基本信息
- 項目名稱：
- 斑馬魚胰腺相關基因的克隆和功能研究
- 小類：
- 生命科學
- 大類：
- 自然科學類學術論文
- 簡介：
- 本課題利用LM-PCR的方法，結合原位雜交等技術，在Tol2轉基因斑馬魚系中成功鑒定出增強子誘捕得到的基因wdr18，通過morpholino介導的基因敲低及一系列關鍵基因染色，觀察到wdr18可能對斑馬魚的左右軸分化產生影響。
- 詳細介紹：
- 本課題以斑馬魚為實驗材料。利用LM-PCR（linker-mediated PCR）技術對Tol2載體插入位點周邊的基因組序列進行克隆測序，并通過生物信息學分析尋找位于插入位點附近的基因。使用流式細胞術（FACS）結合RT-PCR分析篩選候選基因，進一步通過原位雜交技術，檢驗候選基因的mRNA表達圖案是否和GFP的轉基因魚一致，最終確定wdr18即為目標基因。通過反義核酸類似物morpholino介導的基因敲低，深入研究基因的功能，并觀察到基因wdr18的功能與左右不對稱分化有關。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本文首先提供了課題研究的背景材料、研究意義以及已經完成的前期實驗工作，在此基礎上按照研究的時間和邏輯順序對所開展的具體實驗進行了細致而嚴謹的記錄，最后科學地分析實驗結果，得到結論。并在討論中對結論的意義以及后續(xù)所需要的進一步確認工作進行了探討。論文清晰而完整地展現了作者的科研思路和實驗工作，并且為后續(xù)工作提供了基礎。
科學性、先進性及獨特之處
- 本課題在斑馬魚中成功定位了增強子誘捕基因，采用了LM-PCR，morpholino介導的基因敲低等多種分子生物學、遺傳學研究方法，并且根據實驗動物斑馬魚的獨特性選用原位雜交等方法驗證。所研究的基因涉及脊椎動物的代謝相關的重要腺體--胰腺的發(fā)育，研究結果顯示wdr18對于器官發(fā)育的左右對稱性可能有作用，若進一步加以證實，可能是非常具有重要性和創(chuàng)新性的發(fā)現。
應用價值和現實意義
- 胰腺是一個雙功能的復合腺體，在人體代謝中起著關鍵性的作用。對胰腺發(fā)育的關注和理解將有助于推動醫(yī)學發(fā)展，解決人類面臨的健康問題。此外，生物體內部器官的結構和排列有一定的不對稱性，這種不對稱性不僅與人體健康相關，其發(fā)育機制也是發(fā)育生物學的基本問題。本課題中確定的基因與脊椎動物胚胎發(fā)育期左右軸分化相關，可能在對左右軸分化的研究上有著一定的意義和應用價值。
學術論文摘要
- 本課題以斑馬魚為實驗材料。利用LM-PCR（linker-mediated PCR）技術對Tol2載體插入位點周邊的基因組序列進行克隆測序，并通過生物信息學分析尋找位于插入位點附近的基因。使用流式細胞術（FACS）結合RT-PCR分析篩選候選基因，進一步通過原位雜交技術，檢驗候選基因的mRNA表達圖案是否和GFP的轉基因魚一致，最終確定wdr18即為目標基因。通過反義核酸類似物morpholino介導的基因敲低，深入研究基因的功能，并觀察到基因wdr18的功能與左右不對稱分化有關。
獲獎情況
- 無
鑒定結果
- 無
參考文獻
- 1. Westerfield, M., (1995). “The Zebrafish Book.”Eugene: University of Oregon Press, 2. Ber, I., et al. (2003). "Functional, persistent, and extended liver to pancreas transdifferentiation." J Biol Chem 278(34): 31950-31957. 3. Ferber, S., et al. (2000). "Pancreatic and duodenal homeobox gene 1 induces expression of insulin genes in liver and ameliorates streptozotocin-induced hyperglycemia." Nat Med 6(5): 568-572. 4. Aylsworth, A. S. (2001). "Clinical aspects of defects in the determination of laterality." Am J Med Genet 101(4): 345-355. 5. Bisgrove, B. W., et al. (2003). "Genetics of human laterality disorders: insights from vertebrate model systems." Annu Rev Genomics Hum Genet 4: 1-32. 6. Nonaka, S., et al. (2002). "Determination of left-right patterning of the mouse embryo by artificial nodal flow." Nature 418(6893): 96-99.
同類課題研究水平概述
- 無
