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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 大理地區(qū)健康人陰道念珠菌藥物敏感性研究
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- 通過對分離的大理地區(qū)念珠菌的藥物敏感性的檢測，為臨床抗真菌藥物的選擇提供依據(jù)。采用微量液基稀釋法，測定念珠菌對氟康唑（Fluconazole, FCZ）、酮康唑（Ketoconazole, KCZ）、5-氟胞嘧啶（5-flucytosine,5-FC）和兩性霉素B（Amphotericin, AMB）共4種常用抗真菌藥物的敏感性（MIC值） 。
- 詳細(xì)介紹：
- 大理地區(qū)健康人陰道念珠菌藥物敏感性研究 姚毅1、白麗2、陳財(cái)發(fā)1、何偉1、朱文1 [摘要] 目的 通過對分離的大理地區(qū)念珠菌的藥物敏感性的檢測，為臨床抗真菌藥物的選擇提供依據(jù)。方法 采用微量液基稀釋法，測定念珠菌對氟康唑（Fluconazole, FCZ）、酮康唑（Ketoconazole, KCZ）、5-氟胞嘧啶（5-flucytosine,5-FC）和兩性霉素B（Amphotericin, AMB）共4種常用抗真菌藥物的敏感性（MIC值）。結(jié)果 45株健康人群陰道念珠菌對抗真菌藥物FCZ 、AMB、5-FC 、KCZ的耐藥率分別為：8.9%、0%、6.7%、6.7%，敏感率分別為80%、64%、93%、84%。 結(jié)論 45株念珠菌對四種抗真菌藥物的耐藥率無顯著性差異，敏感率除5-FC的敏感性比AMB好（P=0.001），KCZ的敏感性比AMB好（P=0.031）外，其余藥物的敏感率無顯著性差異（P＞0.05）。上述四種臨床常用抗真菌藥物可選作陰道念珠菌病的治療，但應(yīng)注意某些菌株的劑量依賴性敏感和耐藥現(xiàn)象。 關(guān)鍵詞:藥物敏感性; 體外;念珠菌;健康人群 Research the antifungal susceptibility to vaginal candida in healthy subjects in Dali Yao Yi, Bai Li, Chen Cai Fa, He Wei , Zhu Wen ABSTRACT: Through antifungal susceptibility test of isolates of candida in Dali area, for clinical basis for selection of antifungal drugs. Detect the antifungal susceptibility (MIC) of candida to fluconazole (Fluconazole, FCZ), ketoconazole (Ketoconazole, KCZ), 5-fluorocytosine (5-flucytosine, 5-FC) and amphotericin b (Amphotericin, AMB) a total of 4 kinds of antifungal drug by using micro-liquid-based dilution method. Result: 45 strains vaginal candida in healthy subjects antifungal drug FCZ, AMB, KCZ, 5-FC resistance rate respectively are: 8.9%, 0%，6.7%, 6.7%,sensitive rate respectively for 80%, 64%, 93%, 84%. Conclusions：45 strains candida of four antifungal drugs resistant no significance difference, sensitive rate except 5 - FC sensitivity than AMB good (P = 0.001), the sensitivity of the KCZ than AMB good (P = 0.031) outside, the rest of drug sensitive rate has no significant difference (P > 0.05). The above four kinds of commonly used clinical antifungal drugs optional for treatment of vaginal candida， but should be aware that some strains of dose-dependent phenomenon of sensitive and resistant. KEY WORDS: antifungal susceptibility; candida ; healthy subjects [基金項(xiàng)目] 大理學(xué)院2010年大學(xué)生科研基金資助 [作者單位] 1.