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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- RAGE與SLP76相互作用的分子機(jī)制
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本研究采用基因克隆、Co-IP、Western blot、LiquiChip液相芯片系統(tǒng)等技術(shù)揭示了RAGE和SLP76以刺激和時(shí)間依賴的方式存在相互作用，篩選出SLP76上145Y，173Y，207S及SAM結(jié)構(gòu)域可能參與這一過程；并初步證實(shí)RAGE和SLP76相互作用影響細(xì)胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調(diào)節(jié)MIP-1α和TNF-α等細(xì)胞因子的分泌。
- 詳細(xì)介紹：
- RAGE屬于免疫球蛋白超家族分子，是一種模式識(shí)別的多配體受體，與AGEs、HMGB1、S100家族等配體分子作用，可發(fā)揮非常豐富的生物學(xué)功能。近年來，RAGE的研究取得了很大的進(jìn)展，然而，對(duì)其如何將胞外信號(hào)傳遞至胞內(nèi)信號(hào)分子的機(jī)制卻尚不明了。前期研究發(fā)現(xiàn)，SLP76是通過噬菌體展示技術(shù)篩選出來的最有可能與RAGE結(jié)合的分子。本研究擬探討RAGE與SLP76相互作用的分子機(jī)制。 我們的研究采用基因克隆、Co-IP、Western blot、高通量的LiquiChip液相芯片系統(tǒng)對(duì)具體的作用機(jī)制進(jìn)行了探討，首次證實(shí)，RAGE和SLP76以刺激和時(shí)間依賴的方式存在相互作用，并篩選出SLP76上可能參與這一過程的結(jié)構(gòu)域，即第145位酪氨酸，173位酪氨酸，207位絲氨酸及SAM結(jié)構(gòu)域；此外，并初步證實(shí)RAGE和SLP76相互作用影響細(xì)胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調(diào)節(jié)MIP-1α和TNF-α等細(xì)胞因子的分泌。這為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)RAGE介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)提供了有益的理論。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- RAGE信號(hào)通路激活可以導(dǎo)致炎癥發(fā)生，在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，然而其向胞內(nèi)傳遞信號(hào)的始動(dòng)環(huán)節(jié)卻尚不清楚。前期研究通過噬菌體展示技術(shù)發(fā)現(xiàn)，SLP76可與RAGE相互作用向下游傳遞信號(hào)。基于以上認(rèn)識(shí)，本研究采用基因克隆、Co-IP、Western blot、LiquiChip液相芯片系統(tǒng)等技術(shù)，主要探討RAGE與SLP76相互作用的分子機(jī)制及其相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 首次發(fā)現(xiàn)，AGEs刺激下RAGE和SLP76以時(shí)間依賴方式存在相互作用，其中SLP76的145Y，173Y，207S及SAM結(jié)構(gòu)域可能參與這一過程；并初步證實(shí)RAGE和SLP76相互作用影響細(xì)胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調(diào)節(jié)MIP-1α和TNF-α等細(xì)胞因子的分泌。為探索SLP76各結(jié)構(gòu)域在RAGE通路中的作用奠定了基礎(chǔ)，也為認(rèn)識(shí)RAGE誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)提供了新思路。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 本研究揭示了RAGE與SLP76相互作用的分子機(jī)制，為認(rèn)識(shí)RAGE誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)提供了有力的理論依據(jù)；同時(shí)也可能為糖尿病血管并發(fā)癥、動(dòng)脈粥樣硬化等炎癥反應(yīng)性疾病的臨床治療提供新的治療靶點(diǎn)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：探討SLP76在RAGE介導(dǎo)的信號(hào)通路中作用的分子機(jī)制。