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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 斑蝥內(nèi)生菌與斑蟊素合成（降解）的互作研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 為篩選斑蝥素的最佳提取方法，以及斑蝥素色譜檢測條件。分離斑蝥內(nèi)生真菌，通過斑蝥體內(nèi)的真菌分離與發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥前后主要成分的分析。探究其是否合成斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。終得酶法提取簡便，工藝對環(huán)境污染小，提取目標(biāo)物雜質(zhì)含量少，作為斑蝥素提取的首選方法。高效液相色譜法可作為斑蝥素的分析方法。
- 詳細(xì)介紹：
- 目的：篩選斑蝥素的最佳提取方法，以及斑蝥素色譜檢測條件。分離斑蝥內(nèi)生真菌，通過斑蝥體內(nèi)的真菌分離與發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥前后主要成分的分析。探究其是否合成斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。方法：首先自熱水直接提取法，堿提法和酸提法和酶法提取斑蝥素中篩選斑蝥素的最佳提取方法。分別建立斑蝥素的氣相及液相色譜分析方法。分離斑蝥內(nèi)生真菌，并用內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥，探究內(nèi)生真菌是否含有斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)酶法提取優(yōu)于熱水直接提取法、酸提法、堿提法、混合提取法、藥典提取法，在相同條件下酶法提出的斑蝥素的含量最高，可達(dá)2.727mg／ml，比藥典提取法增加574.9%。斑蝥素色譜檢測條件分析證明，高效液相色譜以色譜條件： 柱型：C18；流動(dòng)相：乙腈 -水（40：60）；流速：1ml/min；檢測波長：273nm；柱溫：25℃，液相優(yōu)于氣相。斑蝥內(nèi)分離到2種內(nèi)生真菌。體生菌擴(kuò)大培養(yǎng)后未能測出斑蝥素；在培養(yǎng)液中加入斑蝥藥材發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌對斑蝥素的分解能力不同。結(jié)論：酶法提取簡便，工藝對環(huán)境污染小，提取目標(biāo)物雜質(zhì)含量少，作為斑蝥素提取的首選方法。高效液相色譜法可作為斑蝥素的分析方法。分離斑蝥內(nèi)生真菌的內(nèi)生真菌可以降解斑蝥素。研究提示在斑蝥素的合成培養(yǎng)過程中若避免內(nèi)生真菌的感染可提高斑蝥素的含量。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：篩選斑蝥素的最佳提取方法，以及斑蝥素色譜條件檢測建立，通過斑蝥體內(nèi)的真菌分離與發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥前后主要成分的分析。探究其與斑蝥素合成或降解的作用。 基本思路：1、本實(shí)驗(yàn)首先分別用熱水直接提取法，堿提法和酸提法和酶法提取斑蝥素。2、分別建立斑蝥素的氣相及液相色譜分析方法。3、分離斑蝥內(nèi)生真菌，并用內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥，探究內(nèi)生真菌是否含有斑蝥素，或是否具有合成或降解斑蝥素的能力。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 1研究首次應(yīng)用酶法提取斑蝥素，可作為斑蝥素提取的首選方法。 2研究首次自斑蝥藥材中分離到兩種內(nèi)生真菌；即米根霉和芽孢桿菌。目前缺乏關(guān)于斑蝥素生物合成（降解）的報(bào)道。 3研究首次發(fā)現(xiàn)斑蝥素內(nèi)生真菌對斑蝥素的降解作用，屬原創(chuàng)研究。 4分離斑蝥體內(nèi)的內(nèi)生真菌，研究其合成（降解）斑蝥素的能力，為進(jìn)一步研究斑蝥內(nèi)生菌與斑蝥的互作及其次生代謝之間的關(guān)系提供依據(jù)。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 斑蝥素有明顯的抑菌作用,因此作為重要的抗癌藥物并廣泛被學(xué)者關(guān)注。但目前缺乏關(guān)于斑蝥素生物合成（降解）的研究報(bào)道，探究斑蝥素能否被生物降解和何種生物可以降解斑蝥素成為研究斑蝥素生物循環(huán)的亮點(diǎn)。 分離斑蝥體內(nèi)的內(nèi)生真菌，這一研究具有極高的藥用價(jià)值。 若內(nèi)生真菌具有不同程度的降解斑蝥素的能力，將為下一步研究斑蝥與內(nèi)生真菌的互作以及內(nèi)生真菌與斑蝥素的合成途徑提供理論基礎(chǔ)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 目的：篩選斑蝥素的最佳提取方法，以及斑蝥素色譜檢測條件。分離斑蝥內(nèi)生真菌，通過斑蝥體內(nèi)的真菌分離與發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥前后主要成分的分析。探究其是否合成斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。方法：首先自熱水直接提取法，堿提法和酸提法和酶法提取斑蝥素中篩選斑蝥素的最佳提取方法。分別建立斑蝥素的氣相及液相色譜分析方法。分離斑蝥內(nèi)生真菌，并用內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥，探究內(nèi)生真菌是否含有斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)酶法提取優(yōu)于熱水直接提取法、酸提法、堿提法、混合提取法、藥典提取法，在相同條件下酶法提出的斑蝥素的含量最高，可達(dá)2.727mg／ml，比藥典提取法增加574.9%。斑蝥素色譜檢測條件分析證明，高效液相色譜以色譜條件： 柱型：C18；流動(dòng)相：乙腈 -水（40：60）；流速：1ml/min；檢測波長：273nm；柱溫：25℃，液相優(yōu)于氣相。斑蝥體內(nèi)分離到2種內(nèi)生真菌。結(jié)論：酶法提取簡便，工藝對環(huán)境污染小，提取目標(biāo)物雜質(zhì)含量少，作為斑蝥素提取的首選方法。高效液相色譜法可作為斑蝥素的分析方法。分離斑蝥內(nèi)生真菌的內(nèi)生真菌可以降解斑蝥素。