大理學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)07級1班，大理 671000 2. 大理學(xué)院醫(yī)學(xué)微生物及免疫學(xué)教研室，大理 671000 [通訊作者] 白 麗，E-mail：bailiqian@ 念珠菌屬條件致病性酵母樣真菌，常寄生于人體與外界相通的腔道中，如口腔、 腸道、 陰道等，健康人群攜帶率較低（口腔中約 9% ）。由各種原因（如HIV 感染等）導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降、 菌群失調(diào)或寄生位置發(fā)生改變而的真菌發(fā)病率越來越高，其中主要是念珠菌病。隨著唑類藥物在粘膜念珠菌病中的廣泛使用，念珠菌的敏感性逐漸降低，耐藥株呈現(xiàn)增加趨勢。采用美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(National Committee for Clinical Laboratory standards,NCCLS )推薦的微量稀釋法測定念珠菌的藥物敏感性。通過對分離的大理地區(qū)念珠菌的藥物敏感性的檢測，為臨床抗真菌藥物的選擇提供依據(jù)。 1材料與方法 1.1主要試劑 沙氏瓊脂培養(yǎng)基（Sabouraud dextrose argar）、RPMI—1640干粉、三氮嗎啡丙磺酸（3-N-morpholinopropanesulfonicacid,MOPS）、抗真菌藥物儲備液：兩性霉素B（AmphotericinB,Amb）5-氟胞嘧啶（Fluorocytosine,5-FC），氟康唑（Ketoconazole,KETO）（中國藥品生物制品檢定所）1mol/L NaOH溶液。 1.2主要儀器 電子天平(AB204-5,METLER TOLEDO)、-20℃冰箱（Forma Scientific,USA）和-70℃冰箱（REVCO ULT1386-3-U37,USA）、微量移液器、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、普通光學(xué)顯微鏡、96孔微量培養(yǎng)板、隔水式恒溫保養(yǎng)箱（water-jacket constant temperature incubator, GSP-9160MBE, Boxum）、干烤箱（101A-2，上海崇明實(shí)驗(yàn)儀器）、高壓蒸汽滅菌器（YXQ-LS-50SⅡ）、超凈工作臺(SW-CJ-2FD，蘇州凈化)、0.22um濾過膜、濾器、磁力攪拌器。 1.3實(shí)驗(yàn)菌株 選擇大理地區(qū)健康人陰道念珠菌的分離株(45株),已保存于白麗教授實(shí)驗(yàn)室。 1.4標(biāo)準(zhǔn)菌株 ATCC10029作為四種藥物的敏感性標(biāo)準(zhǔn)珠。 1.5 RPMI—1640液的配置 取10.4g RPMI-1640粉(含L谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉，GIBCO)溶于900ml無菌水中，加入34.53g 三氮嗎啡啉丙磺酸(MOPS，夏斯生物)至其終濃度為0.165mol/L，室溫下用磁力攪拌器混勻2h～3h，使其充分溶解，用1mol/L NaOH調(diào)pH至7.0（25℃），用滅菌雙蒸水定容至1L，濾過除菌，備用。 1.6抗真菌藥物 1.6.1儲存液 儲存液為應(yīng)用液10倍，5-FC和FCZ為1280μg/mL,Ambhe KETO為320μg/mL，分裝于-70℃保存?zhèn)溆谩? 1.6.2應(yīng)用液的制備 用RPMI-1640液將儲存液作1:10稀釋后再做倍比稀釋，F(xiàn)CZ和5FC為128μg/ML～0.25μg/mL10個(gè)系列濃度，Amb和KETO為32μg/mL～0.06μg/mL10個(gè)系列濃度，均為兩倍終濃度。 