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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 致病性弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作B類
- 簡介：
- 研制出檢測5種弧菌（擬態(tài)弧菌、溶藻弧菌、海魚弧菌、鯊魚弧菌和霍利斯弧菌）的選擇性鑒別培養(yǎng)基。利用該培養(yǎng)基，能夠特異、靈敏、準(zhǔn)確地將目標(biāo)菌株與其他10多種致病性弧菌區(qū)分開。不僅能大大縮短用常規(guī)的微生物方法進(jìn)行弧菌檢測的時(shí)間，簡化檢測程序，而且節(jié)約檢測成本。最重要的是，這個(gè)作品能直接通過肉眼觀察檢測結(jié)果，非常適用于基層的食品安全快速檢測。
- 詳細(xì)介紹：
- 研制出檢測5種弧菌（擬態(tài)弧菌、溶藻弧菌、海魚弧菌、鯊魚弧菌和霍利斯弧菌）的選擇性鑒別培養(yǎng)基。利用該培養(yǎng)基，能夠特異、靈敏、準(zhǔn)確地將目標(biāo)菌株與其他10多種致病性弧菌區(qū)分開。不僅能大大縮短用常規(guī)的微生物方法進(jìn)行弧菌檢測的時(shí)間，簡化檢測程序，而且節(jié)約檢測成本。最重要的是，這個(gè)作品能直接通過肉眼觀察檢測結(jié)果，非常適用于基層的食品安全快速檢測。
作品專業(yè)信息
設(shè)計(jì)、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點(diǎn)、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)
- 中央“十二五”規(guī)劃提出要制定和實(shí)施海洋發(fā)展戰(zhàn)略，提高海洋開發(fā)、控制、綜合管理能力。作為3個(gè)全國海洋經(jīng)濟(jì)發(fā)展試點(diǎn)之一的浙江省，正積極爭取從海洋資源大省向海洋經(jīng)濟(jì)強(qiáng)省轉(zhuǎn)變。影響水產(chǎn)品安全性的一大重要原因就是由細(xì)菌污染引起的水產(chǎn)品質(zhì)量安全問題，其中海產(chǎn)品中致病性弧菌是引發(fā)人體疾病的主要病原菌，由致病性弧菌污染引起的疾病占細(xì)菌性食物中毒的27%以上，所以加強(qiáng)水產(chǎn)品中致病性弧菌的檢測是非常有必要的。本作品是“十一五”國家863計(jì)劃海洋領(lǐng)域重點(diǎn)項(xiàng)目中的分項(xiàng)目，針對水產(chǎn)品中致病性微生物的快速篩檢。致病性弧菌對水產(chǎn)品安全的威脅引起各個(gè)國家研究機(jī)構(gòu)的重視，各國高度關(guān)注其在水產(chǎn)品中的污染情況調(diào)查及其快速檢測和分離技術(shù)的研究，改進(jìn)工作得到了高度關(guān)注，已成為相關(guān)研究的熱點(diǎn)。 創(chuàng)新點(diǎn)： 自主設(shè)計(jì)研發(fā)的5種致病性弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基有一個(gè)很重要的優(yōu)點(diǎn)，即借助該作品能直接通過肉眼觀察得到檢測結(jié)果，經(jīng)濟(jì)、簡便、易行、敏感、特異；選擇性鑒別培養(yǎng)基是一類非常好的致病菌鑒別檢驗(yàn)技術(shù)。國內(nèi)外已有的致病性弧菌的顯色鑒別培養(yǎng)基只有針對霍亂弧菌和副溶血型弧菌的，尚無本項(xiàng)目所研究的5種致病性弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基。 技術(shù)指標(biāo)： 分別依據(jù)不同種弧菌所含酶系統(tǒng)不同，生長代謝途徑、能利用的底物和代謝產(chǎn)物的組成也不同，對某些特定抑菌物質(zhì)的耐受力也不同，從而達(dá)到目的菌和非目的菌的選擇；依據(jù)菌種不同，通過加入一定的指示劑來顯示這種不同，以達(dá)到菌種鑒別的效果。
科學(xué)性、先進(jìn)性
- 致病性弧菌有十多種，除副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌外，目前許多國家已經(jīng)開始關(guān)注其他致病性弧菌在食物中的存在問題，國際上對水產(chǎn)品安全的檢測標(biāo)準(zhǔn)在不斷增加。選擇性鑒別培養(yǎng)基是在生化反應(yīng)的基礎(chǔ)上開發(fā)的新技術(shù)，它將傳統(tǒng)的細(xì)菌分離與生化反應(yīng)有機(jī)的結(jié)合起來，使得檢測結(jié)果直觀，易于觀察辨別，且具有低成本、特異性強(qiáng)、靈敏度高和檢測快速、操作方便等優(yōu)點(diǎn)。選擇性鑒別培養(yǎng)基是國內(nèi)外微生物檢測發(fā)展的一個(gè)主要發(fā)展方向。 利用顯色培養(yǎng)基鑒定微生物是近年來開發(fā)的新型微生物快速檢測技術(shù)，通過在選擇性培養(yǎng)基中加入細(xì)菌特異性酶的顯色底物，直接根據(jù)菌落顏色對菌種做出鑒定，減少了進(jìn)行純培養(yǎng)和生化鑒定的步驟，大大提高了檢測效率，降低了檢測成本。也就是說，選擇性培養(yǎng)基既能有效提高樣品的抽檢率、保證檢測效果，又具有快速、經(jīng)濟(jì)、簡便的優(yōu)點(diǎn)。
獲獎(jiǎng)情況及鑒定結(jié)果
- 詳見項(xiàng)目圖片1
作品所處階段
- 實(shí)驗(yàn)室階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 將培養(yǎng)基均申請專利，通過售賣專利進(jìn)行技術(shù)轉(zhuǎn)讓；也可與各檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)或水產(chǎn)品加工企業(yè)合作，轉(zhuǎn)讓一部分技術(shù)。
