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基本信息
- 項目名稱：
- 新型食物過敏原酶聯(lián)免疫檢測方法的探討
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作A類
- 簡介：
- 我們的研究是對傳統(tǒng)的間接ELISA法進(jìn)行了改良，以特異性抗原包被反應(yīng)板、以酶標(biāo)特異性抗原代替間接ELISA法中的酶標(biāo)記抗人IgE，構(gòu)建雙抗原夾心一步法檢測食物過敏原，研究一種簡便、準(zhǔn)確快速、特異性高，適用范圍廣的新型食物過敏原酶聯(lián)免疫檢測法。我們以檢測牛奶過敏原為例，用包被的β-LG和酶標(biāo)記的β-LG構(gòu)建雙抗原夾心法，捕獲患者血清中的過敏特異性抗體。研制出新型牛奶過敏原快速檢測試劑盒。
- 詳細(xì)介紹：
- 目前鑒別過敏原有體內(nèi)試驗和體外實驗。體內(nèi)試驗主要就是皮膚針刺試驗，體外檢測方法主要有放射性變應(yīng)原吸附試驗(RAST)、CAP變應(yīng)原檢測系統(tǒng)及ELISA。但各方法均存在各自的缺陷。我們的研究是在ELISA基礎(chǔ)上，對傳統(tǒng)的ELISA進(jìn)行改良，研究一種簡便、準(zhǔn)確快速、特異性高，適用范圍廣的新型食品過敏原酶聯(lián)免疫檢測法，克服傳統(tǒng)ELISA的缺陷，以便于過敏原檢測的廣泛開展。 本方法以包被的β-LG（特異性抗原）包被反應(yīng)板和酶標(biāo)記的β-LG構(gòu)建雙抗原夾心法，捕獲患者血清中的過敏特異性抗體，檢測牛奶過敏原。檢測模式為一步法（見圖1）。同時檢測一批牛奶過敏陽性血清和對照血清，計算該檢測方法的靈敏度和特異度，考察試驗方法同進(jìn)口試劑盒檢測結(jié)果的符合率。以天津市兒童醫(yī)院檢驗科牛奶過敏原標(biāo)本為例進(jìn)行ELISA測定，并與美國ASI公司IVT過敏原體外檢測試劑盒確診的結(jié)果進(jìn)行比較以判斷特異度和靈敏度。通過使用雙抗原夾心法測定由天津市兒童醫(yī)院檢驗科提供的40份過敏原血清以及四十份正常血清樣本，與美國ASI公司IVT過敏原體外檢測試劑盒檢測出的金標(biāo)準(zhǔn)比較，計算得出雙抗原夾心法的靈敏度為82.5%,特異度為95%，陽性預(yù)測值（+PV）為94.3%,陰性預(yù)測值（-PV）為84.4%。 綜合考慮，該方法具有廣泛的推廣使用性。本方法有較好的靈敏性、穩(wěn)定性、特異性、重復(fù)性和較好檢測范圍，技術(shù)簡便、成本較低，適合于大規(guī)模樣本的檢測，有利于基層醫(yī)院臨床應(yīng)用的推廣。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設(shè)計、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)
- 目的：目前鑒別過敏原有體內(nèi)試驗和體外實驗。體內(nèi)試驗主要就是皮膚針刺試驗，體外檢測方法主要有放射性變應(yīng)原吸附試驗(RAST)、CAP變應(yīng)原檢測系統(tǒng)及ELISA。但各方法均存在各自的缺陷。我們的研究是在ELISA基礎(chǔ)上，對傳統(tǒng)的ELISA進(jìn)行改良，研究一種簡便、準(zhǔn)確快速、特異性高，適用范圍廣的新型食品過敏原酶聯(lián)免疫檢測法，克服傳統(tǒng)ELISA的缺陷，以便于過敏原檢測的廣泛開展。 基本思路：本方法以包被的β-LG（特異性抗原）包被反應(yīng)板和酶標(biāo)記的β-LG構(gòu)建雙抗原夾心法，捕獲患者血清中的過敏特異性抗體，檢測牛奶過敏原。檢測模式為一步法（見圖1）。同時檢測一批牛奶過敏陽性血清和對照血清，計算該檢測方法的靈敏度和特異度，考察試驗方法同進(jìn)口試劑盒檢測結(jié)果的符合率。以天津市兒童醫(yī)院檢驗科牛奶過敏原標(biāo)本為例進(jìn)行ELISA測定，并與美國ASI公司IVT過敏原體外檢測試劑盒確診的結(jié)果進(jìn)行比較以判斷特異度和靈敏度。 項目的關(guān)鍵問題及技術(shù)指標(biāo)：1.探索最佳反應(yīng)濃度。使用美國沃克公司提供的β-LG包被微孔板。通過實驗摸索出最佳包被濃度，以求達(dá)到最佳的反應(yīng)效果。2.酶標(biāo)記抗原過程中的相關(guān)問題。傳統(tǒng)ELISA是使用酶標(biāo)二抗，而我方法采用酶標(biāo)記抗原，需要注意標(biāo)記過程中產(chǎn)生的一系列問題。
