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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- PRRSV云南地方流行毒株的分離與初步鑒定
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本論文將經(jīng)RT-PCR檢測(cè)為PRRSV陽性的病料（肺臟），采用細(xì)胞分離的方法對(duì)病毒進(jìn)行分離，最后對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。
- 詳細(xì)介紹：
- 本論文將經(jīng)RT-PCR檢測(cè)為PRRSV陽性的病料（肺臟），采用PAM細(xì)胞和Marc-14細(xì)胞對(duì)病毒進(jìn)行分離，然后應(yīng)用間接免疫熒光、電鏡觀察、動(dòng)物接種試驗(yàn)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，最后結(jié)果表明成功分離了一株云南PRRSV，命名為YN-1株。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 由于PRRS不僅與其它許多引起豬繁殖障礙的疾病的臨床癥狀非常相似，而且極易發(fā)生混合感染，同時(shí)不同豬場(chǎng)感染PRRSV后臨診癥狀又有很大的差異，因此確診有賴于實(shí)驗(yàn)室診斷。進(jìn)一步確診，應(yīng)采用病毒的分離鑒定。病毒的分離不僅為基本的確診奠定基礎(chǔ)，而且還為疾病的進(jìn)一步研究提供原材料。分離與鑒定PRRS云南地方毒株，可為深入開展PRRS相關(guān)研究、為臨床診斷和疫病的防制開辟新途徑，從而使PRRS得以有效地控制。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- PRRS的診斷主要根據(jù)流行病學(xué)特點(diǎn)、臨診癥狀，剖檢病變以及結(jié)合豬群的生產(chǎn)性能變化等作出初步診斷。進(jìn)一步確診，應(yīng)采用病毒的分離鑒定、血清學(xué)試驗(yàn)和分子生物技術(shù)。病毒分離可選流產(chǎn)胎兒臟器、發(fā)病死亡豬的肺臟等病料接種PAM、Marc－l45等細(xì)胞。病毒分離物可用間接免疫熒光、電鏡觀察等進(jìn)行鑒定。此外，還建立了RT－PCR、核酸探針原位雜交技術(shù)，可直接從病料中檢測(cè)PRRSV核酸。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 目前藍(lán)耳病已經(jīng)對(duì)我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的危害和重大的經(jīng)濟(jì)損失。由于PRRS極易發(fā)生混合感染，同時(shí)不同豬場(chǎng)感染PRRSV后臨診癥狀又有很大的差異，因此確診有賴于實(shí)驗(yàn)室診斷。病毒的分離不僅為基本的確診奠定基礎(chǔ)，而且還為疾病的進(jìn)一步研究提供原材料分離與鑒定PRRS云南地方毒株，可為深入開展PRRS相關(guān)研究、為臨床診斷和疫病的防制開辟新途徑，從而使PRRS得以有效地控制。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 本試驗(yàn)將從云南某豬場(chǎng)采取、并經(jīng)RT-PCR檢測(cè)為PRRSV陽性的病料(肺臟)處理后接種到豬肺巨噬細(xì)胞（PAM）和Marc-145細(xì)胞上。接種后三天，豬肺巨噬細(xì)胞開始出現(xiàn)堆聚、脫落、崩解；在Marc-145細(xì)胞盲傳3代后，細(xì)胞也出現(xiàn)了相似的細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effects，CPE）。將細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)超速離心、電鏡觀察，可見呈球形的病毒粒子，直徑約為45－55nm；間接免疫熒光檢測(cè)為陽性；接種PRRS、PRV、CSFV陰性的仔豬，15天后豬只出現(xiàn)體溫升高并伴有食欲減退，精神不振等癥狀，采血經(jīng)RT-PCR法檢測(cè)，結(jié)果亦為PRRSV陽性。表明成功分離了一株云南PRRSV，命名為YN-1株。其毒力測(cè)定為1×10-5.6~1×10-5.7 TCID50/0.1ml。
獲獎(jiǎng)情況
