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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- HCV誘導(dǎo)小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞后TLR7和細(xì)胞因子的表達(dá)
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 目的 探討TLR7在抗HCV免疫應(yīng)答中對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的免疫發(fā)病機(jī)制。方法 用含20%HCV的陽性血清刺激BV2細(xì)胞，在刺激后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清液，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及ELISA分別檢測(cè)TLR7 mRNA及IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)水平。結(jié)果 HCV刺激BV2細(xì)胞后，可誘導(dǎo)TLR7 mRNA表達(dá)水平升高。結(jié)論 TLR7可能在HCV導(dǎo)致的CNS的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
- 詳細(xì)介紹：
- 目的 研究HCV陽性血清刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞（BV2細(xì)胞）后，BV2細(xì)胞內(nèi)TLR7及細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)變化，探討TLR7在抗HCV免疫應(yīng)答中對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的免疫發(fā)病機(jī)制。方法 用含20%HCV的陽性血清刺激BV2細(xì)胞，在刺激后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清液，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）及酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）分別檢測(cè)TLR7 mRNA及IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)水平，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和正常人血清組。多組均數(shù)間的比較采用方差分析。結(jié)果 在BV2細(xì)胞中有TLR7 mRNA的表達(dá)；HCV刺激BV2細(xì)胞后，可誘導(dǎo)TLR7 mRNA表達(dá)水平升高，12h、24h、40h HCV陽性血清組較空白組及正常人血清組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HCV陽性血清組培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的表達(dá)也呈遞增趨勢(shì)，IL-6在刺激后48 h與正常人血清組及空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），TNF-α在刺激后24 h、48 h時(shí)與正常人血清組及空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），IFN-α在刺激24 h后表達(dá)低水平增高（P<0.05）。結(jié)論 HCV陽性血清刺激BV2細(xì)胞后可誘導(dǎo)TLR7表達(dá)顯著升高，TLR7激活后能夠啟動(dòng)BV2細(xì)胞的固有免疫反應(yīng)，因此TLR7可能在HCV導(dǎo)致的CNS的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道表明HCV可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，嚴(yán)重危害人類健康，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。探討TLR7在抗HCV免疫應(yīng)答中對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的免疫發(fā)病機(jī)制,為探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)HCV感染的免疫發(fā)病機(jī)制、抗HCV藥物設(shè)計(jì)、疫苗研制和基因靶向治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道表明HCV可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，嚴(yán)重危害人類健康，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。TLRs是重要的識(shí)別受體，與相應(yīng)配體結(jié)合后誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答，在宿主抗微生物感染中發(fā)揮重要作用。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 探討TLR7介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞抗HCV免疫識(shí)別信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及其調(diào)控機(jī)制，篩選有效沉默TLR7的靶基因序列，闡明神經(jīng)系統(tǒng)HCV感染的免疫發(fā)病和免疫逃逸機(jī)制，為抗HCV特異靶向藥物設(shè)計(jì)、治療性疫苗的開發(fā)和基因靶向治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，具有廣泛的應(yīng)用前景。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的 研究HCV陽性血清刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞（BV2細(xì)胞）后，BV2細(xì)胞內(nèi)TLR7及細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)變化，探討TLR7在抗HCV免疫應(yīng)答中對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的免疫發(fā)病機(jī)制。方法 用含20%HCV的陽性血清刺激BV2細(xì)胞，在刺激后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清液，應(yīng)用RT-qPCR及ELISA分別檢測(cè)TLR7 mRNA及IL-6、TNF-α和IFN-α的表達(dá)水平，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和正常人血清組。多組均數(shù)間的比較采用方差分析。結(jié)果 HCV刺激BV2細(xì)胞后，可誘導(dǎo)TLR7 mRNA表達(dá)水平升高，12h、24h、40h HCV陽性血清組較空白組及正常人血清組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HCV陽性血清組培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的表達(dá)也呈遞增趨勢(shì)。結(jié)論 HCV陽性血清刺激BV2細(xì)胞后可誘導(dǎo)TLR7表達(dá)顯著升高，TLR7激活后能夠啟動(dòng)BV2細(xì)胞的固有免疫反應(yīng)，因此TLR7可能在HCV導(dǎo)致的CNS的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
獲獎(jiǎng)情況
- 本作品在二零一一年五月獲得我校第七屆“挑戰(zhàn)杯”大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽中榮獲一等獎(jiǎng)。
鑒定結(jié)果
- 本作品在二零一一年五月獲得我校第七屆“挑戰(zhàn)杯”大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽中榮獲一等獎(jiǎng)。
參考文獻(xiàn)
- [1]王振海,吳慶秋,謝鵬,等.病毒性腦炎患者血液和腦脊液HCV RNA的檢測(cè)[J].中華傳染病雜志,2006,24(4)：277-280. [2]Seifert F,Struffert T,Hildebrandt ME,et al.In vivo detection of hepatitis C virus RNA in the brain in a case of encephalitis: evidence for HCV neuroinvasion[J].Neruol,2008, 15(3)：214-218. [3]王振海,謝鵬,孔繁元.丙型肝炎病毒對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的研究進(jìn)展[J].國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科雜志,2006,33(1)：75-78. [4]Takeda K,Akira S.Toll-like receptors in innate immunity[J].Int Immunol,2005,17(1)：1-14. [5]Du X,Poltorak A,Wei Y,et al.Three novel mammalian toll-like receptors：gene stucture,expression,and evolution[J].European Cytokine Network,2000,11(3)：362-371. [6]Zarember KA,Godowski PJ.Tissue expression of human Toll-like receptors and differential regulation of Toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products,and cytokines[J].The Journal of Immunology,2002,168(2)：554-561.