1.6.3微量藥敏培養(yǎng)板的制備 使用96孔平底微量培養(yǎng)板，1～10列分別加入10濃度梯度的抗真菌藥物的應(yīng)用液，從高濃度到低濃度，11列加入RPMI-1640液（作為生長對照），每孔100μL，12列作為空白對照，放入-20℃冰箱備用，使用時(shí)需經(jīng)-4℃、4℃和室溫各1h。 （注：重復(fù)使用96孔平底微量培養(yǎng)板，需嚴(yán)格處理。用0.05～0.1％的新潔爾液浸泡過夜，清水洗滌后涼干，再用75％的酒精浸泡后用滅菌雙蒸水沖洗，在紫外線下照射涼干，無菌保存?zhèn)溆谩＃? 1.7藥敏試驗(yàn) 1.7.1念珠菌的激活與稀釋 將待測菌株在YPD（1％yeast extract,1%peptone，2%dextrose）瓊脂培養(yǎng)基上兩次激活后，取直徑大于1mm的菌落少許于3ml無菌生理鹽水中搖勻后制成菌懸液，取少許，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)四個(gè)大方格中的菌細(xì)胞數(shù)，取平均值X，此時(shí)菌細(xì)胞數(shù)為X×104cfu/mL，用RPMI-1640液調(diào)整濃度為3×103cfu/mL(2倍終濃度)。 1.7.2加樣 在上述制備好的含抗真菌藥物的培養(yǎng)板上加入念珠菌懸液，每孔100μL，空白對照不加，振蕩混勻后放入濕盒中（防止微量板中的液體揮發(fā)而影響藥物濃度），35℃孵育24～48h后觀察結(jié)果。 1.7.3結(jié)果判斷 肉眼判斷結(jié)果，以生長對照孔為依據(jù)，Amb為完全抑制即MIC100作為觀察終點(diǎn)，液體清亮；其余三種藥以80%抑制作為觀察終點(diǎn)，菌體生長明顯減少，液體輕微渾濁，即MIC80為觀察終點(diǎn)，同時(shí)陽性生長對照中生長良好，空白對照清亮，無菌生長，質(zhì)控菌株MIC值在CLSI M27-A2方案規(guī)定的范圍內(nèi)，才能判斷實(shí)驗(yàn)的有效性。 2實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.1質(zhì)控菌株對抗真菌藥物的敏感性 質(zhì)控菌株對抗真菌藥物的MIC值符合CLSI M27-A2 方案關(guān)于質(zhì)控菌株標(biāo)準(zhǔn)的要求[1]。 2.2四種常用抗真菌藥物對45株念珠菌的敏感性（ MIC值）分布見表1至表4. 表1 FCZ對45株念珠菌MIC值（μg/mL） 組別 ≥64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 ≤0.125 累計(jì) 4 1 4 9 10 4 3 6 3 0 表2 5-FC對45株念珠菌MIC值（μg/mL） 組別 ≥64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 ≤0.125 累計(jì) 3 0 0 1 1 3 2 0 1 34 表3 KCZ對45株念珠菌MIC值（μg/mL） 組別 ≥16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.06 ≤0.03 累計(jì) 0 0 1 1 1 2 2 5 8 25 表4 Amb對45株念珠菌MIC值（μg/mL） 組別 ≥16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.06 ≤0.03 累計(jì) 0 0 9 7 7 14 6 1 1 0 2.3四種常用抗真菌藥物對45株念珠菌敏感性（MIC值）的異同。 5-FC和KCZ對45株念珠菌的敏感性（MIC值）分布都呈偏態(tài)分布（圖1和圖2）。5-FC對念珠菌的MIC值主要分布于“≤0.125”范圍內(nèi)（圖1），75.6%的念珠菌MIC值分布于此范圍內(nèi)。KCZ對念珠菌的MIC值主要分布于“≤0.03”范圍內(nèi)（圖2），55.6%的念珠菌MIC值分布于此范圍內(nèi)。其余各濃度階段都有一定量的念珠菌分布，雖然分布的量上有一定的差異，但主次較明顯。就體外藥物敏感試驗(yàn)而言，兩組藥的敏感菌株較多，劑量依賴性菌株和耐藥性菌株較少。 圖1 5-FC對45株念珠菌的敏感性（MIC值）分布 圖2 KCZ對45株念珠菌的敏感性（MIC值）分布 FCZ和Amb對45株念珠菌的敏感性（MIC值）分布都呈正態(tài)或近似正態(tài)分布（圖3和圖4）。FCZ對念珠菌的MIC值主要分布于“4g/ml”范圍內(nèi)（圖3），22.2%的念珠菌MIC值分布于此范圍內(nèi)。