獲獎(jiǎng)情況
- 1斑蝥素復(fù)合酶法提取工藝已申報(bào)專利。（見附件） 2在2010年北京市大學(xué)生化學(xué)競賽中本項(xiàng)目獲優(yōu)勝獎(jiǎng)。（見附件獎(jiǎng)狀） 3斑蝥內(nèi)生真菌的分離準(zhǔn)備申報(bào)專利。
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- 譚娟杰,章有為,王書永,等.中國藥用甲蟲---芫菁科的資源考察與利用[J].昆蟲學(xué)報(bào),1995,38(3):324-331. Carrel JE,Doom JP,McCormick JP.Quantitative determination of cantharidin in biologicalmaterials using capillary gas chromatography with flame ionization detection[J].J.Chromatography,1985,342:411-415. Carrel J.E.and Eisner T.Cantharidin:Potent feeding deterrent to insects[J].Science,1974,183:755-757. Carrel JE,McCairel MH,Slagle AJ,et al.Cantharidin production in a blister beetle[J].Experientia,1993,49:171-174. Ray AC,Tamulinas SH,Reagor JC.High pressure liquid chromatographic determination ofcantharidin,using a dervatization method in specimens from animals acutely,poisoned byingestion of blister beetles[J],Epicauta lemniscata.Am.J.Vet.Res.,1979,40(4):498-504.
同類課題研究水平概述
- 斑蝥的研究概述：臨床應(yīng)用除抗癌外,尚有抗病毒、抑真菌、升高白細(xì)胞等多種活性。斑蝥體內(nèi)主要藥用成份是斑蝥素, 斑蝥素是應(yīng)用價(jià)值極高的抗癌藥。斑蝥素的提取方法主要有酸法、堿法、混合提取法等，提取不徹底，含量較低。斑蝥體內(nèi)斑蝥素的測定方法有重量法、酸堿滴定法、甲醇鋰法、甲醇鈉法，斑蝥素的檢測主要有薄層掃描法、紫外分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法等進(jìn)行含量測定，但缺乏簡單實(shí)用的可操作方法。內(nèi)生真菌指生活在蟲體組織體內(nèi)的一類并不引起明顯病害癥狀的真菌，它對次生代謝的合成與分解起著至關(guān)重要的作用，且部分內(nèi)生真菌本身可以產(chǎn)生活性物質(zhì)，國內(nèi)外未見斑蝥內(nèi)生真菌生產(chǎn)斑蝥素的報(bào)道。分離斑蝥體內(nèi)的內(nèi)生真菌，研究其具有不同程度的合成（降解）斑蝥素的能力，為進(jìn)一步研究斑蝥內(nèi)生菌與斑蝥的互作及其次生代謝之間的關(guān)系提供依據(jù)。 本研究目的：篩選斑蝥素的最佳提取方法，以及斑蝥素色譜檢測條件。分離斑蝥內(nèi)生真菌，通過斑蝥體內(nèi)的真菌分離與發(fā)酵培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥前后主要成分的分析。探究其是否合成斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。方法：自熱水直接提取法，堿提法和酸提法和酶法提取斑蝥素中篩選斑蝥素的最佳提取方法。分別建立斑蝥素的氣相及液相色譜分析方法。分離斑蝥內(nèi)生真菌，并用內(nèi)生真菌發(fā)酵斑蝥，探究內(nèi)生真菌是否含有斑蝥素，或是否具有降解斑蝥素的能力。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)酶法提取優(yōu)于熱水直接提取法、酸提法、堿提法、混合提取法、藥典提取法，在相同條件下酶法提出的斑蝥素的含量最高，斑蝥素色譜檢測條件分析證明，高效液相色譜以色譜條件： 柱型：C18；流動(dòng)相：乙腈 -水（40：60）；流速：1ml/min；檢測波長：273nm；柱溫：25℃，液相優(yōu)于氣相。斑蝥內(nèi)分離到2種內(nèi)生真菌。體生菌擴(kuò)大培養(yǎng)后未能測出斑蝥素；在培養(yǎng)液中加入斑蝥藥材發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌對斑蝥素的分解能力不同。結(jié)論：酶法提取簡便，作為斑蝥素提取的首選方法。高效液相色譜法可作為斑蝥素的分析方法。分離斑蝥內(nèi)生真菌的內(nèi)生真菌可以降解斑蝥素。 創(chuàng)新性： 1研究首次應(yīng)用酶法提取斑蝥素，效果最優(yōu)可作為斑蝥素提取的首選方法。 2研究首次自斑蝥藥材中分離到兩種內(nèi)生真菌；即米根霉和芽孢桿菌。目前缺乏關(guān)于斑蝥素生物合成（降解）的報(bào)道。 3研究首次發(fā)現(xiàn)斑蝥素內(nèi)生真菌對斑蝥素的降解作用，屬原創(chuàng)研究。
