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基本信息
- 項目名稱：
- 肝損傷血清miRNA標(biāo)志物篩選
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作A類
- 簡介：
- 設(shè)計血清microRNA的分離和純化檢測方案，使其適用于高通量研究技術(shù)的要求；在此基礎(chǔ)上，利用高通量實施熒光定量PCR技術(shù)系統(tǒng)篩選肝臟疾病患者血清中microRNA的表達(dá)變化，鑒定若干具有臨床意義的肝臟疾病診斷及早期檢測血清標(biāo)志物。
- 詳細(xì)介紹：
- 肝損傷、肝炎、肝硬化和肝癌等肝臟疾病是嚴(yán)重危害中國人群健康的一類重大疾病，其中的關(guān)鍵是疾病的早期診斷。在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，組織細(xì)胞內(nèi)的一些物質(zhì)發(fā)生不同程度的改變，這種能反映組織細(xì)胞病變的物質(zhì)被統(tǒng)稱為疾病標(biāo)志物。目前臨床上應(yīng)用的標(biāo)志物包括蛋白質(zhì)類、糖類、酶類、以及激素類標(biāo)志物，測定這些標(biāo)志物的狀態(tài)可以用于疾病的早期診斷，例如甲胎蛋白可用于診斷原發(fā)性肝癌，絨毛膜促性腺激素是早期診斷葡萄胎、絨毛膜上皮癌的特異指標(biāo)。 標(biāo)志物的敏感性和特異性是決定其臨床價值的兩個重要因素，這對臨床應(yīng)用的肝臟疾病標(biāo)志物也不例外。由于檢測技術(shù)的限制，直接檢測蛋白類標(biāo)志物的靈敏度通常較低；而酶類標(biāo)志物由于其催化特性，具有較高的信號放大能力，因此相應(yīng)的檢測技術(shù)具有較高的靈敏度，是疾病診斷的主要指標(biāo)。其中，對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的檢測是判斷肝功能狀態(tài)的一個主要指標(biāo)，在臨床上被廣泛地應(yīng)用于肝臟疾病的檢測。但ALT除了分布在肝臟，在骨骼肌、腎臟、心肌等組織也廣泛存在，這種分布特征大大地降低了其作為疾病標(biāo)志物的特異性，例如在肌肉相關(guān)的病變和損傷中，血清ALT也常出現(xiàn)顯著的變化。綜上所述，蛋白類疾病標(biāo)志物雖然在臨床應(yīng)用中獲得了巨大的成功，但并沒有完全地滿足臨床的需要。 本課題采用的靈敏而特異的高通量核酸研究技術(shù)被廣泛應(yīng)用于臨床研究和疾病診斷。例如實時定量PCR技術(shù)能夠在樣本中檢測低于10個拷貝的病毒基因組[1]，從而將病毒學(xué)水平提升到一個前所未有的高度。最近的研究還表明血清中的microRNA可能具有作為疾病、尤其是腫瘤標(biāo)志物的巨大潛力[2-4]。與臨床上廣泛使用的蛋白類疾病標(biāo)志物相比，核酸研究技術(shù)的迅猛進(jìn)步使包括microRNA在內(nèi)的核酸類物質(zhì)具有了作為疾病檢測標(biāo)志物的巨大潛力[5]，它們的應(yīng)用將大大提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性，使許多疾病的早期診斷成為可能。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，人血清中存在的microRNA分子在一定程度上反映了疾病的種類和發(fā)展進(jìn)程，具備成為一種可檢測的疾病標(biāo)志物的潛力[6]。但由于其自身的特點和在血清中獨特的存在方式，使得常規(guī)的分離純化技術(shù)及檢測手段不能完全滿足血清microRNA研究的需要。因此，課題組對相關(guān)研究技術(shù)進(jìn)行了針對性的優(yōu)化，已發(fā)表相關(guān)論文[7]，并以百草枯農(nóng)藥中毒者為研究對象，采用候選基因研究方法(candidate approach)，初步鑒定了一條與人類肝損傷相關(guān)的血清microRNA血清標(biāo)志物，并發(fā)現(xiàn)該microRNA與人類肝炎和肝癌的發(fā)生密切相關(guān)，從中篩查鑒定若干可用于肝臟疾病早期診斷的標(biāo)志物，為臨床提供新的檢測靶標(biāo)。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設(shè)計、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)
