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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- Ⅰ型鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒
- 來(lái)源：
- 第十二屆“挑戰(zhàn)杯”省賽作品
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 大類：
- 科技發(fā)明制作B類
- 簡(jiǎn)介：
- 各種傳染病的流行使養(yǎng)鴨業(yè)蒙受巨大經(jīng)濟(jì)損失。尤其以I型鴨病毒性肝炎（DHV-Ⅰ）最嚴(yán)重，市場(chǎng)急需建立快速、有效的診斷方法。 本產(chǎn)品將ELISA技術(shù)應(yīng)用于DHV-Ⅰ診斷試劑盒的研發(fā)，填補(bǔ)了市場(chǎng)相應(yīng)產(chǎn)品的空缺，已申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利；現(xiàn)已通過實(shí)驗(yàn)室研發(fā)成功，在洛陽(yáng)市、平頂山、三門峽等地區(qū)推廣應(yīng)用，效果非常顯著；本產(chǎn)品應(yīng)用于DHV-Ⅰ的快速診斷和防控，具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。
- 詳細(xì)介紹：
- 近年來(lái)，隨著國(guó)民生活水平的提高，國(guó)內(nèi)養(yǎng)鴨業(yè)適應(yīng)消費(fèi)者對(duì)畜禽產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的要求得到了快速發(fā)展，但隨著集約化養(yǎng)殖的普及，各種傳染病的流行使養(yǎng)鴨業(yè)蒙受巨大經(jīng)濟(jì)損失。尤其以I型鴨病毒性肝炎（DHV-Ⅰ）最為嚴(yán)重，該病是幼齡雛鴨的高度致死性的急性傳染病，發(fā)病急，傳播快，死亡率高。因此市場(chǎng)急需建立快速、敏感、特異的DHV-Ⅰ診斷方法。 本產(chǎn)品將ELISA技術(shù)應(yīng)用于DHV-Ⅰ診斷試劑盒的研發(fā)，填補(bǔ)了市場(chǎng)相應(yīng)產(chǎn)品的空缺，并已申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利（已進(jìn)入實(shí)質(zhì)審查階段）；本產(chǎn)品已通過實(shí)驗(yàn)室研發(fā)成功，在洛陽(yáng)市、平頂山、三門峽等地區(qū)進(jìn)行初步推廣應(yīng)用，效果非常顯著；本產(chǎn)品具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）特異性強(qiáng)、敏感性高，能準(zhǔn)確、高效檢測(cè)血清抗體；（2）操作簡(jiǎn)便快速、檢測(cè)結(jié)果易判定；（3）基因工程技術(shù)表達(dá)重組蛋白，生產(chǎn)成本低廉，能夠批量生產(chǎn)。 本產(chǎn)品能應(yīng)用于DHV-Ⅰ的快速診斷和防控，可在畜牧獸醫(yī)研究和生產(chǎn)的企業(yè)、畜牧獸醫(yī)相關(guān)專業(yè)大專院校、科研單位、動(dòng)物出入境檢驗(yàn)檢疫單位及各級(jí)畜牧獸醫(yī)行政主管部門下屬動(dòng)物疫病預(yù)防控制技術(shù)支持單位、各規(guī)?；B(yǎng)鴨場(chǎng)等單位推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。
作品圖片
作品專業(yè)信息
設(shè)計(jì)、發(fā)明的目的和基本思路、創(chuàng)新點(diǎn)、技術(shù)關(guān)鍵和主要技術(shù)指標(biāo)
- 目的：提供一種I型鴨肝炎病毒（DHV-Ⅰ）血清抗體酶聯(lián)免疫法（ELISA）診斷試劑盒和診斷方法，及其在I型鴨病毒性肝炎的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和免疫監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用。 基本思路：擴(kuò)增出 DHV-Ⅰ中VP1抗原基因，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET32a-VP1，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入宿主菌BL21（DE3），體外表達(dá)VP1蛋白做抗原包被酶標(biāo)板；制備出辣根過氧化酶標(biāo)記的兔抗鴨IgG抗體；并優(yōu)化間接ELISA技術(shù)，研制出 I型鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒。 本產(chǎn)品特異性強(qiáng)，敏感度高，操作簡(jiǎn)便快速，結(jié)果易判定，適于基層推廣應(yīng)用。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)同類產(chǎn)品，填補(bǔ)了市場(chǎng)相應(yīng)產(chǎn)品的空缺。 技術(shù)關(guān)鍵：1、通過基因工程得到I型鴨肝炎病毒殼蛋白的主要抗原多肽；2、兔抗鴨血清IgG多抗的制備；3、酶標(biāo)抗體(HRP-兔抗鴨IgG)的制備；4、ELISA診斷試劑盒的制備。
科學(xué)性、先進(jìn)性