Amb對念珠菌的MIC值主要分布于“0.5 mg/ml”范圍內(nèi)（圖2），31.1%的念珠菌MIC值分布于此范圍內(nèi)。就體外藥物敏感試驗(yàn)而言，F(xiàn)CZ的敏感性菌株較多，劑量依賴性和耐藥性菌株都較少。AMB敏感菌株最多，劑量依賴性敏感菌株次之，無耐藥菌株。 圖3 FCZ對45株念珠菌的敏感性（MIC值）分布 圖4 Amb對45株念珠菌的敏感性（MIC值）分布 2.4四種常用抗真菌藥物的敏感性 關(guān)于念珠菌對抗真菌藥物的敏感性的判斷，CLSI推薦的M27方案僅對氟康唑和伊曲康唑作了規(guī)定，而其他的抗真菌藥物未做規(guī)定，本文參照Priscilla de Laet Sant’Ana [2]等人的規(guī)定和E-Test方法[3]，判斷念珠菌的敏感程度，分為敏感（susceptibile ，S）、 劑量依賴性敏感（susceptibile dose-dependent ，SDD）、和耐藥（resistant ，R）三種（表5），根據(jù)此判斷標(biāo)準(zhǔn)將45株念珠菌對4種藥物的敏感性如下（表６） ?！? 表5 抗真菌藥物敏感性判斷標(biāo)準(zhǔn)(MIC) MIC(μg/ mL) S SDD R 氟康唑( FCZ) ≤8 16～32 ≥64 酮康唑( KETO) ≤0.125 0.25～0.5 ≥1 氟胞嘧啶( 5-FC) ≤8 16 ≥32 兩性霉素 B( Amb) ≤1 2～4 ≥8 S: susceptible（敏感）、SDD: susceptible dose-dependent（劑量依賴性敏感）、R: resistant（耐藥） 表6 45株念珠菌對4種藥物的敏感性 S SDD R FCZ 36 5 4 AMB 29 16 0 5-FC 42 0 3 KCZ 38 4 3 2.5四種抗真菌藥物的耐藥率比較 R S/SDD 合計(jì) 耐藥率（%） FCZ 4 41 45 8.9 AMB 0 45 45 0 5-FC 3 42 45 6.7 KCZ 2 43 45 6.7 合計(jì) 9 171 180 5 經(jīng)卡方經(jīng)驗(yàn)x2=3.791,P=0.285,四種藥物的耐藥率無顯著差異。 2.6四種抗真菌藥物的敏感率比較 S SDD/R 合計(jì) 敏感率（%） FCZ 36 9 45 80 AMB 29 16 45 64 5-FC 42 3 45 93 KCZ 38 7 45 84 合計(jì) 145 35 180 81 經(jīng)卡方經(jīng)驗(yàn)x2=12.521,P=0.006,四種藥物的敏感率有顯著差異，經(jīng)鐵和兩兩經(jīng)驗(yàn)。 (1) FCZ與AMB，Z=?1.638，p =0.101，F(xiàn)CZ與ZMB藥物敏感性無顯著差異。 (2)FCZ與5-FC，Z=?1.850，P=0.064，F(xiàn)CZ與5-FC藥物敏感性無顯著差異。 (3)FCZ與KCZ，Z=?0.548，P=0.583，F(xiàn)CZ與KCZ藥物敏感性無顯著差異。 (4)AMB與5-FC，Z=?3.359，P=0.001，F(xiàn)CZ與KCZ藥物敏感性有顯著差異，5-FC的敏感性比AMB好。 (5) AMB與KCZ，Z=?2.163，P=0.031，F(xiàn)CZ與KCZ藥物敏感性有顯著差異，KCZ的敏感性比AMB好。 (6)5-FC與KCZ，Z=?1.134，P=0.182，5-FC與KCZ藥物敏感性無顯著差異。 即：45株對四種抗真菌藥物的耐藥率無顯著性差異，敏感率除5-FC的敏感性比AMB好（P=0.001），KCZ的敏感性比AMB好（P=0.031）外，其余藥物的敏感率無顯著性差異（P＞0.05） 。 3討論 體外抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)影響因數(shù)較多，如試驗(yàn)方法、培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、PH、接種菌量、培養(yǎng)時(shí)間等，其中一項(xiàng)或幾項(xiàng)發(fā)生改變都會影響試驗(yàn)的結(jié)果，CLSI推薦的M27-A2[1]方案中規(guī)定，微量液基稀釋法測酵母樣真菌（單細(xì)胞真菌）的藥物敏感試驗(yàn)，必須設(shè)立對照和質(zhì)控株，對照包括空白對照和陽性生長對照。設(shè)立質(zhì)控菌株是為了增加試驗(yàn)菌株的可比性，質(zhì)控菌株必須有明確的來源，可靠的保存方式并按規(guī)定使用。