科學(xué)性、先進(jìn)性
- 我們的研究是在ELISA基礎(chǔ)上，對傳統(tǒng)的ELISA法進(jìn)行了改良，以特異性抗原包被反應(yīng)板、以酶標(biāo)特異性抗原代替間接ELISA法中的酶標(biāo)記抗人IgE，構(gòu)建雙抗原夾心一步法檢測食物過敏原。 本實用新型為基于雙抗原夾心法的食物過敏檢測方法，改變傳統(tǒng)的間接ELISA法檢測模式。以牛奶過敏原為例，用牛奶過敏原分別包被微孔板和標(biāo)記辣根過氧化物酶制成酶標(biāo)抗原，用于識別和捕獲患者血清中的牛乳過敏特異性抗體，再通過催化底物顯色來判斷結(jié)果。 與現(xiàn)有檢測方法相比，本檢測方法具有如下特點：1.雙抗原夾心法檢測采用了兩步特異性反應(yīng)，避免了傳統(tǒng)間接法ELISA中酶標(biāo)二抗識別IgE缺乏針對性的缺點，使特異性得到很大提高，極大地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。2．利用雙抗原反應(yīng)的高特異性，可檢測出由過敏產(chǎn)生的任何類型抗體，克服了間接法中只識別IgE型抗體的缺點，提高檢出率。3.測量時血清不需稀釋，可減少因標(biāo)本稀釋帶來的誤差。4.只需一步孵育反應(yīng)，簡便快捷，省時省力，適合批量篩查。
獲獎情況及鑒定結(jié)果
- 無
作品所處階段
- 實驗室階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 無
作品可展示的形式
- 實物、產(chǎn)品，圖片，錄像，樣品，宣傳冊
使用說明,技術(shù)特點和優(yōu)勢,適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場分析,經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測
- 使用說明：在包被了β-LG的微孔中加入10μl的血清原液和100μl的酶標(biāo)記β-LG，37 ℃孵育1 hour，洗板5次拍干后加入顯色液A、B各50μl，室溫避光反應(yīng)15min，后加入終止液，以620nm為參考波長，測定450nm處的吸光度（A450）。 特點及優(yōu)勢：其特征是反應(yīng)的原理為雙抗原夾心法而非間接法，不需要酶標(biāo)抗體而使用酶標(biāo)記抗原，用于包被的抗原和用于標(biāo)記酶的抗原為同一過敏原。 適用范圍及推廣前景：過敏原篩查是過敏性疾病診斷治療的中心環(huán)節(jié)。其中雙抗原夾心用于過敏原篩查尚未見報道，該方法具有較高特異性，適合于大規(guī)模樣本的檢測。 市場效益和經(jīng)濟(jì)預(yù)測：項目推廣將打破進(jìn)口試劑的壟斷地位，對開發(fā)具有當(dāng)?shù)靥厣^敏原診斷試劑具有重要意義，經(jīng)濟(jì)效益可觀。 本方法僅以牛奶過敏原為例進(jìn)行探討，隨著研究的深入，還可對其他常見食物過敏原進(jìn)行檢測，具有很大的市場應(yīng)用前景。
同類課題研究水平概述
- 目前，國外臨床上常用的食物過敏原體外檢測方法主要有放射性變應(yīng)原吸附試驗(RAST)、CAP變應(yīng)原檢測系統(tǒng)及ELISA。RAST檢測sIgE特異性高，影響因素少，與皮膚試驗和支氣管激發(fā)試驗符合率高，且安全。但是該檢測方法存在放射性核素污染，并且待測標(biāo)本中有相同特異性的IgG時，該檢測結(jié)果將會受影響。CAP變應(yīng)原檢測系統(tǒng)避免了RAST的放射性核素污染，且CAP上特異性結(jié)合的是抗IgE，也避免了IgG的影響。然而我國目前尚未自行研制出相應(yīng)的儀器及試劑，故多為進(jìn)口儀器和試劑，不僅成本較高，而且變應(yīng)原具有明顯的地域性，我國的變應(yīng)原并不完全符合，故存在一定的檢測誤差。目前ELISA檢測方法尚存在些許缺陷，酶標(biāo)記抗人IgE價格昂貴，大多依靠進(jìn)口，制備復(fù)雜，適用范圍有限，不適合大規(guī)模推廣使用。 我國國內(nèi)臨床上常用的食物過敏原檢測方法主要為間接法ELASA，尚未有雙抗原夾心法相關(guān)的報道。