同類課題研究水平概述
- ①HCV基因組結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能;HCV屬于黃病毒科單鏈RNA病毒，HCV基因組變異大，主要分為6個(gè)基因型， 全長(zhǎng)約9.6 kb， 分為5'非翻譯區(qū)(UTR)，一個(gè)開放閱讀框架(ORF)和3'UTR，5'UTR含有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)，3'UTR與復(fù)制起始有關(guān). ORF編碼一個(gè)約3008-3037個(gè)氨基酸的多蛋白前體。②HCV可能是導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的病毒之一以及可能的免疫發(fā)病機(jī)制;Jeffrey Wilkinson等人對(duì)12例HCV陽性尸檢病人的腦組織的研究發(fā)現(xiàn)，8例CD68+細(xì)胞中檢測(cè)出HCV-RNA，表明HCV對(duì)中樞神經(jīng)有直接的侵襲力，同時(shí)說明HCV潛伏感染腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，被感染的小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放促炎癥因子如TNF-α、IL-1、IL-6、神經(jīng)毒性因子等，可能通過這些細(xì)胞因子的介導(dǎo)從而影響腦功能參與HCV感染伴隨認(rèn)知功能障礙和抑郁的發(fā)生。表明CSF可能是病毒復(fù)制和持續(xù)感染的一個(gè)獨(dú)立的場(chǎng)所。Fujita等報(bào)道一例34歲男性，以急性腦炎為首發(fā)，主要表現(xiàn)為發(fā)燒、行為異常、定向力障礙、腦電圖彌慢性慢波增多和腦脊液常規(guī)、生化和細(xì)胞學(xué)檢查中度異常，給予無環(huán)鳥苷治療后，神經(jīng)系統(tǒng)癥狀改善。③TLRs介導(dǎo)的抗病毒固有免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；TLRs在識(shí)別病原相關(guān)分子模式中起重要作用，作為一種重要的模式識(shí)別受體，主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞和 DC表面，構(gòu)成機(jī)體抵御病原體入侵的第一道屏障。TLRs是一種進(jìn)化上高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白，包括胞外段、跨膜段和胞內(nèi)段。目前發(fā)現(xiàn)并克隆了10種人的TLRs分子。根據(jù)不同的亞細(xì)胞定位 ，TLRs可以分為細(xì)胞表面的TLRs(主要包括 TLR1-2、TLR4-6 等)和細(xì)胞內(nèi)的 TLRs(目前發(fā)現(xiàn)的有 TLR3、TLR7/8、TLR9)兩大類。有文獻(xiàn)資料表明，TLRs可以識(shí)別病原微生物及其產(chǎn)物，并與機(jī)體針對(duì)HBV、HCV、單純皰疹病毒(HSV)、巨細(xì)胞病毒等多種病毒感染和其他病原體感染的免疫應(yīng)答有關(guān)。TLR3、7、9可以誘導(dǎo)抗病毒免疫，其作用與干擾素α和干擾素誘導(dǎo)的抗病毒因子有關(guān)。Jongdae Lee 研究認(rèn)為TLR7的激活可以通過干擾素及非干擾素依賴途徑誘導(dǎo)抗HCV免疫反應(yīng)，對(duì)于干擾素抵抗患者，非干擾素以外途徑或許可以為治療提供新的選擇。對(duì)開發(fā)特異性阻斷病毒復(fù)制的藥物如R1626，VCH916等具有重要的指導(dǎo)意義。