所測定的質(zhì)控株MIC值在該方案中推薦的范圍內(nèi)方認(rèn)為待測菌株的MIC值是有效的。 目前，有關(guān)念珠菌體外抗真菌藥物敏感性和體內(nèi)藥物敏感性的關(guān)系還不清楚，CLSI規(guī)定的判斷標(biāo)準(zhǔn)僅是屬于體外抗真菌藥物敏感性的界定，并非體外耐藥就意味著體內(nèi)也耐藥，同樣，體外敏感的在體內(nèi)也不一定敏感，畢竟人體是一個(gè)復(fù)雜的環(huán)境，藥物在體內(nèi)受多方面的影響，而且機(jī)體各指標(biāo)變化快，難于控制到像體外一樣恒定，使得抗真菌藥物在體內(nèi)的用藥機(jī)制更加復(fù)雜，但是，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化的體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)仍可以作為臨床體內(nèi)用藥的大體判斷。 在過去的20多年中，隨著AIDS出現(xiàn)、腫瘤患者對化療的廣泛使用及器官移植的普遍開展，真菌的機(jī)會性感染呈日益增多趨勢，而抗真菌藥物在臨床的推廣使用，又導(dǎo)致了真菌耐藥問題的出現(xiàn)。目前，在抗真菌藥物非常有限的條件下，耐藥真菌的出現(xiàn)無疑給臨床治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)，這一點(diǎn)已引起國內(nèi)外學(xué)者的矚目。1958年，灰黃霉素的出現(xiàn)標(biāo)志著真菌病系統(tǒng)治療的開始，但因其毒性大、抗菌譜窄而未能在臨床廣泛使用。隨后20世紀(jì)70～90年代，唑類抗真菌藥物如：酮康唑（KCZ）、氟康唑（FCZ）、伊曲康唑（ICZ）相繼問世，成為治療系統(tǒng)性念珠菌的有效藥物，對HIV陽性人群的念珠菌病有滿意的療效。隨著唑類藥物的廣泛使用，臨床上對耐藥菌株的報(bào)道日益多見。1978年，Holt和Azmi首先報(bào)道1例念珠菌尿路感染的患兒在連續(xù)服用9周咪康唑后，產(chǎn)生了對該藥的抵抗。此后世界各地開始關(guān)注真菌的耐藥問題，并為此開展了大量的調(diào)研工作。 到目前為止，還沒有一種像細(xì)菌那樣統(tǒng)一、規(guī)范、系統(tǒng)而快速的抗真菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)方法，臨床使用的抗真菌藥物存在較大的盲目性。1982年CLSI成立了抗真菌藥物試驗(yàn)專門委員展開研究，經(jīng)過20多年的努力，多次修訂，對影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的各種因素進(jìn)行詳細(xì)而具體的規(guī)定，形成統(tǒng)一規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，第一次詳細(xì)、規(guī)范、統(tǒng)一地制定了抗真菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)方法，可堪稱真菌史上具有劃時(shí)代意思的里程碑。但是，由于其操作步驟繁瑣、耗時(shí)、需要大量的人力物力，另外，唑類藥物對部分念珠菌抑制生長出新拖尾現(xiàn)象，敏感性結(jié)果的判斷較困難，具有一定的主觀性。目前，僅在科研機(jī)構(gòu)作為學(xué)術(shù)上的研究較多，不宜作為臨床實(shí)驗(yàn)的常規(guī)檢查，取而代之的是與微量稀釋法具有較高吻合率、而操作簡單、重復(fù)率高、省力快速的E?Test法[4，5，6，7]。 即便如此，CLSIM-27A仍不失為一種操作簡單、消耗低廉、重復(fù)性高、達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化和得到各實(shí)驗(yàn)室廣泛認(rèn)可的體外抗真菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)方案，本實(shí)驗(yàn)即采用CLSI推薦的微量液基稀釋法，對45株念珠菌進(jìn)行藥敏測定。實(shí)驗(yàn)中仍出現(xiàn)某些念珠菌對唑類藥物的拖尾現(xiàn)象，24h判斷為敏感，而48h判斷時(shí)卻為耐藥，處理方法參照文獻(xiàn),以24h的結(jié)果較為恰當(dāng)。