基本信息
- 項目名稱：
- Ⅰ型鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作B類
- 簡介：
- 各種傳染病的流行使養(yǎng)鴨業(yè)蒙受巨大經(jīng)濟損失。尤其以I型鴨病毒性肝炎（DHV-Ⅰ）最嚴重，市場急需建立快速、有效的診斷方法。 本產(chǎn)品將ELISA技術(shù)應(yīng)用于DHV-Ⅰ診斷試劑盒的研發(fā)，填補了市場相應(yīng)產(chǎn)品的空缺，已申請國家發(fā)明專利；現(xiàn)已通過實驗室研發(fā)成功，在洛陽市、平頂山、三門峽等地區(qū)推廣應(yīng)用，效果非常顯著；本產(chǎn)品應(yīng)用于DHV-Ⅰ的快速診斷和防控，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟、社會效益。
- 詳細介紹：
- 近年來，隨著國民生活水平的提高，國內(nèi)養(yǎng)鴨業(yè)適應(yīng)消費者對畜禽產(chǎn)品營養(yǎng)價值的要求得到了快速發(fā)展，但隨著集約化養(yǎng)殖的普及，各種傳染病的流行使養(yǎng)鴨業(yè)蒙受巨大經(jīng)濟損失。尤其以I型鴨病毒性肝炎（DHV-Ⅰ）最為嚴重，該病是幼齡雛鴨的高度致死性的急性傳染病，發(fā)病急，傳播快，死亡率高。因此市場急需建立快速、敏感、特異的DHV-Ⅰ診斷方法。 本產(chǎn)品將ELISA技術(shù)應(yīng)用于DHV-Ⅰ診斷試劑盒的研發(fā)，填補了市場相應(yīng)產(chǎn)品的空缺，并已申請國家發(fā)明專利（已進入實質(zhì)審查階段）；本產(chǎn)品已通過實驗室研發(fā)成功，在洛陽市、平頂山、三門峽等地區(qū)進行初步推廣應(yīng)用，效果非常顯著；本產(chǎn)品具有以下優(yōu)點：（1）特異性強、敏感性高，能準確、高效檢測血清抗體；（2）操作簡便快速、檢測結(jié)果易判定；（3）基因工程技術(shù)表達重組蛋白，生產(chǎn)成本低廉，能夠批量生產(chǎn)。 本產(chǎn)品能應(yīng)用于DHV-Ⅰ的快速診斷和防控，可在畜牧獸醫(yī)研究和生產(chǎn)的企業(yè)、畜牧獸醫(yī)相關(guān)專業(yè)大專院校、科研單位、動物出入境檢驗檢疫單位及各級畜牧獸醫(yī)行政主管部門下屬動物疫病預(yù)防控制技術(shù)支持單位、各規(guī)?；B(yǎng)鴨場等單位推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟、社會效益。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設(shè)計、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標
- 目的：提供一種I型鴨肝炎病毒（DHV-Ⅰ）血清抗體酶聯(lián)免疫法（ELISA）診斷試劑盒和診斷方法，及其在I型鴨病毒性肝炎的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和免疫監(jiān)測方面的應(yīng)用。 基本思路：擴增出 DHV-Ⅰ中VP1抗原基因，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET32a-VP1，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入宿主菌BL21（DE3），體外表達VP1蛋白做抗原包被酶標板；制備出辣根過氧化酶標記的兔抗鴨IgG抗體；并優(yōu)化間接ELISA技術(shù)，研制出 I型鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒。 本產(chǎn)品特異性強，敏感度高，操作簡便快速，結(jié)果易判定，適于基層推廣應(yīng)用。目前國內(nèi)外尚無同類產(chǎn)品，填補了市場相應(yīng)產(chǎn)品的空缺。 技術(shù)關(guān)鍵：1、通過基因工程得到I型鴨肝炎病毒殼蛋白的主要抗原多肽；2、兔抗鴨血清IgG多抗的制備；3、酶標抗體(HRP-兔抗鴨IgG)的制備；4、ELISA診斷試劑盒的制備。
科學(xué)性、先進性
- Ⅰ型鴨病毒性肝炎傳統(tǒng)診斷方法有臨床觀察及剖檢、病毒分離、PCR等。但這些方法費時費力，且有些方法準確率低、特異性差，不能及時為發(fā)病鴨群提供治療依據(jù)，易造成較大的經(jīng)濟損失。與此相對，本產(chǎn)品克服了其他診斷方法臨床應(yīng)用的不足，具有以下優(yōu)點：（1）特異性強、敏感性高，能準確、高效檢測血清抗體；（2）操作簡便快速、檢測結(jié)果易判定；（3）基因工程技術(shù)表達重組蛋白，生產(chǎn)成本低廉，能夠批量生產(chǎn)。 本作品將ELISA技術(shù)應(yīng)用于Ⅰ型鴨病毒性肝炎診斷試劑盒的研發(fā)，填補了市場相應(yīng)產(chǎn)品的空缺。Ⅰ型鴨病毒性肝炎ELISA診斷試劑盒已申請國家發(fā)明專利，目前正處于國家專利局實質(zhì)審查階段；同時本產(chǎn)品已通過實驗室研發(fā)成功，在洛陽市、平頂山、三門峽等地區(qū)進行初步推廣應(yīng)用，效果非常顯著。