- 校第八屆“挑戰(zhàn)杯”學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽中榮獲“一等獎(jiǎng)”； 第五屆“挑戰(zhàn)杯”學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽中榮獲“省級(jí)二等獎(jiǎng)”。
鑒定結(jié)果
- 結(jié)果表明成功分離了一株云南PRRSV，命名為YN-1株。其毒力測(cè)定為1×10-5.6~1×10-5.7 TCID50/0.1ml。
參考文獻(xiàn)
- RT-PCR、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、血清學(xué)檢測(cè) 參考文獻(xiàn)（11篇） 《物病毒學(xué)》、《Mdecular characterization of porcine reproductive and respiratory disease virus ，a member of the arterivirus group 》、《應(yīng)用間接熒光法從國(guó)內(nèi)生殖障礙綜合征豬群中檢測(cè)生殖和呼吸綜合征用性抗體的研究》、《A new order comprising Coromviridae and- arteriviriade》、《豬繁殖與呼吸道綜合征病毒(PRRSV)CH-1a株基因型的鑒 [7]豬繁殖與呼吸綜合癥研究進(jìn)展》、《豬繁殖和呼吸障礙綜合征的診斷方法》、《云南省藍(lán)耳病血清流行病學(xué)調(diào)查》、《PRRSV感染Marc-145細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察》、《細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)PRRSV-SD分離株滴度的影響》
同類課題研究水平概述
- 豬繁殖與呼吸綜合征（porcine productive and respiratory syndrome, PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸衰竭為主要癥狀的傳染病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、產(chǎn)木乃伊胎、仔豬成活率下降和育成豬呼吸道癥狀等。豬繁殖與呼吸綜合癥于1987年在美國(guó)北卡羅來納州首先發(fā)現(xiàn)，隨后在荷蘭、加拿大、德州、英國(guó)、西班牙、瑞士、法國(guó)等世界許多國(guó)家均有發(fā)生。1996年我國(guó)專家郭寶清等首次從國(guó)內(nèi)發(fā)病豬群中分離出豬繁殖與呼吸綜合征病毒，從而確認(rèn)了我國(guó)存在本病。因病豬可見耳病青紫，呈藍(lán)紫色，故本病又稱藍(lán)耳病。自2007年以來,我國(guó)有26個(gè)省份先后發(fā)生了高致病性豬藍(lán)耳病疫情。2007年1月，國(guó)家農(nóng)業(yè)部通過對(duì)分離到的病毒采用全基因序列的分析等技術(shù)手段，最終確定變異藍(lán)耳病病毒是豬高熱病的主要病原。目前藍(lán)耳病已經(jīng)對(duì)我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的危害和重大的經(jīng)濟(jì)損失，防治高致病性藍(lán)耳病已經(jīng)成為當(dāng)前重大動(dòng)物疫情防控工作的重中之重。 PRRSV（ porcine productive and respiratory syndrome virus）為單股正鏈RNA病毒，國(guó)際病毒分類委員會(huì)第七次報(bào)告將其歸于套式病毒目動(dòng)脈炎病毒科動(dòng)脈炎病毒屬。PRRSV有囊膜，病毒粒子呈球形，直徑50-65nm，表面較光滑，核衣殼呈立方形，核心直徑25-35nm, 核衣殼上有長(zhǎng)約5nm的短突起。PRRSV含有囊膜，因此對(duì)氯仿、乙醚等脂溶劑敏感；PRRSV對(duì)溫度和PH敏感，37℃ 48小時(shí)和50℃ 45min可使病毒失去感染性，56℃ 45min病毒完全失去活性，對(duì)低溫-20℃和一70℃PRRSV具有較好的穩(wěn)定性；PRRSV在pH6.5-7.5之間相對(duì)穩(wěn)定，pH高于7或低于5時(shí)，感染力很快消失。PRRSV基因組結(jié)構(gòu)與其它動(dòng)脈炎病毒和冠狀病毒相似，病毒粒子核酸為單股、正鏈RNA，含有polyA，其堿基數(shù)為15kb。根據(jù)抗原性差異，可將PRRSV分為歐洲型和美洲型，前者主要流行于歐洲，后者主要流行于美洲和亞太地區(qū)，但近來在歐洲也分離到美洲型毒株，在北美分離到類似歐洲型的美洲型毒株。我國(guó)目前的流行毒株仍屬于美洲型。不同的PRRSV毒株對(duì)豬的致病力差異很大，而且PRRSV還可引起免疫抑制和持續(xù)性感染。