有部分菌株生長較緩慢，需48h或72h才可以看見菌落，則以48h或72h作為觀察終點(diǎn)。每次實(shí)驗(yàn)都設(shè)立質(zhì)控菌株（按照CLSI M27-A方案推薦），陽性生長對照和空白對照，只有當(dāng)指控菌株和對照組的結(jié)果在參考范圍內(nèi)，試驗(yàn)菌株才有意義，一旦質(zhì)控菌株超出質(zhì)控范圍，則需要重新開始試驗(yàn)。微量稀釋法結(jié)果判斷有兩種方法，一是通過目測判斷終點(diǎn)，此法相對較簡單省時(shí)省事，但具有一定的主觀性，同樣的結(jié)果不同的人觀察會有一定差異，而有的菌株對唑類藥物有拖尾現(xiàn)象，使得終點(diǎn)判斷更加困難，始終保持一個(gè)人固定觀察結(jié)果考驗(yàn)減小誤差；另一種方法是機(jī)測判斷終點(diǎn)[8]，通過分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀，測定之前用微量振蕩器搖勻，波長492nm閱讀結(jié)果（以空白對照調(diào)零），MIC值計(jì)算：T%≥C%×TK+0.5×（100-TK%），其中T為透光率， K為空白對照透光率，將公式轉(zhuǎn)化為：A≤0.301-log（1+ 10-AK）,即MIC-A。該方法客觀準(zhǔn)確，不會因認(rèn)為因素而影響結(jié)果，但需要特殊設(shè)備，操作計(jì)算繁瑣。
作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 通過對分離的大理地區(qū)陰道念珠菌的藥物敏感性的檢測，為臨床抗真菌藥物的選擇提供依據(jù)。采用美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(National Committee for Clinical Laboratory standards,NCCLS )推薦的微量稀釋法測定念珠菌的藥物敏感性.
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 該課題實(shí)驗(yàn)方法在所依托實(shí)驗(yàn)室為成熟方法，NCCLS推薦的微量稀釋法準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，有藥物和試劑用量少、操作較簡便等特點(diǎn)。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- 近年來，念珠菌感染明顯升高。加上人口的老齡化、艾滋病、免疫抑制劑、廣譜抗生素等藥物的廣泛使用。導(dǎo)致臨床上酵母樣真菌感染率逐年遞增，并對抗真菌藥物表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，給臨床治療該類疾病帶來困難。通過對分離的大理地區(qū)陰道念珠菌的藥物敏感性的檢測，為臨床抗真菌藥物的選擇提供依據(jù)。
學(xué)術(shù)論文摘要
- [摘要] 目的 通過對分離的大理地區(qū)念珠菌的藥物敏感性的檢測，為臨床抗真菌藥物的選擇提供依據(jù)。方法 采用微量液基稀釋法，測定念珠菌對氟康唑（Fluconazole, FCZ）、酮康唑（Ketoconazole, KCZ）、5-氟胞嘧啶（5-flucytosine,5-FC）和兩性霉素B（Amphotericin, AMB）共4種常用抗真菌藥物的敏感性（MIC值）。結(jié)果 45株健康人群陰道念珠菌對抗真菌藥物FCZ 、AMB、5-FC 、KCZ的耐藥率分別為：8.9%、0%、6.7%、6.7%，敏感率分別為80%、64%、93%、84%。 結(jié)論 45株念珠菌對四種抗真菌藥物的耐藥率無顯著性差異，敏感率除5-FC的敏感性比AMB好（P=0.001），KCZ的敏感性比AMB好（P=0.031）外，其余藥物的敏感率無顯著性差異（P＞0.05）。上述四種臨床常用抗真菌藥物可選作陰道念珠菌病的治療，但應(yīng)注意某些菌株的劑量依賴性敏感和耐藥現(xiàn)象。
獲獎(jiǎng)情況
- 無
鑒定結(jié)果
- 無
參考文獻(xiàn)
