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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 豬附紅細(xì)胞體半巢式PCR診斷方法的建立
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡(jiǎn)介：
- 本課題組基于豬附紅細(xì)胞體基因組序列，從分子生物學(xué)水平建立一種豬附紅細(xì)胞體病半巢氏PCR診斷方法，該診斷方法具有特異、敏感、實(shí)用等特點(diǎn)，為豬附紅細(xì)胞體臨床檢測(cè)提供了一種科學(xué)可靠的方法。
- 詳細(xì)介紹：
- 從2006年開始課題組經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)研究和攻關(guān)，基于豬附紅細(xì)胞體基因組序列，從分子生物學(xué)水平實(shí)驗(yàn)室內(nèi)建立一種豬附紅細(xì)胞體病半巢氏PCR診斷方法。其次通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證性染毒試驗(yàn)，建立小鼠動(dòng)物模型，再現(xiàn)該病的臨床癥狀，用半巢氏PCR診斷方法進(jìn)行鑒別診斷，證實(shí)該方法的快速、特異性、敏感性。最后進(jìn)行了推廣式的田間試驗(yàn)，對(duì)遼寧省豬附紅細(xì)胞體病感染情況進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，獲得遼寧省豬附紅細(xì)胞體感染率的可信區(qū)間。有望將該成果在全省范圍豬群中進(jìn)行推廣應(yīng)用。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 國(guó)內(nèi)外大部分研究?jī)H限于該病的流行病學(xué)調(diào)查，很多學(xué)者依據(jù)16S rRNA 基因設(shè)計(jì)引物，建立了PCR診斷方法特異性不高。 針對(duì)畜牧生產(chǎn)上這一難題，為尋求一種特異性好、敏感性高的快速診斷方法，從2006年開始課題組經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)研究和攻關(guān)，基于豬附紅細(xì)胞體基因組序列，從分子生物學(xué)水平建立一種豬附紅細(xì)胞體病PCR診斷方法，在此基礎(chǔ)上又進(jìn)一步建立了半巢氏PCR診斷方法。并進(jìn)行臨床推廣應(yīng)用。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 課題組依據(jù)豬附紅細(xì)胞體部分基因組序列建立一種PCR診斷方法。通過動(dòng)物疾病模型和田間試驗(yàn)證實(shí)此方法的快捷、靈敏、特異性和實(shí)用性。并完成了遼寧地區(qū)豬附紅細(xì)胞體病感染情況的流行病學(xué)調(diào)查。本項(xiàng)技術(shù)研究為豬附紅細(xì)胞體病的防治工作提供了科學(xué)依據(jù)，可以為現(xiàn)場(chǎng)提供一種快捷、靈敏、特異的診斷方法。大大減少治療藥物的投入，降低發(fā)病率及死亡率，有效防治附紅細(xì)胞體所致人獸共患病。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 附紅細(xì)胞體對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重，此項(xiàng)成果的研究與應(yīng)用，對(duì)提高豬附紅細(xì)胞體病綜合防治水平，保證養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展，提高養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益方面都將起到積極促進(jìn)作用。附紅細(xì)胞體病是一種重要的人畜共患病，本病不僅對(duì)豬、牛、羊、犬等動(dòng)物危害嚴(yán)重，而且還引起人的發(fā)病。所以本項(xiàng)目成果的研究與應(yīng)用，不僅在保證動(dòng)物健康方面發(fā)揮重要的作用，而且在人獸共患病防治方面具有重要的意義。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 摘 要：目的 為能夠更加準(zhǔn)確、敏感的檢測(cè)出豬附紅細(xì)胞體（Mycoplasma suis，M.suis），本實(shí)驗(yàn)建立一種新的診斷方法—半巢式聚合酶鏈反應(yīng)( hemi nested Polymerase Chain Reaction ，hemi nested PCR)。方法 利用oligo6.0和Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)篩選出合適的PCR引物，經(jīng)酶切分析和半巢式PCR進(jìn)一步鑒定后進(jìn)行序列測(cè)定。