- Ⅰ型鴨病毒性肝炎傳統(tǒng)診斷方法有臨床觀察及剖檢、病毒分離、PCR等。但這些方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且有些方法準(zhǔn)確率低、特異性差，不能及時(shí)為發(fā)病鴨群提供治療依據(jù)，易造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。與此相對(duì)，本產(chǎn)品克服了其他診斷方法臨床應(yīng)用的不足，具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）特異性強(qiáng)、敏感性高，能準(zhǔn)確、高效檢測(cè)血清抗體；（2）操作簡(jiǎn)便快速、檢測(cè)結(jié)果易判定；（3）基因工程技術(shù)表達(dá)重組蛋白，生產(chǎn)成本低廉，能夠批量生產(chǎn)。 本作品將ELISA技術(shù)應(yīng)用于Ⅰ型鴨病毒性肝炎診斷試劑盒的研發(fā)，填補(bǔ)了市場(chǎng)相應(yīng)產(chǎn)品的空缺。Ⅰ型鴨病毒性肝炎ELISA診斷試劑盒已申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利，目前正處于國(guó)家專利局實(shí)質(zhì)審查階段；同時(shí)本產(chǎn)品已通過實(shí)驗(yàn)室研發(fā)成功，在洛陽(yáng)市、平頂山、三門峽等地區(qū)進(jìn)行初步推廣應(yīng)用，效果非常顯著。
獲獎(jiǎng)情況及鑒定結(jié)果
- 2010年分別獲以下獎(jiǎng)勵(lì)： 獲第八屆“挑戰(zhàn)杯”河南省大學(xué)生創(chuàng)業(yè)計(jì)劃競(jìng)賽優(yōu)秀獎(jiǎng)； 獲第三屆“挑戰(zhàn)杯”河南科技大學(xué)學(xué)生創(chuàng)業(yè)計(jì)劃競(jìng)賽金獎(jiǎng)
作品所處階段
- 本作品現(xiàn)處于實(shí)驗(yàn)室階段，專利已進(jìn)入實(shí)質(zhì)審查階段
技術(shù)轉(zhuǎn)讓方式
- 技術(shù)入股
作品可展示的形式
- 本作品具有實(shí)物產(chǎn)品，可現(xiàn)場(chǎng)演示操作過程以及實(shí)驗(yàn)過程的圖片資料。
使用說明,技術(shù)特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì),適應(yīng)范圍,推廣前景的技術(shù)性說明,市場(chǎng)分析,經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測(cè)
- 本項(xiàng)目的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)： （1）利用酶聯(lián)免疫反應(yīng)，具有極高的敏感性和特異性，同時(shí)重組蛋白為非全病毒抗原，安全性好。 （2）操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果判定直觀準(zhǔn)確。 （3）重組蛋白表達(dá)量高，極大的節(jié)約成本，可用于批量檢測(cè)。 該試劑盒操作簡(jiǎn)便，能較好滿足不同層次人員的需要，如疫病監(jiān)測(cè)、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、集約化養(yǎng)殖到個(gè)體養(yǎng)殖等。在I型鴨病毒性肝炎的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和免疫監(jiān)測(cè)等方面具有很重要的應(yīng)用價(jià)值，且該試劑盒成本可控制在較低范圍內(nèi)，有易于大范圍推廣應(yīng)用，因而具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。
同類課題研究水平概述
- 常見致病性鴨病有十余種，但國(guó)內(nèi)外對(duì)鴨病試劑盒研究相對(duì)較少，并且基本上都停留在實(shí)驗(yàn)室研究，未在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用，其中相對(duì)較成熟的產(chǎn)品鴨瘟病毒核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒和鴨病毒性腸炎病毒(DEV) ELISA試劑盒也只是在科研及小范圍臨床應(yīng)用。 眾所周知，鴨病毒性肝炎是幼齡雛鴨的一種高度致死性的急性傳染病，此病的特征是發(fā)病急，傳播快，死亡率高，常給養(yǎng)鴨場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。鴨病毒性肝炎有三種類型，Ⅰ型呈世界性分布，Ⅱ型和Ⅲ型鴨病毒性肝炎分別局限于英國(guó)和美國(guó)。目前國(guó)內(nèi)流行的主要是DHV-Ⅰ，是嚴(yán)重危害鴨子的主要傳染病之一。建立快速、敏感、特異的診斷方法是有效預(yù)防和控制該病的關(guān)鍵措施之一。 實(shí)驗(yàn)室研究表明，鴨肝炎病毒各種檢測(cè)方法中，最經(jīng)典的是中和試驗(yàn)，但是比較繁瑣、費(fèi)時(shí)，不能用于快速診斷，不適與基層推廣；瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雖然簡(jiǎn)便易行，適于基層推廣，但是其特異性與敏感性有待進(jìn)一步提高；而病毒的RT-PCR法雖然敏感性與特異性極高，但是費(fèi)用及操作要求較高，限制了基層的推廣；其他方法也都由于各方面原因而限制了大范圍的推廣應(yīng)用，造成基層養(yǎng)殖場(chǎng)不能及時(shí)、有效地進(jìn)行防治。 自1971年Engvall和Perlmann用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定IgG后，該技術(shù)迅速發(fā)展、廣泛應(yīng)用。該技術(shù)的原理是：①使抗原結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原與某種酶連接成酶標(biāo)抗原，這種酶標(biāo)抗原既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體）和酶標(biāo)抗原按不同的步驟與固相載體表面的抗原起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 而本研究的Ⅰ型鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒國(guó)內(nèi)外還未見商品化產(chǎn)品。Zhao等對(duì)鴨肝炎病毒ELISA檢測(cè)的研究，陳溥言建立的夾心ELISA法檢測(cè)I型鴨肝炎病毒(I-DHV)以及孔留五對(duì)I-DHV VP1基因功能的研究，這些實(shí)驗(yàn)室研究都為鴨肝炎病毒血清抗體ELISA診斷試劑盒的研制和產(chǎn)品開發(fā)提供一定的理論參考基礎(chǔ)。