- [1]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts. Approved standard,2nded.M27-A2.Wayne,Pa: National Committee for Clinical Laboratory Standards,2002. [2]Priscilla de Sant’Ana,Eveline Pipolo Milan,Roberto Martinez,et al.Multicenter Brazilian study of oral Candida species isolated form aids patients. Mem Inst Oswaldo Cruz,Rio de Janeiro. 2002; 97(2): 253-257. [3]董婷，魏惠永，黃革.60株酵母菌樣真菌的藥敏試驗(yàn)分析.中國抗感染化療雜志。2005；5（4）：225-228. [4]Davey.KG, A.D.Holmes, E.M. Johnson, et al. Comparative evaluation of Fungitest and broth microdilution methods for antifungal drug susceptibility testing candida species and Cryptococcus neoformans. J.Clin.Microbiol.1988;36:926-930 [5]Willinger,B.,P.Apfalter,A.M.Hirschl,et al.Susceptibility testing of Candida species: comparison of NCCLS microdilution method with Fungitest. Diagn.Microbiol. Infect.Dis.2002;38:11-15.
同類課題研究水平概述
- 現(xiàn)有基礎(chǔ)： 1、指導(dǎo)教師白麗教授，碩士生導(dǎo)師。長期從事醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、教學(xué)及科研，指導(dǎo)大學(xué)生科研取得了良好的成果，并主持過多項(xiàng)云南省及國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目，具有豐富的經(jīng)驗(yàn)。曾去澳大利亞和美國學(xué)習(xí)研究多年，具有堅(jiān)實(shí)的科研素養(yǎng)。 2、念珠菌的采集、分離和鑒定工作已經(jīng)由白麗教授實(shí)驗(yàn)室完成，微量稀釋法是較成熟的技術(shù)，為課題的順利進(jìn)行打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 3、本課題所依托的大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)室是云南省示范實(shí)驗(yàn)室，大理學(xué)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，已具備了完成本課題所需的全部儀器設(shè)備，能夠保證課題的順利進(jìn)行。 4、本課題組成員全部來自于臨床醫(yī)學(xué)本科大三學(xué)生，有扎實(shí)的專業(yè)理論知識和較強(qiáng)的動手操作能力，是一個(gè)充滿活力善于探索的團(tuán)隊(duì)。 研究現(xiàn)狀： 近十年來針對真菌藥物敏感性開展了多項(xiàng)研究,其中研究較多且較清楚的是酵母樣真菌尤其是念珠菌對唑類藥物的藥物敏感性。許多學(xué)者對此進(jìn)行了深入研究和報(bào)道。劉維達(dá)等（1996年）對52株白色念珠菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)13.4%的菌株耐藥；李季等對65例生殖器念珠菌病的分離株進(jìn)行藥敏檢測，結(jié)果顯示5-FC、KCZ、AMB、咪康唑、益康唑、制霉菌素的耐藥率依次為：44.6%、9.23%、4.62%、20%、12.31%、4.62。此外，Magaldi等進(jìn)行臨床觀察發(fā)現(xiàn)事先曾接受過抗真菌治療的患者，其FCZ耐藥率高達(dá)45%，而未曾接受過抗真菌治療的患者其FCZ耐藥率為10% 。 據(jù)研究報(bào)道顯示目前在臨床上酵母樣真菌感染率逐年遞增，并對抗真菌藥物表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，成為真菌病治療的一大難題。但不同國家和地區(qū)耐藥狀況有所不同,不同菌種對不同的藥物耐藥率也存在較大差異。大理地區(qū)健康人群陰道念珠菌藥物敏感性的相關(guān)研究、報(bào)道較少，因此開展大理地區(qū)健康人群陰道念珠菌藥物敏感性試驗(yàn)十分必要。
