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基本信息
- 項(xiàng)目名稱：
- 人RNA甲基轉(zhuǎn)移酶hHEN1對miRNAs表達(dá)的調(diào)控及其意義
- 小類：
- 生命科學(xué)
- 簡介：
- miRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。植物擬南芥中研究發(fā)現(xiàn)miRNAs甲基轉(zhuǎn)移酶-HEN1可使miRNAs甲基化，調(diào)控miRNAs表達(dá)水平。人類存在HEN1同源基因（hHEN1），其生物學(xué)意義未知。本課題研究腫瘤細(xì)胞中HEN1在基因、mRNA、蛋白水平的變化，及體外人工過表達(dá)和沉默hHEN1后，對細(xì)胞的影響。從而評價(jià)其醫(yī)學(xué)意義，有可能為腫瘤的診斷和治療提供新策略。
- 詳細(xì)介紹：
- miRNAs是細(xì)胞表達(dá)的一類非編碼小RNAs，在基因表達(dá)中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。近年發(fā)現(xiàn)miRNAs在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞及其不同類型間表達(dá)有差異。miRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。植物擬南芥中研究表明，RNA甲基轉(zhuǎn)移酶-HEN1可使miRNAs甲基化，大多認(rèn)為甲基化可防止其被其他酶識別，起到調(diào)控miRNAs表達(dá)的作用。人類存在HEN1同源基因（hHEN1），位于第1號染色體第59開放閱讀框（C1orf59，GeneID: 113802），并且HEN1發(fā)揮功能的充分必要結(jié)構(gòu)域高度保守，但其生物學(xué)意義未知。本課題研究腫瘤HEN1在基因、mRNA、蛋白水平的變化，及體外人工過表達(dá)和沉默hHEN1后，對細(xì)胞的影響。 首先克隆并測序多種腫瘤細(xì)胞系（HepG2、PLC5、Caco-2、SW620、SW480、HeLa）的hHEN1基因，發(fā)現(xiàn)在上述細(xì)胞均無突變 。然后，Realtime PCR定量正常和腫瘤細(xì)胞中hHEN1的mRNA，觀察是否有不同。最后，克隆hHEN1基因，構(gòu)建原核（pET31+）和真核（pCDNA3.1）表達(dá)載體。原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，收獲hHEN1蛋白, 免疫動物獲得抗體，western blot檢測正常與腫瘤細(xì)胞hHEN1蛋白的表達(dá)量；真核表達(dá)載體、hHEN1 siRNA、脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，并分別在不同時(shí)間點(diǎn)、不同劑量組， Realtime PCR定量hHEN1的mRNA和miRNAs， western blot定量hHEN1蛋白，觀察細(xì)胞表型變化。從而評價(jià)其醫(yī)學(xué)意義，有可能發(fā)現(xiàn)腫瘤發(fā)生的一個(gè)新機(jī)制，可能提供一種腫瘤的分子診斷方法，可能提供一種腫瘤的藥物治療靶點(diǎn)。
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作品專業(yè)信息
撰寫目的和基本思路
- 研究人RNA甲基轉(zhuǎn)移酶hHEN1對miRNAs表達(dá)的調(diào)控及其意義，從而為腫瘤的診斷和治療提供新策略。 本課題研究腫瘤細(xì)胞HEN1在基因、mRNA、蛋白水平的變化，及體外人工過表達(dá)和沉默HEN1后，對細(xì)胞的影響。
科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處
- 人HEN1位于第1號染色體第59開放閱讀框（C1orf59，GeneID: 113802），并且HEN1發(fā)揮功能的充分必要結(jié)構(gòu)域高度保守。本研究著眼于人HEN1在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)特點(diǎn)，通過人工過表達(dá)和沉默觀察HEN1的改變對miRNAs表達(dá)、細(xì)胞表型的影響。是具有開創(chuàng)意義的。
應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義
- miRNA通過控制上百種基因的表達(dá)在細(xì)胞的增生、分化、凋亡過程中扮演重要角色，并且miRNAs作為癌基因或抑癌基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中亦有重要作用。若HEN1調(diào)控miRNAs的表達(dá)，那么HEN1 勢必影響上述過程，據(jù)此本研究可為腫瘤的診治提供新的策略。
學(xué)術(shù)論文摘要
- miRNAs是細(xì)胞表達(dá)的非編碼小RNAs，在基因表達(dá)中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。近年發(fā)現(xiàn)miRNAs在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞及其不同類型間表達(dá)有差異。miRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。植物中對miRNAs表達(dá)調(diào)控因素研究表明，RNA甲基轉(zhuǎn)移酶-HEN1可使miRNAs甲基化，大多認(rèn)為甲基化可防止其被其他酶識別，起到調(diào)控miRNAs表達(dá)的作用。人類存在HEN1同源基因（hHEN1），其生物學(xué)意義未知。本課題研究HEN1在基因、mRNA、蛋白水平的變化，及體外人工過表達(dá)和沉默hHEN1后，對細(xì)胞的影響。從而評價(jià)其醫(yī)學(xué)意義，有可能為腫瘤的診斷和治療提供新策略。
獲獎情況
- 2010年 哈爾濱 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)春蕾計(jì)劃課外科技學(xué)術(shù)作品大賽特等獎
鑒定結(jié)果
- 未見有關(guān)人HEN1對miRNAs表達(dá)調(diào)控的報(bào)導(dǎo)，未見人HEN1與腫瘤關(guān)系的研究報(bào)導(dǎo)。
參考文獻(xiàn)
- 1.miRNAs 2.HEN1,RNA甲基轉(zhuǎn)移酶 3.基因測序 4.realtime PCR 5.Western blot
同類課題研究水平概述
- 自從1993年發(fā)現(xiàn)miRNAs以來，已有研究顯示，miRNAs參與生命進(jìn)程中一系列的重要過程，包括胚胎發(fā)育時(shí)序、干細(xì)胞保存、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、抗病毒防御、腫瘤的發(fā)生發(fā)展、細(xì)胞死亡等方面。miRNAs在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞及其不同類型間表達(dá)量有差異。目前miRNAs表達(dá)異常原因的研究愈來愈多。植物擬南芥中研究表明，RNA甲基轉(zhuǎn)移酶-HEN1可使miRNAs甲基化，大多認(rèn)為甲基化可防止其被其他酶識別，起到調(diào)控miRNAs表達(dá)的作用。且細(xì)菌、植物、動物的HEN1氨基酸序列對比，發(fā)現(xiàn)有一段高度保守的區(qū)域。文獻(xiàn)報(bào)道體外實(shí)驗(yàn)人HEN1、芽孢桿菌HEN1及其保守序列均能使小RNAs甲基化，且保守序列的酶活性更高。經(jīng)過對Genbank檢索，人類的HEN1同源基因，位于C1orf59(GeneID: 113802)。但是有關(guān)人HEN1的研究少見，其對miRNAs表達(dá)的影響，及在腫瘤中的作用研究國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。