獲獎情況及鑒定結(jié)果
- 2010年分別獲以下獎勵： 獲第八屆“挑戰(zhàn)杯”河南省大學(xué)生創(chuàng)業(yè)計劃競賽優(yōu)秀獎； 獲第三屆“挑戰(zhàn)杯”河南科技大學(xué)學(xué)生創(chuàng)業(yè)計劃競賽金獎
作品所處階段
- 本作品現(xiàn)處于實驗室階段，專利已進入實質(zhì)審查階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 技術(shù)入股
作品可展示的形式
- 本作品具有實物產(chǎn)品，可現(xiàn)場演示操作過程以及實驗過程的圖片資料。
使用說明,技術(shù)特點和優(yōu)勢,適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場分析,經(jīng)濟效益預(yù)測
- 本項目的特點與優(yōu)勢： （1）利用酶聯(lián)免疫反應(yīng)，具有極高的敏感性和特異性，同時重組蛋白為非全病毒抗原，安全性好。 （2）操作簡便快捷，結(jié)果判定直觀準確。 （3）重組蛋白表達量高，極大的節(jié)約成本，可用于批量檢測。 該試劑盒操作簡便，能較好滿足不同層次人員的需要，如疫病監(jiān)測、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、集約化養(yǎng)殖到個體養(yǎng)殖等。在I型鴨病毒性肝炎的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和免疫監(jiān)測等方面具有很重要的應(yīng)用價值，且該試劑盒成本可控制在較低范圍內(nèi)，有易于大范圍推廣應(yīng)用，因而具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟、社會效益。
同類課題研究水平概述
- 常見致病性鴨病有十余種，但國內(nèi)外對鴨病試劑盒研究相對較少，并且基本上都停留在實驗室研究，未在臨床生產(chǎn)實踐中應(yīng)用，其中相對較成熟的產(chǎn)品鴨瘟病毒核酸擴增檢測試劑盒和鴨病毒性腸炎病毒(DEV) ELISA試劑盒也只是在科研及小范圍臨床應(yīng)用。 眾所周知，鴨病毒性肝炎是幼齡雛鴨的一種高度致死性的急性傳染病，此病的特征是發(fā)病急，傳播快，死亡率高，常給養(yǎng)鴨場造成嚴重的經(jīng)濟損失。鴨病毒性肝炎有三種類型，Ⅰ型呈世界性分布，Ⅱ型和Ⅲ型鴨病毒性肝炎分別局限于英國和美國。目前國內(nèi)流行的主要是DHV-Ⅰ，是嚴重危害鴨子的主要傳染病之一。建立快速、敏感、特異的診斷方法是有效預(yù)防和控制該病的關(guān)鍵措施之一。 實驗室研究表明，鴨肝炎病毒各種檢測方法中，最經(jīng)典的是中和試驗，但是比較繁瑣、費時，不能用于快速診斷，不適與基層推廣；瓊脂擴散試驗雖然簡便易行，適于基層推廣，但是其特異性與敏感性有待進一步提高；而病毒的RT-PCR法雖然敏感性與特異性極高，但是費用及操作要求較高，限制了基層的推廣；其他方法也都由于各方面原因而限制了大范圍的推廣應(yīng)用，造成基層養(yǎng)殖場不能及時、有效地進行防治。 自1971年Engvall和Perlmann用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定IgG后，該技術(shù)迅速發(fā)展、廣泛應(yīng)用。該技術(shù)的原理是：①使抗原結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原與某種酶連接成酶標抗原，這種酶標抗原既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體）和酶標抗原按不同的步驟與固相載體表面的抗原起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。 而本研究的Ⅰ型鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒國內(nèi)外還未見商品化產(chǎn)品。Zhao等對鴨肝炎病毒ELISA檢測的研究，陳溥言建立的夾心ELISA法檢測I型鴨肝炎病毒(I-DHV)以及孔留五對I-DHV VP1基因功能的研究，這些實驗室研究都為鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒的研制和產(chǎn)品開發(fā)提供一定的理論參考基礎(chǔ)。
