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基本信息
- 項目名稱：
- 斑馬魚胰腺相關(guān)基因的克隆和功能研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 本課題利用LM-PCR的方法，結(jié)合原位雜交等技術(shù)，在Tol2轉(zhuǎn)基因斑馬魚系中成功鑒定出增強(qiáng)子誘捕得到的基因wdr18，通過morpholino介導(dǎo)的基因敲低及一系列關(guān)鍵基因染色，觀察到wdr18可能對斑馬魚的左右軸分化產(chǎn)生影響。
- 詳細(xì)介紹：
- 本課題以斑馬魚為實(shí)驗材料。利用LM-PCR（linker-mediated PCR）技術(shù)對Tol2載體插入位點(diǎn)周邊的基因組序列進(jìn)行克隆測序，并通過生物信息學(xué)分析尋找位于插入位點(diǎn)附近的基因。使用流式細(xì)胞術(shù)（FACS）結(jié)合RT-PCR分析篩選候選基因，進(jìn)一步通過原位雜交技術(shù)，檢驗候選基因的mRNA表達(dá)圖案是否和GFP的轉(zhuǎn)基因魚一致，最終確定wdr18即為目標(biāo)基因。通過反義核酸類似物morpholino介導(dǎo)的基因敲低，深入研究基因的功能，并觀察到基因wdr18的功能與左右不對稱分化有關(guān)。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本文首先提供了課題研究的背景材料、研究意義以及已經(jīng)完成的前期實(shí)驗工作，在此基礎(chǔ)上按照研究的時間和邏輯順序?qū)λ_展的具體實(shí)驗進(jìn)行了細(xì)致而嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠涗?，最后科學(xué)地分析實(shí)驗結(jié)果，得到結(jié)論。并在討論中對結(jié)論的意義以及后續(xù)所需要的進(jìn)一步確認(rèn)工作進(jìn)行了探討。論文清晰而完整地展現(xiàn)了作者的科研思路和實(shí)驗工作，并且為后續(xù)工作提供了基礎(chǔ)。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 本課題在斑馬魚中成功定位了增強(qiáng)子誘捕基因，采用了LM-PCR，morpholino介導(dǎo)的基因敲低等多種分子生物學(xué)、遺傳學(xué)研究方法，并且根據(jù)實(shí)驗動物斑馬魚的獨(dú)特性選用原位雜交等方法驗證。所研究的基因涉及脊椎動物的代謝相關(guān)的重要腺體--胰腺的發(fā)育，研究結(jié)果顯示wdr18對于器官發(fā)育的左右對稱性可能有作用，若進(jìn)一步加以證實(shí)，可能是非常具有重要性和創(chuàng)新性的發(fā)現(xiàn)。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實(shí)意義
- 胰腺是一個雙功能的復(fù)合腺體，在人體代謝中起著關(guān)鍵性的作用。對胰腺發(fā)育的關(guān)注和理解將有助于推動醫(yī)學(xué)發(fā)展，解決人類面臨的健康問題。此外，生物體內(nèi)部器官的結(jié)構(gòu)和排列有一定的不對稱性，這種不對稱性不僅與人體健康相關(guān)，其發(fā)育機(jī)制也是發(fā)育生物學(xué)的基本問題。本課題中確定的基因與脊椎動物胚胎發(fā)育期左右軸分化相關(guān)，可能在對左右軸分化的研究上有著一定的意義和應(yīng)用價值。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 本課題以斑馬魚為實(shí)驗材料。利用LM-PCR（linker-mediated PCR）技術(shù)對Tol2載體插入位點(diǎn)周邊的基因組序列進(jìn)行克隆測序，并通過生物信息學(xué)分析尋找位于插入位點(diǎn)附近的基因。使用流式細(xì)胞術(shù)（FACS）結(jié)合RT-PCR分析篩選候選基因，進(jìn)一步通過原位雜交技術(shù)，檢驗候選基因的mRNA表達(dá)圖案是否和GFP的轉(zhuǎn)基因魚一致，最終確定wdr18即為目標(biāo)基因。通過反義核酸類似物morpholino介導(dǎo)的基因敲低，深入研究基因的功能，并觀察到基因wdr18的功能與左右不對稱分化有關(guān)。
獲獎情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- 1. Westerfield, M., (1995). “The Zebrafish Book.”Eugene: University of Oregon Press, 2. Ber, I., et al. (2003). "Functional, persistent, and extended liver to pancreas transdifferentiation." J Biol Chem 278(34): 31950-31957. 3. Ferber, S., et al. (2000). "Pancreatic and duodenal homeobox gene 1 induces expression of insulin genes in liver and ameliorates streptozotocin-induced hyperglycemia." Nat Med 6(5): 568-572. 4. Aylsworth, A. S. (2001). "Clinical aspects of defects in the determination of laterality." Am J Med Genet 101(4): 345-355. 5. Bisgrove, B. W., et al. (2003). "Genetics of human laterality disorders: insights from vertebrate model systems." Annu Rev Genomics Hum Genet 4: 1-32. 6. Nonaka, S., et al. (2002). "Determination of left-right patterning of the mouse embryo by artificial nodal flow." Nature 418(6893): 96-99.
同類課題研究水平概述
- 無
