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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 基于新一代體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌為載體的腫瘤疫苗研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本實(shí)驗(yàn)是新一代減毒沙門氏菌疫苗自研制成功后第一次用于預(yù)防腫瘤方面的研究，驗(yàn)證了新一代減毒沙門氏菌作為疫苗載體在預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)的效果，也驗(yàn)證了survivin和CRT二者作為腫瘤疫苗抗原的抗腫瘤作用。有創(chuàng)新點(diǎn)包括以下2方面： 1.基于全新的疫苗載體——新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌載體，將沙門氏菌作為載體系統(tǒng)的能力提升到全新水平。 2.運(yùn)用復(fù)合的疫苗抗原——腫瘤凋亡抑制因子survivin和鈣網(wǎng)蛋白（CRT）聯(lián)合，形成復(fù)合抗原。
- 詳細(xì)介紹：
- 口服疫苗預(yù)防和治療腫瘤的研究重點(diǎn)在于尋找合適的疫苗載體和特異、高效的抗原。相對(duì)于傳統(tǒng)突變產(chǎn)生的沙門氏菌載體，通過Δpmi的缺失突變和運(yùn)用araCPBAD啟動(dòng)子得到的新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌載體，能在減毒前完成在宿主淋巴免疫系統(tǒng)的定殖，顯著提高對(duì)目的抗原的體液免疫和細(xì)胞免疫水平，具備高水平的免疫原性，可將沙門氏菌作為疫苗載體系統(tǒng)的能力提升到一個(gè)全新的水平。另一方面，已有多項(xiàng)研究提示：survivin和鈣網(wǎng)蛋白（CRT），二者作為腫瘤疫苗抗原，具有良好的抗腫瘤作用。 本實(shí)驗(yàn)是新一代沙門氏菌載體自研制成功后第一次用于預(yù)防腫瘤方面的研究，我們運(yùn)用新一代體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌χ9558，構(gòu)建了口服survivin與鈣網(wǎng)蛋白復(fù)合疫苗，并在小鼠4T1腫瘤模型上考察了該疫苗對(duì)腫瘤生長(zhǎng)情況的影響。結(jié)果顯示：該疫苗在小鼠4T1腫瘤模型上具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。其預(yù)防和治療腫瘤的效果得到驗(yàn)證。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 本實(shí)驗(yàn)是新一代減毒沙門氏菌疫苗研制成功后首次用于預(yù)防腫瘤方面的研究。我們克隆出survivin和CRT基因，裝載至表達(dá)質(zhì)粒，電轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入新一代體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌χ9558中，構(gòu)建口服survivin-CRT復(fù)合疫苗，在小鼠4T1腫瘤模型上考察疫苗對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響,探討了新一代調(diào)控性延遲減毒沙門氏菌作為疫苗載體預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)的效果，也驗(yàn)證了survivin和CRT作為腫瘤疫苗抗原的抗腫瘤作用。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 已有研究通過Δpmi缺失突變和運(yùn)用araCPBAD啟動(dòng)子，得到新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌，顯示更接近于野生型菌株的免疫系統(tǒng)定殖能力，顯著提高免疫水平，將載體系統(tǒng)的能力提升到全新水平。已有多項(xiàng)研究提示：survivin可作為腫瘤治療的靶點(diǎn)，CRT可抑制腫瘤新生血管形成，增強(qiáng)免疫原性。本實(shí)驗(yàn)是新一代減毒沙門氏菌疫苗研制成功后首次用于預(yù)防腫瘤方面的研究，使用survivin-CRT復(fù)合抗原。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 本研究驗(yàn)證了新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌作為疫苗載體在預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)的效果，也驗(yàn)證了survivin和CRT二者作為腫瘤疫苗抗原的抗腫瘤作用。為建立一種強(qiáng)效、安全、廣譜的新型腫瘤疫苗，用于臨床預(yù)防和治療腫瘤打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 相對(duì)于野生型沙門氏菌株，傳統(tǒng)方式突變的沙門氏菌作為重組載體用于抗原提呈，容易引起宿主周圍應(yīng)激，在宿主體內(nèi)生存能力和在淋巴免疫系統(tǒng)定殖能力明顯減弱，免疫作用受到很大限制。