作品可展示的形式
- 實(shí)物和圖片
使用說明,技術(shù)特點(diǎn)和優(yōu)勢,適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場分析,經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測
- 選擇性鑒別培養(yǎng)基是一種新型微生物檢測診斷試劑，它利用微生物產(chǎn)生特異性酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)而顯現(xiàn)出某種特定顏色的原理，對微生物進(jìn)行篩選分離, 直接根據(jù)菌落顏色就可以對菌種做出鑒定，減少了進(jìn)行純培養(yǎng)和生化鑒定的步驟，大大提高了檢測效率。該方法具有特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn)，在微生物篩選鑒別方面快速準(zhǔn)確，較傳統(tǒng)培養(yǎng)基而言，可有效減輕因假陽性或假陰性造成微生物檢測實(shí)驗(yàn)室繁重的工作量。 可用于各種致病性弧菌的地方性流行病學(xué)調(diào)查、水域及水產(chǎn)品致病性弧菌污染狀況調(diào)查、水產(chǎn)品生產(chǎn)加工企業(yè)原料把關(guān)、生產(chǎn)過程及時(shí)監(jiān)控和產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)、水產(chǎn)品流通和貿(mào)易部門的質(zhì)量把關(guān)檢驗(yàn)、各級檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)日常檢驗(yàn)、地方政府相關(guān)部門對水產(chǎn)品致病性弧菌的監(jiān)管、預(yù)警及致病性弧菌疫情發(fā)生時(shí)的及時(shí)確診等。綜上所述，該項(xiàng)目的研究結(jié)果具有很好的應(yīng)用前景。 將研究出來的檢測系統(tǒng)經(jīng)過一定時(shí)間廣泛應(yīng)用于相關(guān)的企業(yè)和部門，其直接和間接的經(jīng)濟(jì)效益會很大，且是可以長期獲得的。
同類課題研究水平概述
- 目前已有的致病性弧菌的檢測方法有： 1. 傳統(tǒng)培養(yǎng)基法：該方法具有以下一些明顯的缺點(diǎn)：檢測周期長，一般說來鑒定一種細(xì)菌需要7～10 d；程序復(fù)雜，細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)方法需經(jīng)富集培養(yǎng)、選擇性分離、形態(tài)特征觀察、生理生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定等過程。 2. 免疫學(xué)檢測方法： (1) 免疫磁珠法 (MACS) (2) 酶聯(lián)免疫吸附法：該方法具有靈敏、特異、快速、操作簡便以及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。但是，由于免疫反應(yīng)特異性強(qiáng),對試劑的選擇性高，致使很難同時(shí)分析多種成分對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)；分析分子量很小的化合物和很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難。而且，操作過程中易出現(xiàn)孔間交叉污染，出現(xiàn)假陽性。 3. 分子生物學(xué)方法： (1) PCR方法 (2) 核酸探針技術(shù) (3) 環(huán)介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)：該方法具有特異、高效、快速、簡便、檢測容易等優(yōu)點(diǎn),但缺點(diǎn)是其引物設(shè)計(jì)比傳統(tǒng)的PCR復(fù)雜，并且因?yàn)槠洚a(chǎn)物的獨(dú)特性，為單鏈DNA的分離增加了難度。 (4)基因芯片技術(shù)：該技術(shù)具有快速、高通量、高靈敏性、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。每個(gè)乳膠顆粒上都可以滿滿地(以共價(jià)鍵牢固結(jié)合的方式)包被核酸。因?yàn)樘结樏芏雀?，產(chǎn)生的信號強(qiáng)，加上使用熒光檢測，所以敏感性大大高于任何現(xiàn)有分析方法。但多指標(biāo)檢測時(shí)引物的不兼容、非特異性結(jié)合、不同PCR 產(chǎn)物與不同探針之間交叉雜交等情況，決定了很難在單管中進(jìn)行過多的PCR反應(yīng)。 4. 生物傳感器檢測方法： 電子舌方法：雖然電子舌它具有信息量豐富、易智能化、使用壽命長、成本低廉、快速簡便等獨(dú)有特點(diǎn)，但是穩(wěn)定性不夠。 以上幾種快速檢測方法相對檢測周期縮短，但這些方法所需的試劑耗材和儀器都較昂貴，檢測成本非常高，而且需要非常專業(yè)的人員操作，難以廣泛應(yīng)用于檢測部門，特別是基層檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)。 5. 選擇性鑒別培養(yǎng)基：目前致病性弧菌所用的選擇性鑒別培養(yǎng)基主要是TCBS、科瑪嘉的弧菌顯色培養(yǎng)基和海博的弧菌顯色培養(yǎng)基。但這些培養(yǎng)基共同存在二個(gè)問題：特異性較低，分離的菌株雜菌較多或呈假陰性；如TCBS培養(yǎng)基只能將弧菌屬分為兩大類，創(chuàng)傷弧菌在TCBS瓊脂平板上生長時(shí)很像副溶血弧菌，只能通過一些生化反應(yīng)把兩者區(qū)分開來，目前，有些成熟的微生物快速鑒定系統(tǒng)已經(jīng)被應(yīng)用于擬態(tài)弧菌的檢測并得到認(rèn)可的主要有法國梅里埃的API 20E 和全自動(dòng)微生物分析儀(VITEK)等。