- 創(chuàng)新點： 1. 傳統(tǒng)的肝損傷的miRNA表達(dá)譜的研究局限于組織樣本或血清中提取的總miRNA，而直接以血清作為生物檢測樣本具有取材方便、操作步驟簡單、無創(chuàng)傷性和可連續(xù)體外檢測等優(yōu)點； 2. 相對傳統(tǒng)標(biāo)志物，以血清miRNA作為標(biāo)志物檢測疾病更具靈敏性和特異性； 3. 血清中miR-122可作為早期肝損傷臨床診斷的潛在生物標(biāo)志物。 技術(shù)關(guān)鍵： 1. 高效的血清miRNA分離純化及濃縮技術(shù)； 2. 肝臟疾病檢測標(biāo)志物； 3. microRNA檢測的特異性。 主要指標(biāo)： 1. 篩選、鑒定4種與肝臟疾病相關(guān)的血清microRNA生物標(biāo)志物； 2. 鑒定miR-122可作為肝臟疾病診斷的miRNA標(biāo)志物 3. 相關(guān)研究結(jié)果除發(fā)表SCI研究論文1篇(已經(jīng)在投送中)，提出 1項發(fā)明專利申請。
科學(xué)性、先進(jìn)性
- 直接以血清作為生物檢測樣本具有取材方便、操作步驟簡單、無創(chuàng)傷性和可連續(xù)體外檢測等優(yōu)點；miRNA生物標(biāo)志物的早期診斷效果；對血清進(jìn)行原始定量，免除繁瑣提取RNA的步驟，排除常規(guī)谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平檢測中由于炎癥、創(chuàng)傷、藥物過量等所引起的非肝細(xì)胞損傷所致的誤差。
獲獎情況及鑒定結(jié)果
- 本課題為2010年浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動計劃立項課題
作品所處階段
- 實驗室階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 與企業(yè)合作進(jìn)行診斷試劑盒的開發(fā)應(yīng)用
作品可展示的形式
- 圖片
使用說明,技術(shù)特點和優(yōu)勢,適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場分析,經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測
- 優(yōu)點；miRNA生物標(biāo)志物的早期診斷效果；對血清進(jìn)行原始定量，免除繁瑣提取RNA的步驟，排除常規(guī)谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平檢測中由于炎癥、創(chuàng)傷、藥物過量等所引起的非肝細(xì)胞損傷所致的誤差。 適應(yīng)范圍：早期肝損傷臨床診斷；臨床常規(guī)血檢指標(biāo)；常規(guī)肝功能檢測指標(biāo)。 市場分析及經(jīng)濟(jì)效益：此研究項目可用于臨床應(yīng)用高靈敏血清miRNA檢測試劑盒的研發(fā)，該臨床檢測試劑盒簡便、可靠，具高靈敏性和特異性，可以普及到全國各縣市的醫(yī)院，為包括肝損傷在內(nèi)的各種肝臟疾病的早期診斷與治療做出貢獻(xiàn)。
同類課題研究水平概述
- 根據(jù)東華大學(xué)科技查新報告，對比得到以下結(jié)論： 國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)7篇，其中未見以血清直接制備檢測樣本的相關(guān)文獻(xiàn)研究，雖然有關(guān)于以miR-122作為肝損傷生物標(biāo)志物已有一些研究，但未見其用于臨床診斷的相關(guān)文獻(xiàn)報道，本課題具有較好的新穎性。