為解決了上述問題，我們通過Δpmi的缺失突變和運(yùn)用araCPBAD啟動(dòng)子，利用阿拉伯多糖調(diào)控fur、crp、phoPQ和rpoS基因的表達(dá),得到新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌χ9558，具有更好的、更接近于野生型親代菌株的抵抗宿主應(yīng)激、防衛(wèi)能力和淋巴免疫系統(tǒng)定殖能力。本實(shí)驗(yàn)主要探討新一代的調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒的沙門氏菌作為載體在預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)的效果，同時(shí)也驗(yàn)證了survivin和CRT二者作為腫瘤疫苗抗原的抗腫瘤作用。我們采用RT-PCR的方法克隆出survivin和鈣網(wǎng)蛋白（CRT）基因，并裝載至表達(dá)質(zhì)粒PYA3493，通過電轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入新一代體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌χ9558中，構(gòu)建口服survivin與鈣網(wǎng)蛋白復(fù)合疫苗，在小鼠4T1腫瘤模型上考察該疫苗對(duì)腫瘤生長(zhǎng)情況的影響。結(jié)果顯示：新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌疫苗在小鼠4T1腫瘤模型上具有一定的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用（p<0.05）。其預(yù)防和治療腫瘤的效果得到驗(yàn)證。
獲獎(jiǎng)情況
- 2009年5月第十屆挑戰(zhàn)杯廣東大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽二等獎(jiǎng)
鑒定結(jié)果
參考文獻(xiàn)
- 1. Evaluation of new generation Salmonella enterica serovar Typhimurium vaccines with regulated delayed attenuation to induce immune responses against PspA. PNAS. Volume 106, January 13, 2009, Pages 532-597 2. Role of survivin and its splice variants in tumorigenesis. Br J Cancer. 2005, 92(2):212-6. 3. Tumor-specific immunity and antiangiogenesis generated by a DNA vaccine encoding calreticulin linked to a tumor antigen. J Clin Invest. 2001, 108(5): 669-678 4. Tumor vaccines: from gene therapy to dendritic-cells the emerging frontier [ J ]. Urol Clin North A m, 2003 , 30（3）: 633 - 643 5.Assembly and antigen-presenting function of MHC class I molecules in cells lacking the ER chaperone calreticulin. Immunity. 2002, 16(1): 99-109 6. Bacterial infectious disease control by vaccine development. Clin Invest, 2002, 110(8): 1061～1066 7. Salmonella enterica Serovar Typhimurium strains with regulated delayed attenuation in vivo. Infection and Immunity, Mar. 2009, Pages 1071-1082
同類課題研究水平概述
- 沙門氏菌具有穩(wěn)定的抗原表達(dá)，有效的抗原提呈等特性，使其成為第一個(gè)作為重組載體用于抗原提呈的細(xì)菌,并已廣泛應(yīng)用在人類和動(dòng)物疫苗中。但已有研究表明，相對(duì)于野生型沙門氏菌株，以往所采用的以傳統(tǒng)方式突變的沙門氏菌疫苗載體在接種到動(dòng)物或人體宿主后，容易出現(xiàn)周圍應(yīng)激，在宿主體內(nèi)生存能力和在淋巴免疫系統(tǒng)定殖能力明顯減弱，它們所能引起的對(duì)目的抗原的免疫反應(yīng)并未達(dá)到理想水平。為了克服上述問題，我們已經(jīng)構(gòu)建了新一代調(diào)控性體內(nèi)延遲減毒沙門氏菌疫苗，它在減毒前完成在宿主淋巴免疫系統(tǒng)的定殖，相對(duì)于傳統(tǒng)突變產(chǎn)生的沙門氏菌載體，具有更好的、更接近于野生型親代菌株的抵抗宿主應(yīng)激、防衛(wèi)能力和淋巴免疫系統(tǒng)定殖能力。已有基于新一代延遲減毒沙門氏菌為載體的肺炎疫苗研究進(jìn)行，結(jié)果表明新一代延遲減毒沙門氏菌χ9558能顯著提高對(duì)目的抗原的體液免疫和細(xì)胞免疫水平，將沙門氏菌作為疫苗載體系統(tǒng)的能力提升到一個(gè)全新的水平。 另一方面，已有多項(xiàng)研究提示：survivin和鈣網(wǎng)蛋白（CRT），二者作為腫瘤疫苗抗原，具有良好的抗腫瘤作用。 以此為基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)是新一代調(diào)控性體內(nèi)減毒沙門氏菌疫苗自研制成功后第一次用于預(yù)防腫瘤方面的研究，研究中使用survivin 和CRT作為腫瘤疫苗抗原。
