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基本信息
- 項目名稱：
- 洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因過表達載體的構(gòu)建
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 通過構(gòu)建洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因的克隆并構(gòu)建過表達載體，以期通過轉(zhuǎn)化紅曲獲得高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲菌株。
- 詳細(xì)介紹：
- 心腦血管疾病是全球致死率最高的疾病，預(yù)防和治療心腦血管疾病主要依靠降血脂藥品。以紅曲為原料的降脂藥品占據(jù)了中藥降脂藥品的大部分市場份額，其市場需求量逐年攀升。紅曲中的主要降脂藥用成分為洛伐他汀，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)對紅曲為原料的降脂藥品也是以洛伐他汀為指標(biāo)性成分進行藥品準(zhǔn)入檢驗的。利用分子生物學(xué)手段構(gòu)建洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因mokH、mokF和MplaeA的過表達載體。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 目的：進一步了解mokH、mokF和MplaeA在紅曲中的功能。并通過構(gòu)建洛伐他汀的關(guān)鍵基因的過表達載體這一研究為下一步工作中轉(zhuǎn)化紅曲獲得洛伐他汀高產(chǎn)菌株打下基礎(chǔ)。 基本思路：采用雙酶切的方法將目的基因與表達載體連接在一起并轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中驗證并保存。
科學(xué)性、先進性及獨特之處
- 試圖為利用基因工程的手段獲得高產(chǎn)洛伐他汀的菌株打下前期基礎(chǔ)。此方面的研究目前較少。
應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義
- 構(gòu)建成功的過表達載體可以轉(zhuǎn)化紅曲菌株，通過篩選獲得洛伐他汀高產(chǎn)菌株，從而降低功能紅曲相關(guān)藥品或保健品的成本。
學(xué)術(shù)論文摘要
- 紅曲的藥用價值和保健功效日益引人關(guān)注，其中洛伐他汀作為紅曲主要的降脂因子成為科研熱點和紅曲產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重點。相關(guān)規(guī)定已將洛伐他汀定為功能紅曲的標(biāo)志性功能成分。mokH、mokF和MpleaA是紅曲霉次級代謝產(chǎn)物洛伐他汀生物合成的關(guān)鍵酶基因，分別編碼轉(zhuǎn)錄因子、脂酰轉(zhuǎn)移酶和正向全局調(diào)控因子，其可能直接或間接控制洛伐他汀的生物合成。本課題的研究內(nèi)容主要是對上述三個基因以及所編碼的蛋白進行核苷酸序列的同源性分析、氨基酸序列分析、亞細(xì)胞定位分析、疏水性分析以及結(jié)構(gòu)域分析并利用基因工程手段將從紫紅曲霉中克隆得到的上述三個基因與pCAMBIA1300M載體分別通過限制酶酶切位點連接，構(gòu)建過表達載體。
獲獎情況
- 獲得昆明理工大學(xué)首屆大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃優(yōu)秀項目二等獎。
鑒定結(jié)果
- 該項目具有較好的可實施性，并已成功構(gòu)建洛伐他汀合成途徑關(guān)鍵基因mokH、mokF和MplaeA的過表達載體。
參考文獻
- 《洛伐他汀最新研究進展》 <Identification of the mokH Gene Encoding Transcription Factor>
同類課題研究水平概述
- 目前對紅曲洛伐他汀生物合成基因的研究已經(jīng)很成熟，其基因種類和功能也被一一發(fā)現(xiàn)和證實，傳統(tǒng)的方法多采用改善發(fā)酵條件或通過大量篩選高產(chǎn)菌株來實現(xiàn)洛伐他汀的高產(chǎn)，而通過基因工程的手段改造菌種使洛伐他汀超表達的方法卻鮮有報道。
