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基本信息
- 項目名稱：
- 有機相中測定酶PSL活性
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 酶活性的測定，一般在水相中進行，不能真實地反應(yīng)酶在有機相中的活性大小。為此，筆者通過大量實驗研究，最終選用2, 6-二氯靛酚鈉作為在用機相中的顯色劑和底物, 利用分光光度法測定了假單胞脂肪酶（Pseudomomas sp. Lipase, PSL）在丙酮中的催化活性，并通過器壁固定化的方式提高了PSL的催化活性。
- 詳細介紹：
- 本論文以PSL作為催化劑、2，6-二氯靛酚鈉為反應(yīng)底物和指示劑、丙酮為溶劑，研究了底物分子與醋酸乙烯酯發(fā)生酯轉(zhuǎn)化反應(yīng)的動力學(xué)。研究中，底物的濃度選為4.13×10-5mol/L，用紫外分光光度法監(jiān)測底物分子的濃度變化，分析波長為640 nm。結(jié)果表明，固定化脂肪酶PSL的比活力比酶粉的比活力高。盡管固定化酶重復(fù)使用后，活性有所降低，但通過重復(fù)固定化，其活性可以基本恢復(fù)。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：為實現(xiàn)在有機相中用酶抑法分析有機磷農(nóng)藥殘留，建立有機相中測定酶活性的分析方法。 基本思路：以2,6-二氯靛酚鈉為底物和顯色劑，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在丙酮中分析酯酶PSL的催化動力學(xué)和催化活性。
科學(xué)性、先進性及獨特之處
- 研究中，非水相測定酶活性的方法是我們首次提出來的，與之相關(guān)的器壁固定化方法不但使PSL酶活力提高了3倍，而且簡化了酶與反應(yīng)體系的分離操作，使用后的酶活力還可以通過重復(fù)固定化地方法基本恢復(fù)其活性，
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 假單胞脂肪酶PSL價廉易得，代替難得的膽堿酯酶用于酶抑法分析農(nóng)藥殘留，易于普及。具有較大的實用價值。
學(xué)術(shù)論文摘要
- [目的] 為實現(xiàn)在有機相中用酶抑法分析有機磷農(nóng)藥殘留，建立了有機相中測定酶活性的分析方法。[方法] 以2,6-二氯靛酚鈉為底物和顯色劑，制作了標(biāo)準(zhǔn)曲線，在4mL的丙酮中分析了微生物酯酶PSL的催化動力學(xué)和催化活性。[結(jié)果] 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2 = 0.9806。酶的用量為2.5 mg，1 IU = 75.7 mg·min-1·μmol-1；酶活力為0.033 IU ；比活力為0.0132 IU/mg。[結(jié)論] 為有機相中酶抑法分析農(nóng)藥殘留，提供了酶活性測定的有效方法。
獲獎情況
- 有機相中測定酶PSL活性，胡遠書，胡福平，劉晨，叢方地，劉海學(xué)；安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38 (25): 13620-13621
鑒定結(jié)果
- 測定酶活力參數(shù)
參考文獻
- 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38 (25): 13620-13621
同類課題研究水平概述
- 在國際上，許多科研工作者已經(jīng)對脂肪酶進行了多種非水相中的生物轉(zhuǎn)化方面的研究。自從具有先驅(qū)性的Buchner(1897)的工作以來，人們已經(jīng)知道，酶不需要生物細胞的環(huán)境也是有活性的。而且，自從1900年以來，人們還知道，酶能夠在非水介質(zhì)中催化反應(yīng)。從此以后，關(guān)于酶在有機溶劑中的催化的大量報道成指數(shù)性地增加，使得有機相中生物催化領(lǐng)域發(fā)生了飛躍性的發(fā)展，目前相關(guān)的研究正大量的運用在工業(yè)領(lǐng)域。 在國內(nèi)，有機相中酶促反應(yīng)的研究中也已經(jīng)取得了相當(dāng)大的發(fā)展，曹淑桂等用豬胰脂肪酶酶粉及其固定化酶在非水相中進行了催化酯合成和酯交換的反應(yīng)；許建和等在有機相中成功地實現(xiàn)了脂肪酶催化薄荷醇的高效拆分；彭立風(fēng)等在有機相脂肪酶催化的有機物合成反應(yīng)?，F(xiàn)在在國內(nèi)的高等院校和科研院所有越來越多的研究人員在從事非水酶學(xué)的研究，非水酶學(xué)的研究正處于一個嶄新的發(fā)展階段。 脂肪酶通常通過固定化的方式進行重復(fù)應(yīng)用，因為固定化之后能增強其應(yīng)用時的穩(wěn)定性以及活性。尤其在水相中，如在固定化脂肪酶催化的水解反應(yīng)體系中，因為脂肪酶一般溶于水相，固定化的一個重要目的之一就是減少酶在水相中的溶解損失，以達到對酶的回收和再利用。 雖然，一些固定化技術(shù)能夠使脂肪酶多次重復(fù)使用，有時通過增加脂肪酶在載體上的分散程度，或者改變使用的方式，能夠增加使用的次數(shù)和效果。但是在許多固定化方式中，一般都需要相適宜的固定化材料作為載體，并且有時固定化程序比較復(fù)雜。而且有時脂肪酶固定化后增加了傳質(zhì)限制，導(dǎo)致酶催化活性降低。還有，固定化酶在水解反應(yīng)的過程中酶活力損失量較大，重復(fù)使用效果多數(shù)情況下不夠理想。所以固定化技術(shù)上需要進一步突破性的研究。因此，論文中嘗試在反應(yīng)器壁上進行固定化方法。