同時(shí)與普通PCR診斷方法進(jìn)行比較。結(jié)果 測(cè)得的豬附紅細(xì)胞體基因序列與GenBank中發(fā)表的豬附紅細(xì)胞體基因序列（AJ504999）同源性為100%。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的PCR引物不能擴(kuò)增出弓形蟲、鏈球菌、大腸桿菌DNA、豬瘟病毒cDNA和豬偽狂犬病病毒。通過敏感性試驗(yàn)，半巢式PCR診斷方法最低能夠檢測(cè)出0.12fg的DNA。通過與普通PCR比較，證明本實(shí)驗(yàn)建立的半巢式PCR更具敏感性和實(shí)用性。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)建立的半巢式PCR診斷方法具有特異、敏感、實(shí)用等特點(diǎn)，為豬附紅細(xì)胞體的檢測(cè)提供了一種可靠的診斷方法。
獲獎(jiǎng)情況
- 第五屆"挑戰(zhàn)杯"遼寧省大學(xué)生創(chuàng)業(yè)計(jì)劃競(jìng)賽 一等獎(jiǎng) 論文“豬附紅細(xì)胞體半巢式PCR診斷方法的建立”發(fā)表于《中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)》2008,24(4):322-326
鑒定結(jié)果
- 從2007年開始至2008年底，課題組在省內(nèi)六個(gè)市的規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行了推廣應(yīng)用。2007年推廣應(yīng)用530萬頭，2008年推廣應(yīng)用760萬頭，合計(jì)共創(chuàng)經(jīng)濟(jì)效益9141.2萬元。
參考文獻(xiàn)
- [1] 張浩吉, 謝明權(quán), 張健. 豬附紅細(xì)胞體PCR 檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用[J ]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2005, 25 (5) : 480-483 [2] U ilenberg G, Thiaucourt F, Jongejan F. Mycoplasma and Eperythrozoon (Mycoplasmataceae ) comments on a recent paper[J ]. Int J Syst Evo lM icrobio l, 2006, 56 (P t 1) : 13-14.
同類課題研究水平概述
- 近幾年來我國(guó)大部分地區(qū)豬群發(fā)生附紅細(xì)胞體病，給中國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)帶來很大的損失。目前, 國(guó)內(nèi)外對(duì)附紅細(xì)胞體病的研究尚不深入,尤其對(duì)該病的主要致病機(jī)理、病原體分類、分子生物學(xué)特性、宿主特異性和交叉感染、具體生活史等還不十分清楚。國(guó)內(nèi)學(xué)者大部分研究?jī)H限于該病的流行病學(xué)調(diào)查、傳統(tǒng)的光鏡和電鏡診斷，生產(chǎn)實(shí)踐中預(yù)防控制措施還不完善，沒有有效的豬附紅細(xì)胞體診斷技術(shù)。而很多國(guó)內(nèi)學(xué)者依據(jù)16S rRNA 基因設(shè)計(jì)引物建立了PCR診斷方法，特異性不高，主要是由于豬附紅細(xì)胞體的16S rRNA 基因與其他病原微生物的16S rRNA 基因有較高的同源性。因此，建立一種快速、特異性強(qiáng)、敏感性高的豬附紅細(xì)胞體病診斷方法是畜牧生產(chǎn)上急需解決的關(guān)鍵問題。 針對(duì)畜牧生產(chǎn)上這一難題，為尋求一種特異性好、敏感性高的快速診斷方法，從2006年開始課題組經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)研究和攻關(guān)，基于豬附紅細(xì)胞體基因組序列（AJ504999），從分子生物學(xué)水平建立一種豬附紅細(xì)胞體病PCR診斷方法，在此基礎(chǔ)上又進(jìn)一步建立了半巢氏PCR診斷方法。并進(jìn)行臨床推廣應(yīng)用。其次通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證性染毒試驗(yàn)，建立小鼠動(dòng)物模型，再現(xiàn)該病的臨床癥狀，用本項(xiàng)目的方法進(jìn)行鑒別診斷，證實(shí)該方法的快速、特異性、敏感性。最后進(jìn)行了推廣式田間試驗(yàn)，對(duì)遼寧省豬附紅細(xì)胞體病感染情況進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，獲得遼寧省豬附紅細(xì)胞體感染率的可信區(qū)間。有望將該成果在全省范圍豬群中進(jìn)行推廣應(yīng)用。
