癥的發(fā)生。漢坦病毒疫苗分為滅活疫苗、減毒疫苗、基因工程疫苗和核酸疫苗。滅活疫苗分為單價疫苗和雙價疫苗,雙價疫苗用于同時存在HTN 和SEO 流行的地區(qū)。減毒活疫苗是通過不同的方法，使病毒的毒力即致病性減弱或喪失，疫苗由完整的病毒組成。它是目前效果最好的疫苗，具有免疫原性好等優(yōu)點(diǎn)。但是近年來，對于漢坦病毒疫苗的研究近年來傾向于核酸疫苗的研制。 核酸疫苗的發(fā)展開始于20世90 年代，它是利用現(xiàn)代生物技術(shù)免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研制成的，具有安全穩(wěn)定、特異性強(qiáng)、提供交叉防御、有利于多價多聯(lián)疫苗的研制的優(yōu)點(diǎn)。核酸疫苗分為DNA 疫苗和RNA疫苗兩種，而目前對核酸苗的研究以DNA 疫苗為主。近年來，關(guān)于核酸免疫的研究在世界范圍內(nèi)廣泛展開，所涉及的范圍包括人和動物的各種細(xì)菌性、病毒性及寄生蟲病，如流感病毒血凝素基因、乙肝病毒包膜抗原基因、狂犬病毒G 蛋白基因、牛皰疹病毒2型糖蛋白基因、肺炎支原體和利什曼原蟲gp63等。但是大多主要停留在疫苗的構(gòu)建、增強(qiáng)疫苗免疫效果以及動物實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的層面，在臨床中尚屬于試驗(yàn)階段。 核酸疫苗是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)新的生物技術(shù)，已成為疫苗研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，并獲得了迅速的發(fā)展。研究表明，DNA 疫苗既可作為病毒、細(xì)菌或寄生蟲的預(yù)防疫苗，也可作為非感染性疾病如腫瘤病的治療用疫苗。另外，它為變態(tài)反應(yīng)性疾病和自身免疫病的治療也提供了新的希望。因此核酸疫苗有可能發(fā)展成為其它物質(zhì)無可替代的產(chǎn)品，為將來人類和動物的健康保駕護(hù)航。