方法：分別進(jìn)行體外和體內(nèi)結(jié)合實(shí)驗(yàn)證明RAGE與SLP76能相互作用；構(gòu)建SLP76的突變體，Co-IP檢測(cè)其各結(jié)構(gòu)域及磷酸化位點(diǎn)的功能；免疫印記法檢測(cè)AGEs刺激后下游信號(hào)通路的激活。Liqui-Chip液相蛋白芯片系統(tǒng)檢測(cè)AGEs刺激誘導(dǎo)細(xì)胞因子表達(dá)譜的改變。結(jié)果：體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)RAGE和SLP76存在相互作用，并具有刺激依賴性；Co-IP結(jié)果表明，SLP76的145Y，173Y，207S及SAM結(jié)構(gòu)域突變體不能與RAGE結(jié)合；100ng/ml AGEs刺激RAW264.7 激活了ERK、 p38和NF-κB，進(jìn)而導(dǎo)致MIP-1α和TNF-α分泌水平發(fā)生改變；SLP76能夠影響RAGE介導(dǎo)的ERK活化。結(jié)論：在AGEs刺激下RAGE和SLP76以時(shí)間依賴性方式存在相互作用，其中SLP76的145Y，173Y，207S及SAM結(jié)構(gòu)域可能參與這一過程；并初步證實(shí)RAGE和SLP76相互作用影響細(xì)胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調(diào)節(jié)MIP-1α和TNF-α等細(xì)胞因子的分泌。
獲獎(jiǎng)情況
- 尚未發(fā)表。
鑒定結(jié)果
- 該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，方法科學(xué)，結(jié)果可靠，處同類研究領(lǐng)先水平。
參考文獻(xiàn)
- 基因克隆、Co-IP、Western blot、LiquiChip液相芯片系統(tǒng)
同類課題研究水平概述
- RAGE屬于免疫球蛋白超家族分子，是一種模式識(shí)別的多配體受體，與AGEs、HMGB1、S100家族等配體分子作用，可發(fā)揮非常豐富的生物學(xué)功能，包括蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞骨架改變、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞生長(zhǎng)分化等，其廣泛表達(dá)于多種細(xì)胞表面，在動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤、阿爾茲海默病以及糖尿病血管病變等一系列疾病中發(fā)揮了非同尋常的作用。RAGE與其配體作用介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路一直是科學(xué)家們關(guān)注的熱點(diǎn)。近來，更是發(fā)現(xiàn)了一些新的配體分子如淀粉樣β肽、S100A8/A9等，同時(shí)，RAGE分子本身也發(fā)現(xiàn)了多種亞型成分，這些都極大地豐富了人們對(duì)RAGE的認(rèn)識(shí)。 然而，RAGE胞內(nèi)段向下游傳遞信號(hào)的分子機(jī)制卻尚不明了。前期研究發(fā)現(xiàn)，SLP76是通過噬菌體展示技術(shù)篩選出來的最有可能與RAGE相互作用的分子。有文獻(xiàn)報(bào)道，SLP76和RAGE存在共同表達(dá)的細(xì)胞載體即單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，這是兩者相互作用的客觀條件。并且，SLP76作為一種銜接蛋白，可與其他蛋白形成信號(hào)復(fù)合物，在TCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的發(fā)揮極其重要的作用，已被人廣為接受。這為SLP76在RAGE介導(dǎo)的信號(hào)通路的發(fā)揮作用創(chuàng)造了可能性。這些研究提示RAGE與SLP76可能存在相互作用，并發(fā)揮一定的生物學(xué)效應(yīng)。 我們的研究首次證實(shí)了，RAGE和SLP76以刺激和時(shí)間依賴的方式存在相互作用，并篩選出SLP76上可能參與這一過程的結(jié)構(gòu)域，即第145位酪氨酸，173位酪氨酸，207位絲氨酸及SAM結(jié)構(gòu)域；此外，并初步證實(shí)RAGE和SLP76相互作用影響細(xì)胞內(nèi)ERK和p38 MAPK通路以及NF-κB的激活，從而調(diào)節(jié)MIP-1α和TNF-α等細(xì)胞因子的分泌。這為下一步SLP76各結(jié)構(gòu)域在RAGE通路中的作用奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)也為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)RAGE介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)提供了有益的理論。
